培養基之製備

培養基之製備

欲使微生物在實驗室中培養進行各種實驗，必須先讓微生物能在實驗室生長，所以實驗室必須提共使微生物生長的養分和 環境條件等要素

，這些要素依微生物需求上的不同可分為三種，能量來源 ˋ 細胞構造成分生長環境因子，而培養基就是在實驗是中共給微 生物能量來源與細胞

構造成分，使微生物生長營養來源。

能量來源而言，由於微生物所需的能量來源一種類而有所不同，因此培養基必須提共欲培養微生物的能量來源，即有機物 ˋ 無機物以及光線三種

之一；相通的，培養基中充分的共應含有建構微生物細胞元素之構造成分，包含化學元素與微量元素，其中化學元素包含 了微量元素。

培養基種類有許多種方法，一組成成分可分為合成培養基和複合培養基，其中合成培養基是由已知成分的純化學物質所組 成，其組成份確定；複合

培養基則是由植物動物微生物所提煉的天然消化物，成分不能完全確定，一般包括酵母菌抽出物 ˋ 牛肉抽出物 ˋ 麥牙抽 出物和蛋白棟等。

培養基依用途可分為下列四種:

1.基礎培養基:微生物生長基本要素，可停共大部分微生物生長。

2.豐富培養基:基礎培養基中在加入特殊成分，使難於一般培養基生長微生物得以生長。

3.選擇培養基:在一般培養基中加入壓制化合物，使某些微生物受到壓制；或含特定菌體生長良好之營養源，使其大量生長，

但對其他微生物則無法作用。

4.鑑別培養基:鑑別培養基中含有特定營養成分，培養基可依代謝情況不同，鑑別不同菌體。

培養基一型態區分，則可分為固體培養基 ˋ 半固體培養基以及液體培養基三種，其中固體培養基含有 1.5~2.0%的凝固劑；

半固體培養基所含的凝固劑只有

0.5%；至於液體培養基則不含凝固劑，主要用於微生物生長培養增值分離或生化鑑定。

製備培養基的第一不應詳細計算所需的培養基數量，其中應特別考慮每種培養基的配置方法均不同，且因裝容器如培養皿 ˋ 試管等的體積不同，所良取的培養基

數量也會不同；此外對於培養基是否應進行溼熱滅菌也應特別注意。

實驗所需之器具

滅菌『培養皿（含培養基）X56、培養皿 X 約 20 個、取藥杓、定量玻璃吸管』

器具：取藥杓、隔熱手套、秤藥紙、錐型瓶

儀器：無菌操作台、高溫高壓滅菌釜、電子天平

培養基成分 培養液成分

標準配置：1000ml 水 + 23g Natrient agar 需 500ml 配 11.7g Natrient agar

Na

HPO

4 g

KH

PO

1.5 g

NH

CL 1 g

MgSO

．7H

O 0.2 g

CaCl

0.01g

1000 ml d.d H

O

問題

1.備置固體培養基時，其中將培養基倒入培養皿之步驟，操作者之雙手各拿什麼？為什麼一般只放 1/2 體積以 下之培養基至培養皿至滅菌培養皿中？

右手拿取玻璃培養皿的蓋子，左手將培養基緩緩倒入培養皿中。

避免拿取時使未凝固的培養基滴出外面及減少培養基使用的浪費。

2.備置固體培養基時，用於濕熱滅菌之封口棉花栓應如何製作？

將棉花展開，用手截成 5cm 的帶狀長形棉片，再截成方形，之後再把一、二張方形棉重疊，中央另疊二、三 層薄棉花作為餡，將左手中指在棉花中央以棉花包中指，然後徐徐抽出就成棉花栓。

3.請詳細說明以下儀器:(1）電子天平；（2）無菌操作台；（3）酒精燈之正確使用步驟，並說明使用過程應注 意事項。

(1)調整天平：每搬動一次需重新調整底座的高低螺絲→開啟→檢查秤盤是否乾淨→將待測物放上秤盤，等左 下角圈圈消失表示穩定，扣重：將容器放上秤盤，等數字穩定歸零，再把要測的物品放上→使用完關機。

(2)使用前先將 UV 打開 30 分滅菌且避免人員靠近、直視 UV 燈→實驗進行時要將 UV 燈關閉和打開抽風設備 及照明燈，並用酒精噴灑保持無菌→開啟風扇等抽氣設備穩定抽氣即可使用→使用完畢後將燈源和風扇關閉且 打開 UV 燈→平日需保養且要注意操作台的整潔

(3)使用前先注意酒精是否有 2/3 滿→使用中注意不要搖晃→使用結束將蓋子直接蓋上，就可直接滅火，避免 用嘴吹掉火源。

4.為什麼固體培養基於恆溫培養箱中培養時玻璃培養皿應倒置培養？

避免在培養時產生水氣附著在蓋子上滴到培養基，造成實驗結果的誤差。

5.備置固體培養基時，為什麼濕熱滅菌後應箱放入水浴鍋中，而不直接倒入滅菌過的培養皿中？

因剛經高溫高壓滅菌溫度高，在冷卻時可能會在上蓋產生水氣，分配培養基時可能會連水一起倒出，影響實驗 結果。

6.使用酒精燈的過程中應注意什麼？萬一發生危險時應如何處理？

須使用工業酒精，裝酒精時不超過瓶身的 2/3，且避免打翻 不小心翻倒時立即用濕毛巾蓋上以阻絕空氣，減少燃燒。

7.微生物實驗為何特別強調無菌操作技術？列舉本實驗五項無菌操作技術。

空氣中可能有許多看不到的微生物，假如在實驗當中沒有使用無菌技術，會造成實驗數據上的錯誤，導致結果 有差異。

1.在無菌操作台上分配培養基； 2.用高溫高壓滅菌釜將器具殺菌；3.使用水浴鍋保持溫度；4.以濕熱滅菌法製 NA 培養基；5.酒精燈過火滅菌

8.

(例題 5)如何配置 300ml 之 BGLB 培養基?

標準配置：40.0g BGLG & 1000ml 二段水 40：1000 = X：300

1000X=12000 X = 12g BGLG

(例題 6)如何配置 5 個含有 NA 培養基之玻璃培養皿?

標準配置：23g NA agar & 1000ml 二段水、一般培養皿為 20ml，需 5 個，為 100ml 23：1000 = X：100

1000X = 2300 X = 2.3g NA agar

(例題 7)如何配置 200ml 的 m-ENDO Broth?

標準配置：48.0g M-ENDO agar & 20ml 酒精(95%) & 1000ml 二段水 M-ENDO 酒精

48：1000 = X：200 20：1000 = X：200 1000X = 9600 1000X = 4000 X = 9.6g M-ENDO agar X = 4g 酒精 (例題 8)如何配置 600ml 的 Chromocult coliform agar?

標準配置：26.3g Chromocult coliform agar & 1000ml 二段水 26.3：1000 = X：600

1000X = 15700

X = 15.7g Chromocult coliform agar

討論

在製作培養基時，稱取講義上所要的份量，最好精秤，將秤完的培養基小心倒入瓶內，培養水也是一樣，瓶蓋 不旋緊，然後小心的放入高溫高壓滅菌釜內，需要用的的培養皿和滴管也需要殺菌，等培養基完成後拿取不要 被燙到，摔破了不但害到別組，還得要重做，在傾倒培養基時也需要到無菌操作台上，這樣別組的實驗數據才 不會有錯誤。

心得

致維：這次製作培養基，做的算是失敗了，但不知道為什麼培養皿的殺菌部分需要一個多小時，所以培養基都 完成了還需要等培養皿，但培養基可能也倒太多了，所以才會有不夠的情況，不然應該可以早早完成。

文迪：這次實驗要花比較多時間去等待，除了各組要等我們高溫高壓滅菌，也必須克服高溫高壓滅菌機器，那 個真的很燙，被燙到只能忍著，因為你手中的東西落下會比燙到更危險，不過還好無大礙，算成功完成！

俊綸：

從源：