附錄一

附錄一 受 試 者 須 知 及 同 意 書

連 續 增 補 硫 辛 酸 對 極 限 耐 力 跑 過 程 血 液 抗 氧 化 系 統 的 動 力 學 探 究

指導老師：謝伸裕 教授 國立台灣師範大學 運動科學研究所 協同指導：林嘉志 博士 國立東華大學 運動與休閒學系 研究生：張維倫 國立台灣師範大學 體育系碩士班二年級

jakclekimo@yahoo.com.tw；連絡電話：0912-519250

激烈運動易產生高氧化壓力而使人體組織器官受到累積性的氧

化損傷；硫辛酸（α-lipoic acid，ALA）為性質特殊之抗氧化劑，廣為 增補抗氧化、抗老化之用。本研究目的在探討硫辛酸在人體長時間耐 力運動時對血液之血漿生化值、紅血球抗氧化酶的影響。在人體安靜 態硫辛酸吸收約 10-40 分鐘，在血液的半衰期約 30 分鐘，兼具脂溶 性及水溶性之雙重特性使其能深入作用到細胞內。人體安全劑量可達 1600 mg/day，且幾無副作用。然而，因結構類似脂肪酸，硫辛酸的 代謝會在粒線體內進行，在長時間耐力運動下，代謝速率預期應更加 快速，為求增補效果，本研究擬以連續增補方式提升抗氧化效能。此 外，硫辛酸亦為糖尿病治療用藥，能有效促進葡萄糖轉運效能，因此 須配合醣類同時增補。受試者於賽前、每12km (三圈) 與賽後均配合

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將以1600 mg 為上限)。

檢測項目包含血漿glucose、lactate、creatine kinase；紅血球 SOD、

CAT、GSH-Px 等抗氧化酶活性；其他尚有氧化損傷指標 TBARS 等，

以瞭解身體抗氧化功能的變化。

經由此研究，您將可以親自瞭解參與 100 km 馬拉松運動研究的 完整過程，更可以獲得個人珍貴的各項生理變化資料。很感謝您參與 本研究及對本研究所做的貢獻，若尚有不清楚地方，請詢問相關研究 者；實驗中途有任何不適或欲退出實驗，亦請不吝告知，研究者將無 異議贊同。詳細閱讀後，若您同意請在下欄簽名並注意以下重要事項：

（1） 比賽全程須記錄心率，請受試者務必在賽前集合開會，將說明 Polar 錶使用方式、採血測試模擬。

（2） 請遵守實驗要求避免服用額外任何抗氧化劑。

（3） 由於須採血樣分析，故實驗前 48 小時不得飲用含有咖啡因、酒 精等飲料及從事激烈運動等。

（4） 請於賽前兩週內配合前往國立台灣師範大學運動生理實驗室進 行其餘心肺功能 (最大攝氧量)、人體參數檢測。

因研究之需要造成您的不便，懇請多多體諒。

再次謝謝您的參與！

同意人

簽 名：____________________________________________________

通訊地址：____________________________________________________

手機號碼：____________________________________________________

電子信箱：____________________________________________________

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附錄二 受 試 者 健 康 情 況 調 查 表

本表旨在幫助您瞭解自己之健康狀況，並協助測驗人員在實驗前是否需要更

進一步的健康檢查。敬請據實回答，過去一年內，您是否有下列狀況：（請您在

有、無、不確定欄內打〝3〞）

有 無 不確定 1. 高血壓 □ □ □ 2. 心臟病 □ □ □ 3. 糖尿病 □ □ □ 4. 支氣管炎 □ □ □ 5. 貧血 □ □ □ 6. 心律不整 □ □ □ 7. 藥物過敏 □ □ □ 8. 緊張、情緒或心理異常 □ □ □ 9. 氣喘 □ □ □ 10. 很快站起來時，會頭暈或輕微頭痛 □ □ □ 11. 暈倒或失去知覺 □ □ □ 12. 經常性胃痛 □ □ □ 13. 運動或跑步後，極端疲憊很難恢復 □ □ □ 14. 過去半年間是否有過其他病症發生？ □ □ □

請說明：

15. 目前身上有剛受傷或尚未痊癒的舊傷 □ □ □ 請說明部位及狀況

16. 其他任何不適合運動的原因，請說明狀況

受試者： 填表日期：96 年 月 日

本份問卷到此結束，請檢查有無遺漏之處；再次感謝您的參與※

附錄三 本 研 究 之 血 液 生 化 檢 體 分 析

1、 TBARS 分析流程

以不同濃度的 TMOP 作為標準曲線，配置時需避光。在所有測 量的微量離心管內加入10μL BHT (4%)；分別在 standard 的微量離心 管內加入 250μL 之不同濃度的 TMOP；在 sample 的微量離心管內加 入2μL 的血漿；在所有測量的微量離心管內加入 250μL HCl (0.1 N) 與250μL TBA (0.5%)；放置於震盪器 ( Thermolyne, type 37600 mixer, Canada) 上充分混合 60 秒，重複 5 次；設定恆溫培養箱 (Precision, C1-45) 的溫度為 60℃，持續加熱 60 分鐘後；以 10,000 g 離心 10 分 鐘取上清液後，以微盤讀取儀 (Bio-Rad model 680，USA) 於波長 540 nm 檢測吸光質，再與標準曲線作濃度換算，所得單位為μM。

2、 SOD 分析流程

在微型測試盤的測試槽加入 200 μL 以 assay buffer (5 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.01 mM diethylenetriaminepentaacetic acid, 0.01 mM hypoxanthine) 稀釋之自由基偵測劑 (0.05 mM) 及 10 μL 標準液或以 sample buffer (10 mM Tris-HCl, pH 8.0) 稀釋 85 倍之紅血球溶胞液檢 體，並快速地將加入20 μL 稀釋 40 倍之黃嘌呤氧化酶 (4.5 mU．mL

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光值分析，再以標準液製作的標準曲線進行換算。單位為U‧mL^-1， 再除以血紅素單位 (g‧dL^-1) 得 U‧g Hb^-1。

3、 GSH-Px 分析流程

以 140 μL 分析液 (50 mM Tris-HCl, pH 7.6；5 mM EDTA) 、20 μL 輔 受 質 溶 液 (1 mM NADPH, 10 mM glutathione, 0.022 U glutathione reductase) 及 20 μL GSH-Px (control) 或以 sample buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.6; 5 mM EDTA; 1 mg．mL^-1 BSA) 稀釋 100 倍

之紅血球溶胞液檢體。啟動反應時加入 50 μL 異丙苯基過氧化氫 (cumene hydroperoxide) 後開始計時，並均勻搖晃數次。以微盤讀取 儀 (TRIAD Multimode Detector, Dynex) 紀錄波長 340 nm 下每分鐘吸

光值，至少測量 5 次，所得數值經換算可得酶反應活性。單位為 U‧mL^-1，再除以血紅素單位 (g‧dL^-1) 換算後得 kU‧g Hb^-1。 4、 CAT 分析流程

在 微 型 測 試 盤 的 測 試 槽 加 入 100 μL 的 分 析 液 (100 mM potassium phosphate, pH 7.0)、30 μL 的甲醇、20 μL 的牛肝的 catalase (control) 或 20 μL 以 sample buffer (100 mM potassium phosphate, pH 7.0, 1 mM EDTA, 0.1 % BSA) 稀釋 20 倍之紅血球溶胞液檢體。加入 20 μL 的過氧化氫(0.12 %)啟動反應。於室溫下，將微型測試盤振盪 20 分鐘。加入 10 μL 10 M 氫氧化鉀終止反應，再加入 30 μL 的 Purpald

(22.8 mM)，並於室溫下振盪 10 分鐘。加入 10 μL 0.5 M 過碘酸鉀(65.2 mM)，於振盪器上室溫下反應 5 分鐘。以微盤讀取儀 (Bio-Rad model 680, USA) 於波長 540 nm 測量吸光值。再依甲醛製得之標準曲線計 算濃度。單位為 U‧mL^-1，再除以血紅素單位 (g‧dL^-1) 得 kU‧g Hb^-1。

5、 glucose 分析流程

將血漿以作 20 倍稀釋，將 180μL 呈色劑 (0.8 mM 4-amino phenazone, 3.24 U glucose oxidase, 0.18 U peroxidase, 11.16 mM phenol, 0.05 % Tween 20) 加入 40μL 血漿，於 37℃恆溫箱反應 15 分鐘後以 微盤讀取儀 (Bio-Rad model 680，USA) 於波長 540 nm 檢測吸光質，

經與標準液比對可換算成正確濃度。單位為 mg‧dL^-1。 6、 lactate 分析流程

取 2 μL 血漿加入 200 μL 乳酸反應試劑 (Trinity Biotech plc, Bray, Co. Wicklow, Ireland)，靜置室溫 10 分鐘，以微盤讀取儀 (Bio-Rad model 680, USA) 於光波長 540 nm 測量吸光值。所得數值再根據標準 液濃度換算數值。單位為mM。

7、 CK 分析流程

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酶反應液後，以微盤讀取儀 (Bio-Rad model 680, USA) 紀錄波長 400 nm 下每分鐘吸光值，至少測量 5 次，所得數值經換算可得 CK 反應 活性。單位為U‧L^-1。

8、 hemoglobin 分析流程

將 5 倍脹破之 2μL 紅血球檢體加入 500 μL hemoglobin reagent (Instruchemie) (0.6 mM 六氰高鐵酸鉀、1.0 mM 磷酸二氫鉀、0.8 mM 氫化鉀、1.0 ml/l NP-40)，於室溫下反應 3 分鐘後以微盤讀取儀 (Bio-Rad model 680，USA) 於光波長 540 nm 測得吸光值。經與標準 液比對可換算成正確濃度。單位為g‧dL^-1。

附錄四 本 研 究 使 用 之 硫 辛 酸

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個人小傳

姓 名：張維倫 出生日期：71年8月9日 出 生 地：台灣省高雄縣

學 歷：94~96 年 國立台灣師範大學體育學系碩士班肄業 90~94 年 花蓮縣國立東華大學畢業

86~89 年 高雄縣國立旗美高中畢業 83~86 年 高雄縣旗山國中畢業 77~83 年 高雄縣旗山國小畢業 學術團體：華人運動生理暨體適能學者學會會員

重要成就：94 年 學校體育創意教材教具競賽暨展覽-教材佳作獎 88年 台灣省南區奧林匹亞生物競試第9名

87年 台灣省南區奧林匹亞生物競試第10名 興 趣：羽球、撞球