3,6,9-置換唑衍生物之合成與生理活性; Synthesis and Biological Activity of 3,6,9-Substituted Carbazole Derivatives
112
0
0
全文
(2) 第三章 結論-------------------------------------------------------------------------------------------------59 第四章 實驗部份 第一節 試藥、溶媒與材料--------------------------------------------------------------------------------60 第二節 重要儀器-----------------------------------------------------------------------------------------------62 第三節 化合物之合成---------------------------------------------------------------------------------------65 第四節 藥理活性測定方法------------------------------------------------------------------------------86. 參考文獻-----------------------------------------------------------------------------------------------------------95 發表投稿之論文-----------------------------------------------------------------------------------------103 圖表 表一. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-9 對血小板凝集之抑制活性----------------29. 表二. 化合物 11-17 對血小板凝集之抑制活性---------------------------------------------32. 表三. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-9 對嗜中性白血球脫顆粒反應 之抑制活性--------------------------------------------------------------------------------------------- 35. 表四. 合物 11-19 對嗜中性白血球脫顆粒反應之抑制活性------------------------37. 表五. 化合物 20-24 對嗜中性白血球脫顆粒反應之抑制活性--------------------38. 表六. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-24 對嗜中性白血球過氧化物 形成反應之抑制活性-----------------------------------------------------------------------------40. 表七 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-24 對肥胖細胞之脫顆粒反應之 抑制活性---------------------------------------------------------------------------------------------------- 44 表八 化合物 2a-d、3a-d、4a-對 N9 細胞產生 NO 及 TNF-α之 抑制活---------------------------------------------------------------------------------------------------------49 表九 化合物之不同濃度對血癌細胞株(HL 60、U 937 及 K 562) 2.
(3) 細胞增殖率的影響------------------------------------------------------------------------------------52 表十 化合物對血癌細胞株(HL-60、U-937 及 K562)細胞增殖率之 IC50---------------------------------------------------------------------------------------------------------------57. 圖一 血小板凝血機轉----------------------------------------------------------------------------------------11 圖二 血小板活化機轉----------------------------------------------------------------------------------------12 圖三 嗜中性白血球與肥胖細胞之活化與作用----------------------------------------------16 圖四 細胞週期----------------------------------------------------------------------------------------------------19 圖五 化合物之不同濃度對血癌細胞株(HL60、U937 及 K562)細胞 增殖率的影響--------------------------------------------------------------------------------------------57. 標的化合物之圖譜. 3.
(4) 中文摘要. 為了尋找新型生物活性物質，著者以 9-benzylcarbazole-3-carbinol 為 先導化合物，合成了一系列衍生物，並評估其抗血小板活性、抗炎活性及 小神經膠質細胞之抑制活性，建立了初步化學結構與各生理活性的關係。 從本研究中發現化合物 9-(o-chlorobenzyl)carbazole-3-carbaldehyde (3b)、 9-(o-chlorobenzyl)carbazole-3-carbinol (4b)、9-(p-chlorobenzyl)carbazole-3carbinol (4d)及 9-benzylcarbazole-3-aldoxime (7)呈現顯著的抗血小板活 性，而且其抑制形態類似 YC-1。 化合物 3b 同時對嗜中性白血球脫顆粒反應及嗜中性白血球形成過氧 自由基呈現明顯的抑制活性，而化合物 4b 及 4d 只對嗜中性白血球脫顆 粒反應呈現強力的抑制活性而已，其 IC50 均為 2.0μM，相當於 TFP 6~7 倍的強度。 化合物 3b 及 4b 被確認為新型的小神經膠質細胞活化之抑制劑，經作 用機轉的探討結果，得知其作用機轉特異，為頗具潛力的前導化合物。 9-(m-. chlorobenzyl)carbazole-3-carbaldehyde. (3c) ， 9-benzylcarbazol. e-3-carbinol (4a)及 9-(m-chlorobenzyl)carbazole-3-carbinol (4c)，對 HL 60、 U 937 及 K 562 等人類血癌細胞株之增殖呈現顯著的抑制活性。. 4.
(5) Abstract. In order to search for biological active compound, 9-benzyl carbazole-3-carbinol was used as a lead compound, and a series of its derivatives has been prepared. The antiplatelet, anti-inflammatory, inhibitory effect on microglia cells and human leukemia cells lines of these carbazole derivatives were evaluated. The structure-activity relationships in each system were also examined. 9-benzyl. carbazole-3-carbaldehyde. (3a), (3b),. 9-(o-chlorobenzyl)carbazole-3-carbaldehyde 9-(o-chlorobenzyl)carbazole-3-carbinol -3-carbinol. (4d). and. (4b),. 9-(p-chlorobenzyl)carbazole. 9-benzylcarbazole-3-aldoxime. (7). demonstrated. significant antiplatelet activity. Their inhibitory profile is comparable to that of YC-1. Compound 3b showed simultaneously potent inhibition against neutrophil degranulation and neutrophil superoxide formation.Compound 4b and 4d demonstrated selective inhibition toward neutrophil degranulation with inhibitory potency (IC50 2.0 μM) equal about 6~7 times that of positive control TFP. Compounds 3b and 4b were identified as new class of inhibitors for. 5.
(6) microglia cell activation. Study of their action mechanism suggested that they act through unique mechanism and should be considered as novel lead compounds. for. further. exploration.. 9-(m-chlorobenzyl)carbazole-3-. carbaldehyde (3c), 9-benzylcarbazole-3-carbinol (4a) and 9-(m-chlorobenzyl) carbazole-3-carbinol (4c) demonstrated significant antiproliferation against HL 60, U 937 and K 562 leukemia cell lines.. 6.
(7) 第一章緒論 本. 論. 文. 主. 要. 的. 內. 是 容 (carbazole)類衍生物之化學合成以及. 其抗血小板、抗炎、抗過敏和抗癌活性的探討，因此，首先將 carbazole 類化合物之研究概況、血小板生理功能以及與炎症、過敏相關的嗜中性白 血球肥胖細胞生理功能，乃至巨噬細胞與小神經膠質細胞的生理功能分述 如下，作為本研究的背景資料。. 第一節. Carbazole 類化合物之研究概況. 壹、 Carbazole 類化合物之合成方法 Carbazole 類化合物早在 1872 年就從煤油、焦油中被分離出來，運用 於染料工業、高分子聚合物等化學工業上，當時即有 carbazole 類化合物 之合成報告 1-2，1964 年 Chakraborty 等從芸香科植物 Murraya koeniggi 分 離出 girinimbine 後，迄今已有數以百計的 carbazole alkaloid 被發現 3-4， 也因此 carbazole 類化合物之合成方法陸續出現於文獻中。在此僅將主要 的合成方法列述如下。. 一、 Graebe-Ullmann 合成方法 5 如 Scheme 1 所 示 ， 以 o-aminodiphenylamine (I) 為 起 始 物 ， 經 diazotization 後 形 成 benzotriazole 中 間 體. 7. (II) ， 進 而 加 熱 進 行.
(8) rearrangement，即形成 carbazole (III)。 NH2. N. HNO2. heat N. NaOH. N H. N H. N H. I. II. III. Scheme 1. 二、 Borsche 合成法 6 Scheme 2 所示，cyclohexanone phenylhydrazone (IV)經 H2SO4 處理形 成 tetrahydrocarbazole (V)後，再於 quinoline 中以 CuO 做為催化劑，加熱 即可 dehydrogenation 形成 carbazole (III)。 H2SO4. CuO Quinoline. N H. N. IV. N H. N H. V. III. Scheme 2. 三、 Tauber 合成法 7 如 Scheme 3 所示，2,2'-diaminodiphenyl 在 H2SO4 存在下，於 200 ℃ 8.
(9) 進行加壓反應，即可得到 carbazole (III)。 200 0C H2SO4. N H. NH 2. NH 2. IV. III. Scheme 3 四、 Fries 合成法 8 如 Scheme 4 所示，diphenylamine 之 2,2'-dihalogen derivatives (VII)或 2-amino-2'-hydroxydiphenyl (VIII)在 Zn dust 中加熱蒸餾，即可得到相對應 之 carbazole (IX)。 H3C. Br Cl. CH 3 dist. with. N H. CH3. CH3. H3C. Zn dust. N H. CH3. IX. VII. CH3 H3C. NH2. VIII. Scheme 4 9. OH. CH3.
(10) 五、 Smith-Brown 合成法 9 如 Scheme 5 所示，將化合物 IV 在 UV 光照射下加熱，即可得到 carbazole (III)。 hv +. heat. N2. N H III. N3 IV. Scheme 5. 六、 Carruthers 合成法 10 如 Scheme 6 所示，將 4-methoxy-4'-methyldiphenylamine (XI)利用光 化學合成法，可得到 carbazole 類化合物。. H3CO. CH3. hv. H3CO. CH3. n- hexane N H. N H. XI. XII. Scheme 6. 10.
(11) 七、. Chakraborty 合成法 11. 如 Scheme 7 所 示 ， 此 合 成 與 Borsche 方 法 類 似 ， 先 形 成 tetrahydrocarbazole 衍生物，只是所用原料與試藥不同，此法之產率比 Borsche 方法較高。. CH3 CH3O. NHNH2 + H3C. XIII. AcOH. O. H3CO N N. XIV. XV H2SO4. CH3. H3CO chloranil N H. N H. XVII. XVI. Scheme 7. 八、 Kureel 及 Chakraborty 等之合成法 12-13 如 Scheme 8 所示，Kureel、Chakraborty 及 Narasimhan 分別以不同合 成途徑合成 2-hydroxyl-3-methylcarbazole 之生物鹼。. 11.
(12) H3C. Br. CH3 a. b. H3CO. NO2 XVIII. N H. XIX. H3C. c. H3CO. OCH3. NH2. OCH3. XX. H3C. CH3. d H3CO. N H. XXI. N H. XXII. OCH3. XXIII e. CH3 N H. CH3. O N H. g. OH. XXIV. XXV. CH3. N H. O. OH. XXIX. O. CH3. O. OH. N. CH3. + C OH ClN2 H XXVI. XXVII. a : 2-nitrobromobenzene e : HBr / AcOH. b : Triethyl. N H. f. OH. XXVIII. phosphite. c : 2-Hydroxycyclohexanone. f : HCl / AcOH g:Hung-Minlon Dehydrogenation. Scheme 8. 12. d : Pd / C.
(13) 九、 Chakraborty 合成法 14 如 Scheme 9 所示，Chakraborty 等仿照生合成途徑，提出 carbazole 合成法。 COOH. COOH. HOOC. + NH2. OH. H2C. NH. C=O C=O. XXX. O C. O H. XXXI. OH OH. XXXII. O C OH CO2 N H. N H. III. XXXIII. Scheme 9. 十、. Mahboobi 合成法 15. 最近 Mahboobi 等提出利用 intramolecular Michael addition 合成各種不. 13.
(14) 同取代基之 carbazole 衍生物。 OH R1. R1. b. a CHO. N H. R2. XXXIV A, B. CH3. CHO. N R2. R1. N. Bz. R2. XXXV A, B. Bz. XXXVI A, B. c NO2. OH O. O. R1 CH3. R1. R2. N. N. f. or. CH3. d. e N. R1 CH3. R2. Bz. R2. Bz. XXXVIII A, B. XXXIX A, B. Bz. XXXVII A, B. g NO2 O R1. NO2 O CH3. R1. CH3. h N R2. N. Bz. R2. Bz. IVI A, B. IV A, B. A: R 1= OCH 3 , R2 =H B : R1= H , R2 = OCH3. Scheme 10 a : BzBr / Bu 4NBr / NaOH OH b: ClPh 3P. CH3. / 2 eq. LiHDMS / 0 oC / THF. c : Pd / C / H 2 / EtOH d : (CH 3)2NCH= CHNO2 / TFA / 0. oC. e : (COCl) 2 / DMSO / NEt 3 / - 63 oC f : Pd / C / DMF / 0 oC g : Triton B / THF h : DDQ /dioxane or p -chloroanil / mesitylene. Scheme 10. 上述文獻記載的 carbazole 之合成方法，主要的重點是在於 carbazole 環的合成及生物鹼的合成，本研究標的化合物之合成，所利用的起始原料 14.
(15) 已有市售品，所以未直接利用文獻所記載的方法。將來若要延續本研究成 果，合成 carbazole 環有各種不同取代基的衍生物時，就可以應用上述文 獻方法，合成 carbazole 環上有各種取代基的化合物作為起始原料。. 貳. Carbazole 類化合物之生理活性. 如第一節所述，已知的 carbazole 生物鹼以及被合成的 carbazole 衍生 物相當多，其生物活性的探討主要是集中於抗癌活性方面 16-23，其中有些 化合物活性甚佳，所以也有一些作用機轉探討之報告 19-21。其它也有關於 carbazole 類化合物具有 anti HIV 24、antioxidant 25、antifungus 26、antibacteria 27. 以及 antiplatelet 28 等活性之相關報導，但是關於抗炎及抗過敏活性之探. 討尚未見諸文獻。. 15.
(16) 第二節. 血小板之生理功能. 血小板是血球細胞中最小的細胞，由巨核細胞的細胞質分裂而成，不 具有細胞核及大部份蛋白質的生成能力，通常生命週期約十天左右。在止 血生理機能方面，血小板扮演著非常重要的角色，當內皮細胞受損或血管 破 裂 受 傷 時 ， 血 管 先 收 縮 ， 血管內皮細胞下的基質(如 collagen、 von Willebrand factor 、 fibronectin 、 laminin 與 vitronectin) 與 adenosine 5-diphosphate (ADP)會先釋出，促使血小板改變形狀，以便附著於受損部 位，引發血小板的活化與釋出反應. 29. 。另外組織血栓形成素 (tissue. thromboplastin)由受傷的組織形成釋出，再經由凝血活化機轉外在途徑， 轉變成血栓素(thrombin)，血栓素會使纖維蛋白原(fibrinogen)轉變成纖維 蛋白(fibrin)，纖維蛋白再受到 ADP 的活化，與受傷組織的血小板結合， 形成凝血塊(fibrin clot)，再聚集形成堅固的血小板止血栓 (thrombus)，達 到止血效果（圖一）30。. 16.
(17) 圖一、血小板凝血機轉. 血小板的活化劑如 collagen、ADP、thrombin、thromboxane A2 (TXA2 )、platelet-activiting factor (PAF)、epinephrine 及 serotonin 與血小板 細胞膜上的接受體結合後，經由細胞內訊息傳遞者如 G protein (GTP binding protein)，引發 phospholipase C (PLC)、phospholipid A2 (PLA2)及 cyclooxygenase 等活化與釋出。例如 phospholipid 先受到 PLA2 作用轉變成 arachidonic acid (AA)，而 AA 再被 cyclooxygenase 轉變成 prostaglandin. 17.
(18) endoperoxides (PGG2, PGH2)，其中 PGH2 於血小板中經過 thromboxane A2 synthetase 的作用，產生 TXA2，引發血小板凝集作用。PGH2 於血小板中 若經由 prostacyclin I2 synthetase 的作用，產生 prostacyclin I2 (PGI2)，而 PGI2 則具有抑制血小板凝集作用 31 （圖二） 。. 圖二、血小板活化機轉. 血小板止血栓 (thrombus)能在受損組織產生止血作用，但也很容易體 內造成栓塞 (embolism)，因此在血液凝集末期時，纖維蛋白溶解系統 (fibrinolytic system)會運轉，溶解由血栓脫落下來之小血凝塊，避免阻塞 體內的小血管，同時抑制血小板凝集之物質也會開始增加，阻止血小板繼 續凝集。其中如 plasminogen 受到 tissue plasminosen activator (t-PA)的活化 與 fibrin 結合成 fibrin-t-PA-plasminogen 之錯合物再轉變成 fibrin-plasmin， 18.
(19) 進而將 fibrin 分解使血栓溶解(lysis of thrombus ) 32。 在正常生理狀態下為了維持血小板不被活化，血管內皮細胞 (endothelium cell)可釋出 PGI2、endothelium-derived relaxing factor (EDRF) 及 nitric oxide (NO)等物質，能活化血小板的 adenyl cyclase 與 soluble guanylate cyclase (sGC)。EDRF 是一種 cAMP 的促進劑；NO 則能直接刺 激 sGC 活 化 ， sGC 能 催 化 GTP 轉 變 成 cGMP 以 及 抑 制 cGMP； phosphodiesterase 將 cGMP 裂解成 5'-GMP 之作用，此兩種作用機轉都能 使 cGMP 增加。另外 NO 也會間接活化內皮細胞的 cyclooxygenase 促使 PGI2 產生，PGI2 能使 cAMP 含量增加。當血小板之 cAMP 及 cGMP 含量 上升時，血小板的凝集作用會被抑制，血小板的止血功能正常就不會引起 血栓或栓塞，而造成多種血管性疾病 33。. 本論文之實驗應用上述之原理，分別以 thrombin、collagen 及 PAF 引 發血小板之凝集，測試化合物抑制其凝集的活性。. 19.
(20) 第三節. 嗜中性白血球與肥胖細胞之生理功能. 嗜中性白血球 (neutrophils)為一種有高度運動性具吞噬作用之顆粒 性白血球(granulocytes)，血液中之正常濃度為 3-5 ×10. 6. / ml。當身體組. 織受傷 (tissue damage )或遭感染 (infection)時會急速增加，並由血液移到 受損組織中，經活化作用後，釋出 neutral proteases、acid hydrolases、 phospholipase、myeloperoxidase 及 cationic protein 等物質以分解吞食細菌 34. 。 嗜中性白血球的活化途徑需由多重訊息傳遞，其中可經由化學誘引. 劑(chemoattractants ) 如 ECF-A 及 NCF 這些化學媒介物而活化的嗜中性 白血球，會產生高反應性之過氧自由基 (superoxide anion; O2-)、羥基自由 基 (hydroxy radical; OH-)及過氧化氫 (hydrogen peroxide; H2O2)等具有細 胞毒性的 oxygen species，引起如老化 (aging)，缺血性再灌注時引起損傷 (ischemia reperfusion injury)，類風濕性關節炎 (rheumatoid arthritis)，感染 性腸炎 (inflammatory bowel disease)等細胞損傷；同時活化的過程中會釋 出 lysozymal enzyme 造成肺氣腫 (pulmonary emphysem)，類風濕性關節 炎，動脈粥硬化 (arteriosclerosis)，腎小球腎炎 (glomerulonephritis)等， 因組織蛋白分解 (tissue proteolytic disruption)而引起之疾病（圖三）35.。 另外活化途徑由 fMLP、LTB4 等化學誘引劑誘導嗜中性白血球細胞膜上 的接受體與 G protein 結合會活化抑制性的 Gi protein，降低細胞內 adenyl 20.
(21) cyclase 量 36。 肥胖細胞（mast cell）在即時型過敏（anaphylaxis）反應中扮演著重 要角色，當肥胖細胞受到物理或化學性刺激時，被活化而引發釋放反 應，多種媒介物（mediator）即被釋放出來，如 vasoactive mediators （histamine、kininogenase、PAF） 、spasmogens（PGD2, LTC4, LTD4）及 化學誘引劑（ECF-A, NCF）等，這些物質會導致血管擴張、通透性增 加或引發支氣管平滑肌、粘膜水腫及分泌增加，造成過敏及氣喘發生 37-38. 。因此藥物若能抑制肥胖細胞的活化，對過敏及氣喘症狀的預防與. 治療將會有改善作用。 本 論 文 抗 發 炎 實 驗 是 以 fMLP (N-formylmethionyl-leucylphenylalanine)引起嗜中性白血球釋放β-glucuronidase 及 lysozyme 後， 篩選出具有抑制作用之化合物，另外也測試化合物對因 fMLP 及 PMA （phorbol 12-myristate 13-acetate）引起嗜中性白血球釋放過氧自由基形 成之抑制作用。篩選抗過敏化合物之實驗，以 compound 48/80（a polymer of N-(p-methoxyphenylethyl) methylamine with formaldehyde）誘發肥胖細 胞釋放β-glucuronidase 及 histamine 反應之抑制活性。. 21.
(22) 22.
(23) 圖三、嗜中性白血球與肥胖細胞之活化與作用. 23.
(24) 第四節. 巨噬細胞與小神經膠質細胞之生理功能. 巨噬細胞 (Macrophages )是免疫細胞之一種，參與身體之免疫作用。 當免疫系統被病原菌 (microbial pathogen)引發後，巨噬細胞會受到細菌性 內毒素 (lipopolysaccharides; LPS)活化，產生一氧化氮 (nitric oxide， NO) ， 腫 瘤 壞 死 因 子 (tumor necrosis factors ， TNF) 及 前 列 腺 素 ( prostglandins，PGs)等發炎物質 39。 NO 能 引 發 身 體 內 巨 噬 細 胞 誘 導 毒 性. (macrophage-induced. cytotoxicity)，過量時會引起敗血性休克 (septic shock)，而 TNF 與致死性 休克 (lethal shock)、組織損傷，急性慢性發炎及惡病質 (cachexia)等病症 有關。PGE2 和血管擴張、紅腫等發炎現象有關 40-41。 小神經膠質細胞 (microglia cell)則是腦中的巨噬細胞，具有保護腦細 胞之功能，和大多數的發炎、感染及中樞神經系統之退化性疾病皆有關 42-43. 。 當腦中神經元產生局部缺血及退化性疾病時，小神經膠質細胞快速. 活化，進行吞噬作用及促使 NO、細胞激素（cytokines）、前列腺素自由 基 (free radical)等發炎媒介物釋出 44-46。這些物質若過量產生則對細胞有 害，如引起多發性硬化 (multiple sclerosis)病變 infection ). 48. 47. ，愛滋病感染 (HIV. 和中樞神經系統退化性疾病 49-51，如阿茲海默症(Alzheimer's. disease)等病變。若能有效的抑制小神經膠質細胞活性，則對上述各種中. 24.
(25) 樞神經系統疾病將會有效的改善。 本論文對由 LPS 誘發 RAW 264.7 (mourse macrophage-like)及 N9 (murine microphage)細胞株之 TNF-α形成及 NO 蓄積作用，以合成的化 合物進行抑制活性的篩選。. 25.
(26) 第五節 細胞週期之生命機制. 細胞要維持正常大小與數目，保持保持增值與凋亡間的動態平衡，需 要有精確的細胞週期(cell cycle)的調控，細胞週期可分為 G0 / G1、S、G2 / M 等時期，當細胞週期失去調控時則有可能發展成為腫瘤細胞。. 圖四、細胞週期 52. 26.
(27) 對於抑制腫瘤細胞的生長，可經由細胞週期的停頓、誘導細胞進行凋亡 (apoptosis) 或 細 胞 分 化 (differentiation) 而 達 到 抑 制 其 增 殖 (proliferation)作用，這也是目前用來篩選有效抗癌藥物的重要 指標。本論文即針對三種血癌細胞株 HL60 (acute promyelocytic leukemia)、U937（ human histiocytic lymphoma）及 K562（chronic myeloid leukemia）以所合成之 carbazole 衍生物處理後，觀察 其細胞形狀、細胞週期的變化及增殖之影響等情形。. 27.
(28) 第七節. 研究動機與目的. 本研究室於 1995 年合成了 1-benzyl-3-(5-hydroxymethyl-2-furfuryl) indazole (YC-1) 53，並發現其抗血小板之作用機轉特異 54-55，係 soluble guanyl cyclase (sGC) 新型的活化劑，同時具有抗炎及抗癌活性，其類緣 化合物 A、B 也具有類似的生理活性。. O. CH2OH. CH2OH. N. N. N. N. CH2. CH2. YC-1. A. CH2OH CH2OH N. N. N. CH2. CH2. C. B. 本研究是選擇結構與 YC-1、A、B 相近的 9-benzylcarbazole-3- carbinol (C)，作為先導化合物 (lead compound)，從事結構修飾合成一系列 carbazole 衍生物，並探討其抗血小板、抗炎、抗過敏及抗癌活性等各種 生物活性，期望能獲得新型生物活性物質。 28.
(29) 第二章 結果與討論 第一節. 化合物之合成. 標的化合物 2a-d,3a-d,4a-d 及 5-10 之合成如 Scheme 11 所示，首先將 起始原料 1，與各種有不同取代基之 benzyl chloride 進行 benzylation，即 可得到相對應之 substituted benzylcarbazole 2a-d。化合物 2a-d 繼續以 POCl3 / DMF 進行 Vilsmeler-Haack reaction，即可得到相對應之 aldehydes 3a-d，這些 aldehydes 以 NaBH4 進行 reduction，即可得到相對應之 carbinols 化合物 4a-d。 另一方面 2a 在 Ac2O (acetic anhydride)中，以 AlCl3 催化, 即可得到化 合物 5（m.p：341-342 ℃）及 6（m.p：132-134 ℃）兩個產物，從兩者 之 MS 及元素分析的結果，得知產物 5 之分子式為 C23H11NO2 可能是 diacetyl compound，而產物 6 之分子式為 C21H17NO 可能是 monoacetyl compound ， 進 而 由 NMR spectra 證 明 前 者 為 3,6-diacetyl-9benzylcarbazole，而後者為 6-acetyl-9-benzylcarbazole，其產率分別為 45 % 及 38 %。 化合物 3a 與 hydroxylamine 進行 Schiff-base condensation 即可形成 oxime 7，另外 3a 若進行 oxidation 即可變成 carboxylic acid 8，繼續進行. 29.
(30) esterification 即可形成 ester 10。另外，4a 在 DMF (N,N'-dimethylformamide) 中 先 以 NaH 處 理 後 ， 再 用 iodomethane 進 行 methylation 即 可 得 到 methoxymethyl derivative 9。. DMF. KOH/THF. N H. CHO. POCl 3. Ar-CH 2Cl. N. N H2C. 1. 2a-d. 3a-d Ar. CH2OH. NaBH4. 3a-d. 2a, 3a, 4a :. EtOH. N. 2b, 3b, 4b : Ar. H2C. 2c, 3c, 4c :. 2a. Cl. Cl. 4a-d. 2d, 3d, 4d :. H3COC. AC 2O. Ar. H2C. Ar. Cl. COCH 3. COCH 3. +. AlCl 3 N. N. Bz. Bz. 5. 6. CH=NOH NH2OH HCl. COOH. KMnO4. 3a N. N. AcONa / EtOH. Bz. Bz. 8. 7. HCl. 4a. CH 2OCH 3. CH 3I/NaH. EtOH COOC 2H5. DMF. N Bz. N. 9. Bz. 10. Scheme 11 30.
(31) 9-Alkylcarbazole 之合成如 Scheme 12 所示，以 1 為起始物，進行烷 化反應即可得到相對應之 alkylcarbazoles 11-15。化合物 11 繼續以 POCl3 / DMF 進行 Vilsmeler-Haack reaction，即可得到相對應之 aldehyde 16，化 合物 16 與 hydroxylamine 進行 Schiff-base condensation 即可形成 oxime 17。 RX R. 1 NaH / DMF. N. 11:. CH3. R. 12:. CH2CH3. 13:. (CH2)2CH3. 14:. CH2(CH3)2. 15:. (CH2)3CH3. 11-15. 11. CHO. POCl3 DMF. AcONa/EtOH. N. CH=NOH. NH2OH HCl. R. N R. 16. 17. Scheme 12 如 Scheme 13 所示，化合物 16 與 malonic acid，在 piperidine 存在下， 進行縮合反應，即可得到化合物 18。將 16 與 semicarbazide 作用則得到化 合物 19。. 31.
(32) 16. +. H H. COOH. CH=CHCOOH. piperidine. C COOH. CH3COOH. N CH3. 18 CHN=NCONH 2. NaOAc. 16. +. H2NNHCONH2 HCl EtOH N CH3. 19. Scheme 13. 如 Scheme 14 所示，化合物 3a 與 malonic acid, 在 piperidine 存在下， 進行縮合反應，即可得到化合物 20，同樣條件下與 diethyl malonate 或 ethyl cyanoacetate 反應，則得到相對應化合物 21 和 22。在 NaOH 存在下，將 3a 與 acetone 反應，則得到化合物 23；最後，將化合物 20 之酸基繼續酯 化則得到化合物 24。. 32.
(33) 3a. H. +. COOH. piperidine. COOH. CH3COOH. CH=CHCOOH. C. H. N Bz 20. 3a +. H. COOC 2H5. C. H. COOC 2H5. piperidine CH3COOH. CH=C. COOC 2H5 COOC 2H5. CH=C. COOC 2H5 CN. N Bz 21. 3a +. H. C. H. COOC 2H5 CN. piperidine CH3COOH. N Bz 22 CH=CHCOCH 3. 3a +. O H3C C CH3. NaOH. N Bz 23 20. CH=CHCOOC 2H5. C2H5OH HCl. N Bz 24. 第二節Scheme 14. 33.
(34) 第二節. 抑制血小板凝集之活性. 上述所合成的 carbazole 衍生物 (2a-d、3a-d、4a-d 及 5-9 )之抗血小 板活性如表一，化合物 11-17 之抗血小板活性如表二所示，其中先導化合 物. 4a 對 AA、collagen 及 PAF 引發之血小板凝集，具有明顯的抑制活. 性，對 AA 引發之血小板凝集之抑制活性與 YC-1 相當。若將 4a 之 benzyl group 以 o-chlorobenzyl group 取代形成 4b 時其活性增強，特別是對 AA 及 collagen 引發之血小板凝集之抑制活性，有大幅增強的現象，IC50 分別 為 12.5 及 59.9μΜ，前者相當於 YC-1 之 4.5 倍，而後者與 YC-1 相當。 進而將 4a 之 9-benzyl group 以 m-chlorobenzyl group 取代形成 4c 時，其對 AA 引發之血小板凝集略遜於 4a，不過對 collagen 及 PAF 引發之血小板 凝集者則比 4a 強。另外將 4a 之 benzyl group 用 p-chlorbenzyl group 取代 形成 4d 時，則 collagen 引發血小板凝集之抑制活性增強。 另一方面將 4a 之-CH2OH 以-CHO 取代形成 3a 時，對 AA-及 collagen引發之血小板凝集維持顯著之抑制活性，而對 thrombin 及 PAF 引發之血 小板凝集則呈現 IC50 大於 300μΜ之低活性現象。繼續將 3a 之 benzyl group 以 o-chlorobenzyl group 取代形成 3b 時，則對 AA 引發之血小板凝 集增強。當 3a 之 benzyl group 以 m-chlorobenzyl group 形成 3c 時及 p-chlorobenzyl group 取代形成 4d 時，結果都呈現活性下降的現象。 34.
(35) 當 4a 之-CH2OH 分別以 COCH3 (6)、COOH (8)或 CH2OCH3 (9)取代 時,則活性都明顯的下降，然而 3a 之第 3 位有 CH=NOH (7)時，則對 AA、 collagen 及 PAF 引發之血小板凝集之血小板凝集均有增強抑制的現象。 有一比較特殊的現象就是當 9-benzylcarbazole 之 3、6 位都有 acetyl group 取代時 (5)在 50μg/ml 濃度下，就會引起血小板的凝集。最後著者 檢視 3、6 位均無取代基之化合物 2a-d，則發現這些化合物都沒有明顯的 抗血小板活性。總而言之，這一類 9-benzylcarbazole 化合物之 3 位 CHO 及 CH2OH 是展現活性的重要因素。 第 9 位用烷基取代時，化合物 11-15 對 AA、collagen 及 PAF 引發之 血小板凝集幾乎不具有明顯的抑制活性，甚至會引起血小板凝集。但若在 3 位上有取代時，如 9-methylcarbazole 第 3 位以-CHO 取代形成化合物 16 時，對 AA、collagen 及 PAF 引發血小板凝集有增強抑制效果。繼續將 16 之-CHO group 以 CH=NOH 取代形成化合物 17 時，則對 AA 引發之血小 板凝集抑制作用有增強的作用，對 collagen 引起之血小板凝集也有抑制作 用，其它化合物之抗血小板活性尚在評估中。. 35.
(36) 表一. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-9 對血小板凝集之抑制活性 R''. R'. N H2C. R. Compdconc μg/ml. R. R'. R''. Thrombin. AA. Collagen. PAF. Control. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). YC-1 IC50. 173.0 μM. 54.3 μM. 53.8 μM. Control. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 71.6±2.4(3)c. 57.2±2.4(3)c. 6.1±5.0(3)c. 50. 80.1±1.1(3)c. 7.7±3.5(3)c. 20. 87.2±1.0(3)c. 81.5±4.3(3)c. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 2a. 100. C6H5. H. H. Control 2b 100. 90.4±0.5(4) o-Cl-C6H4. H. H. 61.3±2.5(3). c. 59.7±4.3(3). 87.3 μM 90.7±0.4(4). 84.9±1.7(3)c. 74.6±1.5(3) c. 20. 85.1±1.8(3)c. 85.6±1.0(3)c. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 100. 90.4±0.5(4) m-Cl-C6H4. H. H. 70.6±1.7(3). 53.1±2.9(3). c. 59.4±2.0(3). 79.4±1.0(3)c. 80.6±3.1(3)c. 20. 83.3±2.2(3)c. 87.9±0.8(3)c. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 2d 100. 90.4±0.5(4) p-Cl-C6H4. H. H. 80.4±1.1(3)c. 63.1±3.4(3)c. 51.4±0.6(3) c. 50. 81.1±0.4(3)c. 75.0±1.4(3). 20. 84.0±2.4(3)c. 84.8±1.4(3)c. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). Control. 90.4±0.5(4). 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 50. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 20. 1.4±1.1(3)c. 52.0±10.8(3)c. 10. 35.0±16.8(3) c. 86.5±0.8(3)c. 3a 100. C6H5. CHO. H. 53.8±5.4(3)c. 5. 80.4±1.3(3)c. 2. 83.9±1.0(3). IC50. 48.4 μM. 36. 82.1 μM. 79.3±0.8(3)c. 90.7±0.4(4) c. 50. Control. 67.7±1.0(3)c. 90.7±0.4(4) c. 50. Control 2c. 72.2±1.9(3). c. 90.7±0.4(4). 69.9±2.1(3)c. 90.7±0.4(4) 74.6±3.3(3)c. 90.7±0.4(4) 43.5±5.6(3)c.
(37) 續表一 Control. 90.4±0.5(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 0.0±0.0(4)c. 0.0±0.0(4)c. 50. 0.0±0.0(4)c. 3.8±3.3(4)c. 20. 0.0±0.0(4)c. 32.8±17.3(4)c. 10. 24.7±13.5(4)c. 82.7±1.3(4)c. 5. 54.0±15.7(4)a. 2. 80.5±1.3(4)c. 1. 81.9±0.7(4)c. 3b 100. o-Cl-C6H4. CHO. H. 60.4±2.8(3)c. 89.3±0.9(4). 60.4±6.7(4)c. IC50. ＞300 μM. 23.1 μM. 91.8 μM. ＞300 μM. Control. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 70.1±1.4(3)c. 64.6±3.2(3)c. 63.8±1.1(3) c *. 69.0±1.0(3)c. 50. 77.0±1.9(3) c. 81.6±1.0(3) c. 20. 83.5±0.8(3)c. 86.5±1.4(3)c. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 73.5±2.0(3)c. 62.1±4.1(3)c. 61.1±3.6(3)c. 80.1±4.7(3)a. 50. 75.3±2.2(3)c. 79.9±2.9(3)c. 20. 81.9±1.8(3)c. 83.2±3.0(3)c. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 3c 100. m-Cl-C6H4. CHO. H. Control 3d 100. p-Cl-C6H4. CHO. H. Control 4a 100. 90.4±0.5(4) C6H5. CH2OH. H. 74.6±1.5(3) c. 90.7±0.4(4). 0.0±0.0(4)c. 0.0±0.0(3)c. 50. 0.0±0.0(3) c. 2.9±2.5(4) c. 69.5±6.8(3). 20. 14.0±6.3(3)c. 67.0±13.2(4). 88.0±1.5(3). 10. 36.0±14.8(3). 5. 82.3±2.4(3)c. c. 87.8±0.7(4). b. IC50. ＞300 μM. 50.9 μM. 123.4 μM. 189.5 μM. Control. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 0.0±0.0(4)c. 0.0±0.0(3)c. 50. 0.0±0.0(4)c. 8.9±7.2(3)c. 20. 22.0±11.1(4)c. 4b 100. o-Cl-C6H4. CH2OH. H. 57.4±5.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. c. 10. 0.0±0.0(3). 5. 18.8±8.9(3)c. 2. 81.3±3.5(3). 71.8±6.7(4). 86.7±1.2(3). a. 85.3±0.9(4)a. IC50. ＞300 μM. 12.5 μM. 57.9 μM. 123.7 μM. Control. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 4c 100. m-Cl-C6H4. CH2OH. H. 65.9±4.8(3)c. 50 20 IC50. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 86.1±0.8(3)c. 84.9±2.7(3). 84.2 μM. 84.8 μM. 87.2±0.3(3) ＞300 μM. 37. 85.1 μM.
(38) 續表一 Control 4d 100. 90.4±0.5(4) p-Cl-C6H4. CH2OH. H. 60.9±7.5(3)c. 50 20. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3) c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3) c. 66.7±11.1(3)c. 84.4±0.6(3). 87.0±2.5(3). 88.2±0.9(3). IC50. ＞300 μM. 84.1 μM. 84.7 μM. 167.6 μM. Control. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 5. 50. C6H5. COCH3. COCH3. 88.3±0.6 (3) c. 84.2±0.7 (3) c. 85.2±0.3 (3) c. 86.0±1.8 (3)a. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 71.7±1.3(3)c. 53.1±7.5(4)c. 39.1±6.3(3)c. 66.3±0.5(3)c. 50. 71.9±3.0(4)c. 64.3±2.4(3)c. 81.0±0.7(3)c. 20. 81.9±1.2(4)c. 85.6±0.9(3)c. IC50. 365.2 μM. 263.9 μM. 563.5 μM. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 20 Control 6. 100. C6H5. COCH3. H. Control 7. 本身促進血小板凝集. 100. 90.4±0.5(4) C6H5. CH=NON. H. 50. 26.4±4.5(4)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(4)c. 13.6±0.7(3)c. 79.9±0.9(4)c. 0.0±0.0(3) c. 0.0±0.0(4)c. 66.6±1.7(3)c 84.8±1.6(3)c. 20. 67.7±2.6(3)c. 45.0±11.4(4)b. 10. 81.4±1.6(3)c. 77.7±3.4(3)b. 83.4 μM. 71.7 μM. 198.0 μM. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 89.6±0.6. 51.4±0.6(3)c. 30.9±11.6(4)c. 89.2±0.5(3)*. IC50 Control 8. 50. C6H5. COOH. H. 20. 83.5±1.1(3). b. 84.6±2.0(4). IC50. ＞300 μM. 175.4 μM. 121.3 μM. ＞300 μM. Control. 90.4±0.5(4). 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4). 90.7±0.4(4). 61.6±0.3(3)c. 53.5±4.9(3)c. 8.7±1.0(4)c. 58.6±0.6(3)c. 82.5±1.2(3) c. 65.0±1.4(3)c. 19.6±1.2(4)c. 81.4±1.2(3)c. 20. 70.4±0.9(3)c. 77.0±4.7(4)a. 10. 79.9±2.9(3)c. 9. 100 50. IC50. C6H5. CH2OCH3. H. ＞300 μM. 317.9 μM. 135.9 μM. ＞300 μM. Platelets were incubated with test sample at 37 ℃ for 1 min before thrombin (0.1 unit/ml), AA (100μM), collagen (10 μg/mL) or PAF (2 ng/ml) was added to trigger aggregation.Values are presented as mean ± S.E. and the concentration (μM) causing 50% inhibition of platelet aggregation (IC50). a : P＜0.05, b : P＜0.01, c : P ＜0.001. 38.
(39) 表二. 化合物 11-17 對血小板凝集之抑制活性 R'. N R. R'. Compd conc μg/ml. R. R'. Control 11 100. CH3. H. Control 12 100. C2H5. H. Collagen. 92.5±0.4(3). 87.8±0.6(6). 87.8±1.3(4). 90.2±0.5(4). 81.6±3.9(3)a. 39.4±4.4(4)c. 37.2±1.43)c. 42.1±4.5(4)c. 92.5±0.4(3). 87.8±0.6(6). 87.8±1.3(4). c. c. 33.3±3.6(3). c. 0.0±0.0(4). 31.4±17.2(5). 10. 83.3±4.5(4). 100. 0.0±0.0(4). 92.5±0.4(3) C3H7. H. 87.8±0.6(6). 41.2±7.0(3)c. PAF. 90.2±0.5(4). 0.0±0.0(4)c. b. 85.6±8.3(3)c. 87.8±1.3(4). 90.2±0.5(4). 0.0±0.0(3)c. 1.1±0.9(4)c. 50. 本身促進血小板凝集. 37.9±11.8(3). 20. 29.5±16.2(4)a. 87.9±0.8(3)c. 10. 70.5±8.6(4)a. Control 14 100. 90.4±0.5(4) iso-C3H7. H. Control. 71.1±6.8(3). 89.3±0.9(4) a. 48.9±9.0(4). 90.4±0.5(4). c. 89.3±0.9(4). 88.3±0.3(4) 26.8±1.0(3). 90.7±0.4(4) c. 88.3±0.3(4). 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 20. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 10. 1.4±1.1(3)c. 52.0±10.8(3)c. 10. 2.9±1.2(3)c. 86.5±0.8(3)c. 5. 63.7±2.4(3)c. 2. 83.6±1.9(3). 15 100. C4H9. H. 0.0±0.0(4)c. 56.6±8.3(6). 20. Control. 38.4±5.9(3)c 90.7±0.4(4)c 43.5±5.6(3)c. 89.3±0.9(4). 88.4±0.3(4). 90.4±0.5(4). 90.7±0.4(4)c. 0.0±0.0(4)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 50. 34.2±5.9(4)c. 10.3±0.6(3)c. 14.1±0.9(3)c. 8.3±0.0(3)c. 20. 85.8±1.3(4)b. 13.0±0.9(3)c. 18.4±1.4(3)c. 78.0±3.1.0(3)c. 56.8±1.8(3)c. 48.3±2.0(3)c. Control 16. AA. 本身促進血小板凝集. 50. 13. Thrombin. 100. CH3. CHO. 10. 39.
(40) 續表二 5. 70.7±1.1(3). 2. 81.5±0.7(3)c. IC50. 215μM. Control. 89.3±0.9(4). 17. 112μM. 79.1±1.3(3)c. 112μM. 180μM. 88.4±0.3(4). 90.4±0.5(4). 90.7±0.4(4)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(4)c. 0.0±0.0(3)c. 0.0±0.0(3)c. 82.0±1.0(3)c. 0.0±0.0(4)c. 17.1±2.9(3)c. 55.6±1.1(3)c. 20. 0.0±0.0(4) c. 18.9±0.4(3)c. 83.5±0.8(3)c. 10. 24.4±2.9(4)c. 19.4±0.7(3)c. 5. 30.7±3.1(4)c. 44.5±1.9(3)a. 2. 76.4±1.4(4)c. 83.5±0.2(3)c. 1. 86.3±0.6(4)a. 100. CH3. 50. CH=NOH. 29.5μM. IC50. 81.7μM. 224.5μM. Platelets were incubated with test sample at 37 ℃ for 1 min before thrombin (0.1 unit/ml), AA (100μM), collagen (10 μg/mL) or PAF (2 ng/ml) was added to trigger aggregation.Values are presented as mean ± S.E. and the concentration (μM) causing 50% inhibition of platelet aggregation (IC50). a : P＜0.05, b : P＜ 0.01, c : P＜0.001.. 40.
(41) 第三節. 抑制嗜中性白血球脫顆粒反應之活性. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-9、化合物 11-19、化合物 20-24 對嗜 中性白血球脫顆粒反應之抑制活性如表三、表四及表五所示。很明顯的可 以看出來，當 carbazole 環上 3，6 位沒有取代基團時，所有的化合物 2a-d 都沒有活性。然而當 2a 之 3 位導入-CHO 時 3a 則呈現明顯的抑制活性， 其 IC50 為 11.2 μΜ，相當於 positive control TFP，進而將 3a 之 9-benzyl group 以 o-chlorobenzyl group 取代形成 3b 時，則活性增強一倍。相反的， 3a 之 benzyl group 被 m-chlorobenzyl (3c)及被 p-chlorobenzyl (3d)取代時， 則活性都大幅的減弱。 另一方面把 3a、3b 及 3c 之-CHO 還原成-CH2OH 分別形成 4a、4b 及 4c 時，其活性並沒有顯著的變化。然而當 9-(p-chlorobenzyl)carbazole -3-carbaldehyde (3d)還原成 9-(p-chlorobenzyl)carbazole-3-carbinol (4d)，則 大幅增強其活性。 在此值得一提的是化合物 4b 及 4d 具有相當強之活性，IC50 為 2.0μ Μ，相當於 postive control TFP 之 6-7 倍。當 3a 之-CHO 被氧化成-COOH (8 )時，其活性減弱一半， 不過仍具顯著的活性。同樣的當 3a 之-CHO 改變成-COCH3 (5 及 6 )或-CH=NOH (7)時則活性都大幅下降。. 41.
(42) 表三. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-9 對嗜中性白血球脫顆粒反應之抑制 活性 R''. R'. N H2C. R. Compd conc μM. Percent R. R'. Release. β % inhibition Lysozyme. R''. % inhibition. -Glucuronidase 14.0±0.9. 34.9±3.7. 第二章Co. ntrol. TFP 3. 14.9±2.0. 51.3±8.. 16.1±2.1**. 57.8±4.7. 30. 1.2±1.1**. 85.9±2.5. 3.1±1.9**. 90.8±5.9. 30. 2b 30. 13.8±3.4 C6H5. H. H. o-Cl-C6H4. H. H. 100 30. m-Cl-C6H4 H. H. 2d 30. P-Cl-C6H4 H. H. 100. 12.3±3.3. 14.8±2.0. 11.1±8.9. 47.4±3.2*. -22.2±6.6. 17.7±0.8. -12.8±7.9. 49.4±2.3*. -29.5±11.3. 11.9±0.0. 12.7±7.5. 46.1±1.9. -12.5±8.0. 13.2±1.3. -0.2±7.9. 48.1±4.5*. -17.6±6.3. 16.5±1.0. -23.9±9.1. 48.0±2.1*. -24.5±6.8. 52.0±0.1**. -36.3±9.0. 12.2±2.1. 100. 3a. 17.8±8.2. 7.2±1.5*. 100. 2c. 31.5±5.9. 10. IC50 2a. 7.4±9.1. 6.3±10.2. 10.3±2.8. 14.5±2.8. 48.8±2.0*. -26.7±7.0. 12.7±1.2. 6.1±4.3. 51.9±0.7**. -36.2±9.8. 20.6±0.3**. 24.4±3.6. 53.8±2.5. 11.3±2.4. 3. 13.9±0.8**. 48.9±4.3. 43.8±5.7**. 28.4±5.2. 10. 10.0±1.6**. 62.9±7.1. 36.4±5.9**. 40.7±6.4. 9.8±0.3**. 63.8±2.4. 34.5±3.9**. 43.3±4.8. 1. 30 IC50. C6H5. CHO. '. H. 11.2±1.2 42.
(43) 3b. 3c. o-Cl-C6H4. 19.5±2.2**. 29.1±5.6. 45.2±5.5*. 25.9±7.2. 3. 13.7±2.4**. 50.5±7.3. 34.5±5.6. 43.7±6.1. 10. 10.1±0.2**. 63.0±2.0. 39.1±11.4. 37.2±14.6. IC50. 5.3±0.3 14.6±1.6**. 46.5±4.4. 52.3±2.1. 14.1±0.7. 30. 13.8±1.3**. 49.5±4.7. 50.3±5.4. 17.7±6.0. 100. 13.5±0.5**. 49.8±4.6. 51.9±4.7. 15.2±1.5. 18.8±0.8**. 30.9±4.2. 48.2±1.4. 20.4±1.9. 3. 14.7±0.8**. 46.0±3.8. 48.6±3.6. 20.1±1.8. 10. 19.1±1.1**. 30.1±3.2. 47.6±0.4. 21.1±3.8. 20.5±0.8**. 23.6±8.3. 3. 17.4±1.6**. 36.1±1.5. 53.2±3.5. 13.0±2.6. 10. 10.9±2.1**. 60.9±4.5. 51.6±7.4. 15.8±8.5. IC50. 7.3±0.8 24.6±0.1**. 29.1±5.6. 57.0±3.5. 6.1±1.2. 1. 18.5±2.8**. 50.5±7.3. 51.9±7.2. 14.8±3.7. 3. 8.8±1.6**. 63.02.0. 55.5±4.1. 8.6±2.2. 15.0±1.0**. 27.9±13.4. 57.6±1.6. 5.5±1.4. 1. 15.9±1.7**. 41.3±7.5. 53.2±4.3. 12.6±7.0. 3. 19.4±2.6**. 43.2±10.5. 57.1±0.5. 6.5±1.9. 8.1±2.2. 18.6±7.0. 52.5±1.6. 14.7±2.7. 1. 16.3±1.5**. 39.9±5.1. 53.4±2.9. 12.3±4.4. 3. 21.9±1.2**. 68.4±13.7. 52.0±2.7. 14.1±1.1. 1. 10. CHO. m -Cl-C6H4 CHO. H. H. 續表三 3d. 4a. 1. 1. 4b 0.3. P -Cl-C6H4 CHO. C6H5. CH2OH. o -Cl-C6H4 CH2OH. H. H. H. 2.0±0.1. IC50 4c. 0.3. 4d 0.3. 7.5±4.9. m -Cl-C6H4 CH2OH. P -Cl-C6H4 CH2OH. H. H. 2.0±0.4. IC50. 32.5±0.4. 48.2±3.0. 第三章Co. ntrol. 5. 10. C6H5. COCH3. COCH3. 30 6. 10. C6H5. COCH3. H. 30 7. 10. C6H5. CH=NOH. H. 29.9±0.2. 7.9±1.7. 45.9±5.7. 5.3±5.7. 30.2±0.6. 7.2±1.5. 47.3±5.4. 2.4±5.0. 25.3±0.9*. 22.1±2.5. 38.4±3.1. 20.4±1.8. 27.6±1.4. 15.4±3.1. 39.9±3.4. 17.5±1.7. 25.9±1.7. 20.3±4.2. 45.9±3.1. 5.3±2.7. 43.
(44) 31.6±1.1. 2.9±3.4. 36.8±7.0. 2.4±9.4. 26.3±1.7. 19.2±5.1. 42.0±2.7. 12.7±4.0. 10. 21.2±1.3. 34.9±4.0. 31.4±2.3. 34.8±3.3. 30. 13.9±0.7. 57.3±1.7. 27.3±2.1. 43.4±1.1. IC50. 23.1±1.5 25.4±0.8*. 21.8±3.4. 42.9±4.6. 11.3±5.5. 27.5±0.2. 15.3±1.5. 45.9±4.7. 5.1±3.7. 30 8. 3. 9. 10. C6H5. C6H5. COOH. CH2OCH3. H. H. 30. a ;Data are presented as mean ± S.E. ; .b: Inducer: 1μM fMLP + 5μg/ml cytochalasin B. c: *P＜0.005, **P ＜0.001, N=3. d: TFP: trifluoperazine (postive control).. 表四. 化合物 11-19 對嗜中性白血球脫顆粒反應之抑制活性 R'. N R. Compd conc μM. Percent R. β. R'. Release. ﹪inhibition Lysozyme. % inhibition. -Glucuronidase 14.0±0.9. Control TFP 3. 14.9±2.0. 13. 31.5±5.9. 17.8±8.2. 7.2±1.5*. 51.3±8.. 16.1±2.1**. 57.8±4.7. 30. 1.2±1.1**. 85.9±2.5. 3.1±1.9**. 90.8±5.9. 13.8±3.4. 12.3±3.3. 10.0±1.9. 21.7±9.0. 42.1±6.4. -0.2±6.3. 7.9±2.4. 39.8±9.8. 44.0±3.8. 6.2±6.0. --. --. 39.2±11.4. 9.0±12.2. 30. 13.8±0.6. 8.3±5.2. 43.2±6.1. -3.2±6.1. 100. 15.3±3.5. 52.8±1.5. -.31.6±9.6. --. --. 51.2±2.1*. -27.0±8.7. 30. CH3. H. 100 12. 7.4±9.1. 10. IC50 11. 34.9±3.7. 10. 10 30. C2H5. C3H7. H. H. -1.7±12.0. 17.7±1.4*. -36.0±9.5. 13.9±1.6. 1.9±5.3. 44.
(45) 17.5±0.9*. -33.8±8.0. 52.4±2.9*. -30.2±8.0. 12.6±0.9. 11.8±1.5. --. --. 30. 11.9±2.8. 18.7±6.7. 49.3±4.5*. -21.6±6.4. 100. 18.2±1.7*. -25.1±2.1. 56.3±2.0*. -28.7±9.0. 9.2±0.0. 27.9±1.5. 55.6±1.7*. -35.0±5.5. 12.9±2.9. 21.1±10.6. 52.4±3.6*. -25.8±8.0. 30.6±2.1. 5.7±6.8. 47.3±2.6. 100 14. 10 iso-C3H7. 15. 30. C4H9. H. H. 100 16. 3. CH3. CHO. 10. 22.4±0.7**. 31.1±1.8. 39.9±1.8. 16.8±2.2. 30. 13.0±0.5**. 59.9±2.0. 29.5±2.3**. 38.8±1.0. 23.7±0.6**. 27.3±2.7. 44.6±4.0. 7.7±2.2. 24.6±0.6*. 24.5±2.4. 46.1±3.1. 4.4±1.6. 22.9±0.3. IC50 17. 1.5±4.7. 10. CH3. CHNOH. 30. 續表四 control. 14.0±0.9. TFP 3. 38.7±1.9. -3.4±2.1. 69.9±3.0. 10. 17.9±0.3. 38.3±2.7**. 39.1±0.3**. 27.5±5.8*. 30. 5.0±0.6. 87.1±2.7**. 2.6±0.6**. 94.3±2.1**. 12.2±0.3. IC50 18 10. CH3. CH=CHCOOH. 30. 10 30. -27.0±4.1. 13.2±0.7. 31.0±0.7. 16.2±6.2. 52.3±1.6. 4.1±6.4. 23.9±2.3. 35.2±8.4. 42.8±4.2. 10.4±2.4. 71.3±8.2. 28.7±4.1. 35.7±3.0. 4.6±1.5. 58.1±2.5. -5.8±1.1. 32.4±1.2. 13.0±4.5. 52.9±0.6. 3.2±2.9. 21.2±10.4* 47.0±9.2**. 15.8±5.4. IC50 19. 34.9±3.7. CH3. C=NNHCONH2. a: Data are presented as mean ± S.E. ; b: Inducer: 1μM fMLP + 5μg/ml cytochalasin B. c: *P＜0.005, **P ＜0.001, N=3. d: TFP: trifluoperazine (postive control).. 45.
(46) 表五. 化合物 20-24 對嗜中性白血球脫顆粒反應之抑制活性 R. N H2C. Compd conc μM. R. Percent % inhibition Lysozyme. β-Glucuronidase. 37.8±1.8. Release % inhibition 54.9±2.3. 第四章C. ont. rol. TFP 3. 38.7±1.9. -3.4±2.1. 69.9±3.0. 10. 17.9±0.3. 38.3±2.7**. 39.1±0.3**. 27.5±5.8*. 30. 5.0±0.6. 87.1±2.7**. 2.6±0.6**. 94.3±2.1**. IC50. 12.2±0.3. 13.2±0.7. 46. -27.0±4.1.
(47) 10. 37.4±1.5. -0.3±1.3. 55.2±0.6. -0.8±1.5. 33.1±1.2. 11.0±2.3. 48.6±1.2. 11.3±2.0. 23.2±1.0**. 28.6±3.3. 35.9±2.9*. 25.6±2.5. 10. 17.2±0.2**. 49.6±1.6. 28.3±2.5**. 41.4±1.6. 30. 7.4±0.6**. 77.2±1.7. 21.2±3.3**. 56.5±4.1. 10. COOC2H5. 30 20. 3. CH=CHCOOH. 13.7±0.7. IC50 21. 22. 23. 38.2±2.0. -2.3±1.3. 57.8±1.6. -5.3±2.0. 30. 37.8±1.1. -1.4±2.5. 56.5±0.1. -3.2±4.1. 10. CH=CH(CN) (COOEt) 39.7±0.8. -6.8±3.1. 63.2±1.6. -15.3±4.1. 30. 39.1±0.8. -5.2±3.2. 60.4±1.4. -10.1±2.5. 31.5±1.0. 15.2±1.6. 51.9±1.7. 5.4±0.8. 29.8±1.4. 20.1±0.2*. 48.9±1.3. 10.6±5.4. 37.6±1.2. -1.0±1.6. 58.8±0.8. -7.2±6.4. 58.0±3.4. -5.7±10.4. 10. CH=C(COOEt)2. 10. CH=CHCOCH3. 30 24. 22.6±2.6. CH=CHCOOEt. 30. 36.4±216. 100. 2.7±2.2. a: Data are presented as mean ± S.E. ; b: Inducer: 1μM fMLP + 5μg/ml cytochalasin B. c: *P＜0.005, **P ＜0.001, N=3. d: TFP: trifluoperazine (postive control).. 第四節. 嗜中性白血球過氧化物形成反應之抑制活性. 如表六所示，各化合物化合物對過氧化物形成反應之抑制活性，活性 不顯著，大部份 IC50 大於 30μM。 表六. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-24 對嗜中性白血球過氧化物形成反 應之抑制活性 R''. R'. N H2C. 47. R.
(48) Compd Conc.(μM) R control TFP. control 2a. control 2b. R'. R''. 3 5 10 IC50 30 100 IC50. C6H5. 30 o -Cl-C6H4 100. H. H. H. H. Superoxide anion formation 6 nmol/10 cells % inhibition 4.1±0.4 2.9±0.9 22.5±4.3 0.8±0.3* 52.5±2.0 0.2±0.1** 59.7±0.1 7.4±0.4 μM 4.1±0.4 4.4±0.5 -4.4±3.1 0.4±0.4 -6.7±1.2 ＞100μM 4.1±0.4 4.5±0.4 -7.1±1.5 4.4±0.4 -5.5±0.7 ＞100μM. IC50 control 2c. control 2d. 30 m -Cl-C6H4 100 IC50. H. H. 4.1±0.4 4.4±0.4 4.4±0.3. 30 p-Cl-C6H4 100 IC50. H. H. 4.1±0.4 4.5±0.3 4.1±0.5. Control TFP. -4.7±4.3 -4.0±4.0 ＞100μM -7.0±4.0 2.8±2.3 ＞100μM. 3.31±0.32 1. 3.12±0.59. 2.3±9.0. 3. 1.89±0.59**. 44.2±12.4. 10. 0.53±0.06**. 82.9±3.3 5.6±0.30. 續表六. control 3a. 30 100 IC50. C6H5. CHO. H. control 3b. control 3d. control 4a. 4.6±11.3 -1.6±18.4 ＞100μM. 3.31±0.32 30 o -Cl-C6H4. CHO. H. 100 IC50 control 3c. 3.31±0.32 3.54±0.45 3.89±0.90. 3.43±0.39. 7.5±9.8. 4.15±0.43. -10.7±1.9 ＞100μM. 30 m -Cl-C6H4 100 IC50. CHO. H. 3.31±0.32 3.98±0.28 3.93±0.23. 30 p-Cl-C6H4 100 IC50. CHO. H. 3.31±0.32 3.66±0.47 4.06±1.03. CH2OH. H. 30. C6H5. 48. 3.31±0.32 3.74±. -6.8±2.3 -6.1±5.7 ＞100μM -5.2±2.7 -15.1±17.6 ＞100μM 2.3±13.9.
(49) 100. 3.44±. ＞100μM. IC50 control 4b. control 4c. control 4d. 3.31±0.32 4.15±0.02 4.24±0.05** 4.36±0.12**. 10 o -Cl-C6H4 30 100 IC50. CH2OH. H. 30 m -Cl-C6H4 100 IC50. CH2OH. H. 3.31±0.32 3.93±0.84* 4.25±0.50*. 10 p-Cl-C6H4 30. CH2OH. H. 3.31±0.32 3.07±0.16 2.97±0.08. control 5. control 6. 續表六 control 7. control 8. control 9. control 10. control TFP. 2.81±0.17 2.13±0.04 0.56±0.08** 0.22±0.09**. 3 10 30 IC50 10 30 IC50. -48.5±9.0 -51.8±9.2 -56.2±11.0 ＞100μM -33.7±14.2 -29.0±8.9 ＞100μM -9.3±3.8 -6.0±5.3 ＞100μM. IC50 control TFP. 8.6±4.7. C6H5. COCH3. COCH3. 10 30 IC50. C6H5. COCH3. H. 3 10 30 IC50. C6H5. CH=NOH. H. 10 30 IC50. C6H5. COOH. 2.81±0.17 2.44±0.13 3.01±0.12 2.81±0.17 2.47±0.29 1.52±0.20**. 2.81±0.17 3.35±0.10 3.78±0.18* 5.35±0.11**. H. 2.81±0.17 2.80±0.25 3.07±0.18. 10 30 IC50. C6H5. CH2OCH3. H. 2.81±0.17 3.26±0.52 2.13±0.31. 10 30 IC50. C6H5. COOC2H5. H. 6.95±0.33 7.36±0.46 6.34±0.09 5.85±0.50 6.04±0.19 4.60±0.21 2.32±0.18. 3 5 10 49. 23.7±3.5 79.2±4.3 91.9±4.3 9.7±1.1 μM 12.0±9.4 8.0±9.4 ＞30μM 10.7±14.4 45.7±7.6 ＞30μM. -20.0±5.4 -36.7±11.8 -93.1±12.4 ＞30μM 0.3±5.6 9.9±8.4 ＞30μM -11.4±8.5μM 23.3±13.5 ＞30μM -6.5±9.4 8.3±5.7 ＞30μM -4.5±10.0 20.7±6.5* 60.0±4.8**.
(50) IC5 control 11. control 12. control 13. control 14. control 15. control 16. control 17. 續表六 control 18. Control 19. control TFP. control 20. control 21. 8.3±0.8μM. 30 100 IC50. H. H. H. 4.1±0.4 4.5±0.5 4.3±0.4. 30 100 IC50. CH3. H. H. 4.1±0.4 4.3±0.3 4.4±0.4. 30 100 IC50. C2H5. H. H. 4.1±0.4 4.4±0.3 4.3±0.4. 30 100 IC50. iso-C2H5. H. H. 4.1±0.4 4.1±0.4 4.3±0.4. 30 100 IC50. C3H7. H. H. 4.1±0.4 4.5±0.1 4.4±0.1. 10 30 IC50. H. CHO. H. 2.81±0.17 2.12±0.22 1.72±0.24**. 30 100 IC50. H. CH=NOH. H. 2.81±0.17 2.08±0.32** 2.51±0.07. 10 30 IC50. H. CH=CHCOOH. H. 6.95±0.3 5.61±0.44 5.20±0.21. CH=NNHCONH2. H. 6.95±0.3 4.99±0.46 3.66±0.41. 10 30 IC50. H. 6.95±0.3 5.74±0.12 3.61±0.29 1.54±0.10. 1 3 10 IC50 10 30 IC50. C6H5. CH=CHCOOH. H. 2.81±0.17 3.22±0.18 2.64±0.16. 10 30 IC50. C6H5. CHC(COOEt)2. H. 6.95±0.33 6.16±0.48 6.25±0.16. 50. -7.9±1.9 -1.2±2.4 ＞100μM -3.1±2.1 -5.7±1.0 ＞100μM -6.6±2.1 -2.3±1.2 ＞100μM -0.6±1.4 -3.6±1.7 ＞100μM -7.8±8.4 -7.0±6.9 ＞100μM 22.9±12.1 38.3±10.1 ＞30μM 27.2±8.3 10.2±3.9 ＞30μM. 22.8±7.1 24.6±6.6 ＞30μM 28.0±5.9* 47.1±6.3** ＞30μM 17.1±2.5 47.6±5.9** 77.9±1.1** 3.4±0.3μM -16.2±12.6 5.2±7.7 ＞30μM 11.5±3.0 9.4±6.8 ＞30μM.
(51) control 22. control 23. control 24. 10 30 IC50. C6H5. 10 30 IC50 C6H5. CH=NNHCONH2. H. 6.95±0.33 6.85±0.26 3.02±0.31. CHC(COOEt)(CN). H. 6.95±0.33 6.52±0.32 6.44±0.23. CH=CHCOOEt. H. 10 30 IC50. control TFP. 6.2±1.5 6.7±7.8 ＞30μM. 6.95±0.33 7.35±0.21 6.80±0.25 6.95±0.33 5.74±0.12 3.61±0.29 1.54±0.10. 1 3 10. 1.1±4.8 12.9±6.7 ＞30μM. -6.5±8.6 1.7±5.3 ＞30μM 17.1±2.5 47.6±5.9** 77.6±1.1** 3.4±0.3μM. IC50 a. Data are presented as mean ± S.E. b. Inducer : PMA 3 nM. c. * P ＜ 0.05, ** P ＜ 0.001, N= 3~6. c. TFP: trifluoperazine (as positive control).. 第五節. 肥胖細胞脫顆粒反應之抑制活性. 如表七所示，各化合物化合物對肥胖細胞之脫顆粒反應之抑制活性， 活性皆不顯著。 表七. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 及 5-24 對肥胖細胞之脫顆粒反應之抑制 活性 R''. R'. N R. 51.
(52) compdsconc μM. Percent release R. R'. R''. Control Mepacrine. 10. β-Glucuronidase % inhibition. Histamine. % inhibition. 18.0 ± 0.9. 25.0 ± 1.0. 18.0 ± 0.9. 13.4 ± 0.5**. -25.2 ± 0.9. 16.6 ±. 73.8 ± 4.2. 1.7** 20. 9.0 ± 1.0**. 49.6 ± 4.2. 12.2 ±. 38.1±8.3(4)*. 2.1** 30. 6.8 ± 0.5. 62.1 ± 1.1. 4.8 ±. 93.4 ± 8.8. 2.4** 22.3 ± 1.0. IC50 Control 2a. 19.0± 0.2 3. CH2-C6H5. H. H. 10 Control 2b. 30. CH2-(o-Cl-C6H4). H. H. 100 Control 2c. 30. CH2-(m-Cl-C6H4). H. H. 100 Control 2d. 30. CH2-(p-Cl-C6H4). H. H. 100. 14.7 ± 1.7 --. 23.7 ± 1.7. --. 21.1 ±0.5. －4.3 ± 5.7. 22.2 ± 2.7. 2.7 ± 4.4. 19.5± 0.1. －3.8 ± 8.5. 26.4 ± 1.1. －6.4 ± 7.9. 19.0± 0.2. --. 23.7 ± 1.7. 22.8 ± 0.9. 2.2 ± 7.9. 25.4 ± 3.9. －4.9±10.2. 26.8± 2.0. 9.1 ± 7.2. 22.7 ± 3.7. 5.9 ±11.8. 19.0± 0.2. --. 23.7 ± 1.7. --. --. 21.2 ± 0.9. －2.2 ± 8.3. 25.3 ± 3.6. 4.8 ± 9.6. 23.7 ± 0.6. －0.5 ± 2.3. 25.6 ± 3.1. 7.2 ± 6.8. 19.0± 0.2. --. 23.7 ± 1.7. 20.9 ± 1.6. 0.4 ±10.2. 22.1 ± 2.4. 22.9 ± 0.8. 1.3 ± 5.6 26.8 ± 2.9. 29.6 ± 1.6. 57.5 ± 3.8.. -7.6 ± 4.6 －12.8 ± 8.4. 續表七 Control 3a. 30. CH2-C6H5. CHO. H. 100 Control 3b. 38.9±5.2. 38.3±0.5. 22.0±1.8. 16.4±3.7**. 47.2±9.2. 37.4±2.8. 23.8±5.5. 29.6 ± 1.6 30. CH2-(o-Cl-C6H4) CHO. H. 100 Control 3c. 18.5±2.6*. 20.0±3.2*. 30.3±9.7. 42.3±2.7. 14.0±4.0. 17.5±3.7**. 43.3±9.0. 38.6±0.6. 21.3±2.0. 29.6 ± 1.6. 57.5 ± 3.8.. 20.9±4.3*. 34.0±7.7. 56.6±5.1. 30. 18.0±2.8**. 40.1±7.2. 42.5±5.6** 27.7±5.6. 100. 13.8±2.2**. 54.6±4.6. 38.7±5.8** 34.6±5.9. 10. CH2-(m-Cl-C6H4) CHO. H. 77.2±10.7. IC50 Control. 57.5 ± 3.8.. 29.6±1.6 52. 57.5 ± 3.8.. 15.5±8.1.
(53) 3d. 10. CH2-(p-Cl-C6H4) CHO. H. 30 100. 21.6±5.7. 32.7±12.4. 59.7±1.8. 16.6±2.8. 45.4±6.9. 44.5±6.5** 24.6±6.6. 11.8± 2.4**. 59.3 ± 6.9. 38.1±5.8** 35.4±6.2. 69.6±17.9. IC50 Control. 29.6± 1.6. 4a. 3. CH2-C6H5. CH2OH H. 10 Control. 57.5 ± 3.8.. 22.9±1.6. 22.9±4.4. 41.5±1.2. 15.5±1.7. 21.6±2.1. 27.5±6.5. 41.3±1.9. 15.8±3.9. 29.6 ± 1.6. 4b. 3. CH2-(o-Cl-C6H4) CH2OH H. 10 Control. 57.5±3.8.. 22.5±1.3. 24.6±8.1. 42.1±1.1. 14.2±2.2. 24.5±0.2. 17.6±3.3. 45.5±1.6. 7.4±1.8. 29.6 ± 1.6. 4c. 3. CH2-(m-Cl-C6H4) CH2OH H. 10 Control. 57.5 ± 3.8.. 18.4 ± 3.9. 39.0±0.1. 33.1±2.3 b. 32.6±3.7. 21.9±1.4. 26.6±12.8. 36.9±1.2 b. 24.6±3.6. 29.6 ± 1.6. 4d. 1. CH2-(p-Cl-C6H4) CH2OH H. 3 Control. 57.5±3.8.. 20.2±0.8. 32.1±4.5. 38.6±1.4*. 21.4±2.3. 21.2±4.1. 28.8±2.0. 41.3±5.0. 16.2±8.8. 43.2±1.6. 5. 10. 9.4±1.2. CH2-C6H5. COCH3 COCH 41.6±3.1. 56.7±2.0 3.9±2.8. 45.1±5.8*. 21.0±7.5. 14.8±14.8. 45.9±4.9. 19.1±7. 0. 3. 36.8±2.6. 30 Control. 43.2±1.6. 6. 10. 42.3±0.7. CH2-C6H5. 34.0±2.4*. 30. 56.7±2.0 1.9±4.5 20.9±6.5. 53.4±2.0 44.8±2.9*. 5.8±1.6 21.0±3.0. 續表七 control 7. 43.2±1.6 10. CH2-C6H5. CH=NOH. H. 30 control 10. CH2-C6H5. H. 30 control. 8.5±2.5. 50.1±3.6. 11.7±3.2. 36.6±3.5. 15.7±5.0. 48.6±1.1. 13.9±4.7. 56.7±2.0. 38.8±1.3. 10.1±1.5. 51.6±2.4. 8.9±1.1. 34.0±1.6**. 21.4±1.5. 45.9±3.8. 19.1±4.2. 43.2±1.6 10. CH2-C6H5. CH2OCH3. H. 30 control 10. 39.5±0.4. 43.2±1.6. 8. 9. 56.7±2.0. 56.7±2.0. 51.8±2.5. -19.6±1.8. 59.5±4.3. -4.7±4.4. 51.2±1.8. -18.6±5.1. 58.7±2.4. -3.6±2.0. 31.5±1.4 10 30. CH2-C6H5. COOC2H5. H. 54.0±0.5. 38.2±3.4. -20.7±6.6. 64.0±2.0. -18.4±4.6. 49.7±3.7. -57.3±7.2*. 63.4±2.4. -17.4±4.7. 53.
(54) control 3 11. 18.0 ± 0.9 CH3. H. H. 10 control 3. C2H5. H. H. 10 control 13. C3H7. H. H. control 3. iso-C3H7. H. 10 control 15. 2.7 ± 4.4. 19.7 ± 1.5. －3.8 ± 8.5 25.6 ± 3.4. －6.4 ± 7.9. C4H9. H. H. 10. 25.0 ± 1.0. --. 2.2 ± 7.9 25.4 ± 3.9. －4.9 ±10.2. 17.3 ± 1.5. 9.1 ± 7.2 22.7 ± 3.7. 5.9 ±11.8. --. 25.0 ± 1.0. --. 19.4 ± 1.7. －2.2 ± 8.3 25.3 ± 3.6. －4.8 ± 9.6. 19.1 ± 0.3. －0.5 ± 2.3 25.6 ± 3.1. －7.2 ± 6.8. --. 23.7 ± 1.7. --. 18.9 ± 1.9. 0.4 ±10.2 22.1 ± 2.4. 7.6 ± 4.6. 18.7 ± 1.1. 1.3 ± 5.6 26.8 ± 2.9. －12.8 ± 8.4. 18.0 ± 0.9 3. --. 18.6 ± 1.6. 19.0± 0.2. 14. --. －4.3 ± 5.7 23.1 ± 2.0. 18.0 ± 0.9 30 100. 25.0 ± 1.0. 19.8 ± 1.1. 18.0 ± 0.9. 12. --. --. 25.0 ± 1.0. --. 17.9 ± 0.8. 5.7 ± 3.8 25.1 ± 1.6. －6.7 ± 6.6. 20.2 ± 0.5. －6.4 ± 1.9 26.4 ± 1.5. －11.9 ± 3.3. control. 43.2±1.6. Mepacrine10. 29.9±0.699. 31.9±2.1. 42.6±2.7** 24.6±4.1. 20. 18.2±1.1**. 57.8±2.9. 31.6±3.4** 43.5±4.2. 30. 5.9±0.8**. 86.0±2.1. 12.1±1.2** 78.2±1.4. 56.7±2.0. 43.2±1.6. 32.2±3.6. IC50 Control 10 16. 43.2±1.6 CH3. CHO. H. 30. 56.7±2.0. 35.7±3.3. 17.8±4.7. 48.3±6.0. 15.3±7.9. 30.7±2.4**. 29.1±3.7. 40.4±1.9**. 28.7±2.4. 續表七. control 17. 43.2±1.6 10. CH3. CH=NOH. H. 30. control 18. 10. CH3. CH=CHCOOH. H. control. 10.4±1.5. 50.5±3.6. 10.9±3.2. 33.3±0.7*. 22.8±1.3. 44.7±2.7*. 21.3±2.0. 54.0±0.5. 28.4±1.3. 9.8±1.4. 52.4±0.8. 2.9±2.3. 40.7±2.3. -30.0±10.5. 51.7±2.2. 4.3±5.0. 31.5±1.4 10 CH3. CH=NNHCONH2 H. 30 control 20. 38.8±1.7. 31.5±1.4. 30. 19. 56.7±2.0. 54.0±0.5. 32.5±1.0. -3.3±1.6. 53.9±0.2. 0.2±1.4. 26.9±1.2. 14.70.1. 47.9±0.7. 11.2±2.3. 43.2±1.6 10 CH2-C6H5 30. CH=CHCOOH. H. 56.7±2.0. 39.6±2.5. 8.2±5.7. 52.1±4.4. 8.4±4.5. 39.7±0.03. 7.8±3.4. 47.2±2.2. 16.7±0.9. 54.
(55) control 21. 31.5±1.4 10 CH2-C6H5. CH=C(COOEt). H. 30 control 22. CH=NNHCONH2 H. 30 control. 12.8±2.2. 57.3±2.3. -6.0±5.4. 27.4±1.0. 12.9±0.8. 57.0±3.5. -5.5±7.6. 54.0±0.5. 31.7±1.8. -0.5±1.4. 65.5±4.1. -22 4±8.2. 31.9±1.1. -1.5±4.7. 66.6±2.7. -23.3±6.1. 31.5±1.4 10 CH2-C6H5. CH=CHCOCH3. 30 control 24. 27.2±0.9. 31.5±1.4 10 CH2-C6H5. 23. 54.0±0.5. 54.0±0.5. 37.6±3.0. -19.3±7.8. 66.0±4.4. -22.2±9.3. 31.9±1.4. -1.2±1.8. 60.7±3.4. -12.4±7.5. 31.5±1.4 10 CH2-C6H5 30. CH=CHCOOC2H5 H. 54.0±0.5. 33.5±1.9. -6.0±1.5. 61.9±3.1. -14.7±6.6. 32.9±1.8. -4.3±1.3. 61.4±3.3. -13.6±7.0. control. 31.5±1.4. Mepacrine 10. 23.6±0.4. 24.6±0.7*. 41.8±2.5. 22.5±1.8*. 30. 14.4±0.2. 54.0±0.5**. 29.4±1.8. 45.4±1.2**. 100. 4.5±0.3. 85.4±1.7**. 10.9±0.6. 79.7±0.5**. 54.0±0.5. 25.57±0.6. 31.6±1.0. Mast cell were preincubation at 37 ℃ with 0.5 % DMSO or test compounds for 3 min. of cytochalasin Fifteen minutes after the addition of compound 48/80 (10μg/ml),β-glucuronidase and histamine activities in the supernatant were determined. Values are presented as mean±S.E., N=3-4, *P＜0.05 **: P<0.01 .. 第四節. 對 Microglia cells 產生 NO 及 TNF-α之抑制活 性. 化合物 2a-d，3a-d，4a-d 及 5-9 對 LPS / TNF-α所引起的 N9 microglia cell 產生 NO 及 TNF-α之抑制活性如表八所示。 在 Nitrile assay 中化合物 3b 比 postive control 1400 W 更佳的抑制 NO 產生之活性，其 IC50 為 3.0μΜ，而化合物 3b 之 o-Cl 移到 m 位（3c） 55.
(56) 時其活性降低約 1/5。若移到 p 位（3d）時，其活性又大幅下降，若將 Cl 去除（3a）其活性亦相當弱。上述化合物 3b，3c 之 CHO 去除時（2b 及 2c） ，其活性明顯降低。而低活性的化合物 3a 及 3d 除去 CHO 時（2a， 2d）活性依然很低。進而將化合物 2a 之 phenyl group 除去時（11）活性 又減弱。另外化合物 3b 之-CHO 改變成-CH2OH（4b）時活性略增。而當 化合物 4b 之 o-Cl 改變成 m-Cl（4c）及 4'-Cl（4d）及除去 Cl（4a）其效 價變化傾向與由化合物 3b 變成 3c，3d 及 3a 時之變化類似。 在 TNF-αassay，化合物 3b 及 4b 具有強效的抑制 LPS / TNF-α-γ -induced TNF-α產生之活性，IC50 分別為 0.6 及 0.5μΜ。. 表八. 化合物 2a-d、3a-d、4a-d 對 N9 細胞產生 NO 及 TNF-α之抑制活 性. R'. N CH2-R. 56.
(57) Compd. R. IC50 (µM)a. R'. Nitrite. TNF-α. 2. H. H. > 30 ( 6.8 ± 1.0%). 2a. C6H5. H. > 30 (32.7 ± 0.4%). 2b. o-Cl-C6H4. H. > 10 (45.9 ± 0.9%). 2c. m-Cl-C6H4. H. > 30 (37.2 ± 1.5%). > 30 (44.7 ± 1.9%). 2d. p-Cl-C6H4. H. > 10 ( 6.7 ± 2.5%). > 10 (40.9 ± 7.9%). 3a. C6H5. CHO. > 10 (20.0 ± 5.6%). > 10 (43.9 ± 1.8%). 3b. o-Cl-C6H4. CHO. 3.0 ± 0.1. 0.64 ± 0.23. 3c. m-Cl-C6H4. CHO. 16.4 ± 0.3. 6.50 ± 0.13. 3d. p-Cl-C6H4. CHO. > 10 ( 6.2 ± 0.6%). 4a. C6H5. CH2OH. > 10 (45.0 ± 2.0%). 4b. o-Cl-C6H4. CH2OH. 2.3 ± 0.1. 0.52 ± 0.16. 4c. m-Cl-C6H4. CH2OH. 9.9 ± 0.3. 4.60 ± 0.12. p-Cl-C6H4. CH2OH. 4d. > 30 (21.7 ± 2.9%) > 30 (46.3 ± 1.8%). > 10 (12.9 ± 1.6%) 6.0 ± 0.1. c. 1400W. Dexamethasonec a. b. ND. 2.93 ± 0.06. > 10 (38.4 ± 1.8%) 4.90 ± 0.14. > 10 (11.1 ± 3.1%) NDd 0.10 ± 0.01. TNF-α was measured by using TNF-α ELISA kit and see ref 65 for NO determination. Values are. expressed as the means ± S.E. (n = 3).. b. When 50% inhibition could not be reached at the highest. concentration, the percent inhibition is given in the parentheses.Compounds that were unable to evaluation at the concentrations > 10 µM because of the cytotoxicity.. c. 1400W (N-(3- aminomethyl)benzylacetamidine). and dexamethasone are the reference inhibitors for nitrite and TNF-α formation, respectively.. d. ND, not. determined.. 第八節. Carbazole 衍生物(2-15)對 HL60、U937 及 K562 等癌細胞增殖率的影響. 57.
(58) 將 HL60、U937 及 K562 三種細胞株分別用化合物 2-15 處理 24 小時 後，再用 PI 螢光染色，經流式細胞儀偵測並分析存活細胞之數量的百分 比值，列記於表九及圖五，從表九及圖五得知這些 carbazole 衍生物，對 HL60、U937 及 K562 等細胞增殖率都有明顯的劑量依存性 (dose-dependent)抑制作用。 為了探討其結構與活性的相關性，著者將表九數據分別推算其 IC50， 列於表十，這些 carbazole 衍生物的結構與活性之關係敘述如下： 當基本骨架 carbazole 第 9 位接上 benzyl group (2a)及 m-chlorobenzyl group (2c)時，對 HL60 及 U937 細胞株都呈明顯的抑制活性，但是對 K562 則活性甚弱。當接上 o-chlorobenzyl group (2b)時，則只對 U937 細胞株有 活性而已。若接上 p-chlorobenzyl group (2d)時，對三種細胞株都沒有明顯 活性。 進而將化合物 2a 之第 3 位導入-CHO (3a)，其活性與化合物 2d 一樣， 都沒有明顯活性。當化合物 3a 之 benzyl group 的 ortha 位與 para 位，導 入 Cl 而形成 3b 及 3c 時，對 HL60 及 U937 細胞株之活性甚強，而且對 K562 也呈明顯的活性。當 3b 或 3c 之 Cl 原子移至 para 位 (3d)時，則只 對 U937 細胞株抑制活性很強而已，對其他兩種細胞株活性較弱。 另一方面，當 carbazole 之第 3 位固定為-CH2OH，而第 9 位為 benzyl group (4a)時，對 U937 呈現相當強的活性，而對其他兩種細胞株之活性只. 58.
(59) 是中等而已。若將化合物 4a 之 benzyl group 改變成 o-chlorobenzyl group (4b)和 m-chlorobenzyl group (4c)時，則對 HL60 及 U937 細胞株之抑制活 性都很強，對 K562 則比較弱。再將 4b 或 4c 之 Cl 原子移至 para 位 (4d) 時，則只對 U937 細胞株之抑制活性很強而已。 若將 2a 之第 3 位分別導入-COCH3 (6)及-CH=NOH (7)，則只對 U937 細胞株呈現中等活性而已。 進而將 carbazole 第 9 位接上各種 alkaly group 時 (11-15)，都只有對 U937 細胞株呈現活性而已。 綜合以上結構與活性關係之檢討，可以觀察到這些 carbazole 衍生物 對 U937 之抑制活性最為明顯，其次為 HL60，最不明顯的是 K562 細胞 株。 另外也可以觀察到 carbazole 第 3 位之-CHO 或-CH2OH 以及第 9 位 之 chlorobenzyl group 對活性之影響比較大。. 表九. Carbazole 衍生物對 HL 60、U937 及 K562 癌細胞之抑制活性 R'. 59 N R.
(60) HL-60 Compds. R. R'. 2b. 2c. 2d. CH2-C6H5. CH2-(o-Cl-C6H4). CH2-(m-Cl-C6H4). CH2-(p-Cl-C6H4). H. H. H. H. (μM ) proliferation. CH2-C6H5. CHO. cell. proliferation. proliferation. (% of control). (% of control). (% of control). 100.00. 100.00. 100.00. 100. 35.1 ± 0.7. 50. 37.0 ± 1.6 ***. 41.6 ± 1.1***. 55.2 ± 4.9 ***. 30. 45.8 ± 4.9 ***. 52.6 ± 2.4 ***. 62.3 ± 0.8 ***. 10. 99.9 ± 0.3. 76.6 ± 5.9 **. 83.7 ± 1.4 **. 100. 47.4 ± 1.9 ***. 15.0 ± 0.5 ***. 50.5 ± 5.0 ***. 50. 62.6 ± 3.4 ***. 33.0 ± 2.4 ***. 67.5 ± 0.7 ***. 30. 77.7 ± 7.0 **. 38.9 ± 1.3 ***. 79.0 ± 2.7 **. 10. 95.8 ± 0.2 *. 82.3 ± 1.4 ***. 96.7 ± 0.8. 100. 28.9 ± 2.9 ***. 26.4 ± 2.2 ***. 50.3 ± 3.1 ***. 50. 29.8 ± 1.2 ***. 31.1 ± 7.5 ***. 55.7 ± 2.4 ***. 30. 37.1 ± 5.3 ***. 31.9 ± 3.2 ***. 58.5 ± 0.5 ***. 10. 94.0 ± 5.5. 53.4 ± 2.9 ***. 82.7 ± 2.6 *. ***. 39.3 ± 3.5. ***. 50.4 ± 4.2 ***. 5. ND. 85.1 ± 3.3 **. ND. 1. ND. 98.6 ± 1.0. ND. 100. 75.3 ± 5.2 **. 81.9 ± 1.6 ***. 92.6 ± 0.2. 50. 84.9 ± 10.1. 80.3 ± 1.0. ***. 94.2 ± 0.7. 30. 90.2 ± 1.7. 92.0 ± 1.5. **. 10. 3a. cell K562. Conc.. Control. 2a. cell U937. **. 99.2 ± 1.2. ND 89.8 ± 4.7. 50. 96.3 ± 4.6. 81.9 ± 1.7 ***. 30. 97.1 ± 3.5. 84.2 ± 1.0. 10. ND. 續表九. 60. 80.0 ± 0.6. 99.9 ± 0.6. 100. *. 100.1 ± 1.4. ***. 93.4 ± 1.5 100.3 ± 4.5. ***. 95.6 ± 1.7 *. 98.4 ± 1.2 94.2 ± 2.6.
(61) Compds. R. R'. HL-60 cell. U937 cell. K562 cell. proliferation. proliferation. proliferation. (% of control). (% of control). (% of control). 100.00. Conc. (μM ). Control. 3b. CH2-(o-Cl-C6H4). CHO. 100.00. 100.00. 100. 25.0 ± 2.2. ***. ND. 40.5 ± 0.6 ***. 50. 28.0 ± 1.8 ***. ND. 41.2 ± 1.6 ***. 30. 26.8 ± 2.8 ***. ND. 43.7 ± 1.7 ***. 10. 32.6 ± 5.4 ***. ND. 5. 56.9 ± 2.2. 1. 90.2 ± 4.8. 88.7 ± 2.4 **. 49.2 ± 3.2 ***. 99.7 ± 3.2. 97.9 ± 9.1. 74.7 ± 0.4. ***. ND. 90.7 ± 0.6 ***. ND. 100. 23.9 ± 4.1. ***. ND. 41.0 ± 2.3 ***. 50. 22.4 ± 3.8 ***. ND. 42.5 ± 1.5 ***. 30. 23.0 ± 5.8 ***. ND. 45.2 ± 0.1 ***. 10. 23.5 ± 5.1 ***. ND. 53.6 ± 2.7 ***. 5. 34.5 ± 4.0 ***. ND. 58.1 ± 1.5 ***. 1. 61.7 ± 9.4 ***. 29.0 ± 2.5 ***. 97.9 ± 1.3. 0.50. 81.9 ± 8.5. 73.7 ± 4.9. 99.3 ± 1.3. 0.01. 102.8 ± 3.1. 0.05 0.01. 3c. 3d. CH2-(m-Cl-C6H4). CH2-(p-Cl-C6H4). CHO. CHO. 24.0 ± 3.5. 90.6 ± 4.5 ***. ***. ND. ***. ***. 76.5 ± 3.2 ***. ND ND. 0.05. ND. 92.0 ± 2.0. 100. 26.3 ± 3.2 ***. ND. 38.3 ± 1.6 ***. 50. 25.0 ± 1.8 ***. ND. 38.5 ± 0.9 ***. 30. 43.3 ± 3.0 ***. ND. 45.9 ± 4.6 ***. 10. 53.0 ± 2.1 ***. 29.6 ± 2.9 ***. 80.3 ± 5.5 *. 5. 58.9 ± 3.2 ***. 32.3 ± 2.8 ***. 93.8 ± 3.4. 1. 97.0 ± 2.2. 49.8 ± 1.5 ***. 97.7 ± 3.0. **. 0.50. ND. 60.9 ± 0.2. 0.10. ND. 83.6 ± 8.3 *. 續表九 61. ***. ND ND.
(62) Compds. R. R'. HL-60 cell. U937 cell. K562 cell. proliferation. proliferation. proliferation. (% of control). (% of control). (% of control). 100.00. 100.00. 100.00. Conc. (μM ). Control. 4a. CH2-C6H5. CH2OH. 100. 4.8 ± 0.6. ND. 45.7 ± 1.2 ***. 50. 13.5 ± 1.0 ***. ND. 50.8 ± 1.2 ***. 30. 46.3 ± 5.8 ***. ND. 55.2 ± 1.6 ***. 10. 93.4 ± 1.9 *. ND. 82.5 ± 4.5 *. 5. 93.0 ± 2.8 *. ND. 86.3 ± 1.1 *. ND. 37.1 ± 1.8 ***. 0.50 0.01. 1. 4b. CH2-(p-Cl-C6H4). CH2OH. CH2-(m-Cl-C6H4). CH2OH. 91.3 ± 1.1. ND. 57.8 ± 0.7. ***. ND. ND. 87.1 ± 0.7 ***. ND. 0.05. ND. 92.4 ± 0.9. ND. 100. 5.0 ± 3.6 ***. ND. 40.6 ± 2.1 ***. 50. 14.4 ± 4.0 ***. ND. 42.3 ± 1.5 ***. 30. 19.2 ± 2.3 ***. ND. 47.9 ± 1.8 ***. 10. 36.9 ± 1.4 ***. ND. 63.6 ± 0.1 ***. 5. 59.5 ± 4.3 ***. 14.6 ± 3.0 ***. 92.7 ± 7.1. 1. 77.8 ± 6.7 **. 55.2 ± 2.3 ***. 100.6 ± 5.2. 85.0 ± 1.2. 63.8 ± 2.1. 0.50. 4c. ***. **. **. ***. ND. 0.1. ND. 93.9 ± 1.6 **. ND. 100. 12.3 ± 1.8 ***. ND. 42.6 ± 1.0 ***. 50. 17.4 ± 4.2 ***. ND. 45.6 ± 1.1 ***. 30. 18.0 ± 3.6 ***. ND. 46.8 ± 1.2 ***. 10. 21.6 ± 4.6 ***. ND. 54.1 ± 1.8 ***. 5. 52.8 ± 3.0 ***. ND. 62.4 ± 1.6 ***. 1. 75.7 ± 6.2 **. 38.7 ± 1.3 ***. 86.0 ± 4.0. 42.5 ± 6.0. 0.50 0.1 0.05. 續表九 62. **. ***. ND. 84.5 ± 6.6. *. ND. 93.4 ± 2.5. *. 98.6 ± 0.8 ND ND ND.
相關文件
包括具有藥理活性的高分子和低分子藥物高分子化或
雖然水是電中性分子，然其具正極區域(氫 原子)和負極區域(氧原子)，因此 水是一種極 性溶劑
數位經濟、醫療服務、高階旅遊、航 空與物流、農業和生物技術、食品加 工業、工業機器人、生物燃料和生物 化學
在進口指數方面，按經濟貨物大類(CGCE)計算，包括消費品、原料及半製成品、燃料及潤滑
當化合物是由兩種元素組成時，則稱為二元化 合物(binary compound)。二元離子化合物的實
中興國中
(A)乙醇為二元醇 (B)工業酒精可能含有甲醇 (C)甲醚與甲醇為同分異構物 (D)皂化反應的副 產品為丙三醇
• 消毒 ：以不影響品質安全，在符合衛生 條件情況下，利用化學或物理方法，殺 死大部分致病微生物。所採取的適當處 理作業，例如：紫外線消毒箱、奶瓶消 毒鍋.
