第參章 方法與步驟
本章主要分成下列六部份加以敘述：一、研究對象；二、實驗時間與 地點；三、實驗流程；四、實驗方法與步驟；五、採血與血液分析；六、
資料處理與統計分析。
一、研究對象
受試者為18 名自願參與本研究且健康情況良好之無規律運動習慣的坐 式生活男性，分為 27 kg/m2以上之肥胖者9 名，與 BMI 18.5 kg/m2以下之 體重過輕者 9 名。實驗前發給每位受試者一份受試者同意書 （附錄一），
並說明研究目的、測量程序與方法及回答相關問題，經受試者同意參與本 實驗後要求受試者於同意書上簽名，所有受試者均需填寫健康情況調查表
（附錄二），確定無有關心肺疾病或遺傳性疾病之健康問題，始可成為本研 究之受試者。運動實驗前一週至實驗室實地熟悉運動工具及測量程序，並 要求受試者在實驗期間必須符合以下幾點：
（一） 維持正常生活作息及飲食習慣。
（二） 睡眠充足至少 8 小時 （前夜 23:00 前就寢）。
（三） 運動測量前四十八小時內，不得進行任何激烈運動。
（四） 中等強度實驗當天，須空腹至少 8 小時（前夜 23:00 後禁食）。
二、實驗時間與地點
時間：民國九十七年四月起至九十七年六月止。
地點：
(一)採血及運動測量均在國立臺灣師範大學分部運動生理學實驗室。
(二)所有採血樣本檢測均在台北市邱內科聯合醫事檢驗中心進行。
三、實驗流程
本研究之實驗流程如下圖（圖 1）：
圖 1 實驗流程圖 招募受試者 說明實驗目的及流程
1.測量身高、體重、身體組成及安靜心跳率（計算 60 % HRR）。
2.熟悉實驗流程和器材。
3.YMCA 次強度運動負荷測驗。
肥胖組 (N=9) (1)控制實驗
(2)運動實驗
45 分鐘 60% HRR 腳踏車
實驗結束 1. 填寫受試者同意書 2. 健康調查表
體重過輕組 (N=9) (1)控制實驗
(2)運動實驗
45 分鐘 60% HRR 腳踏車
四、實驗方法與步驟
（一） 儀器之校正及檢視
1. Vmax 29 型電腦能量代謝測量系統 (SensorMedics the Cop., Yorba Linda, CA, USA)：使用前先以標準氣體進行校正，確定分析 O2 和 CO2的準確性，再依操作手冊所列之程序進行氣量之比對和系統之測 試。
2. Lode 電動腳踏車測功器 (Lode B. V., Medical Technology, Groningen, Netherlands)：依照操作手冊所列之程序進行校正。
3. Polar 無 線 心 跳 率 紀 錄 錶 (Polar S810i TM, Polar Eleetro Ino., Finland)：依照操作手冊所列之程序進行校正。
4. 身體組成分析儀：本實驗採用 Inbody 2.0 型 (Biospace Corporation, Korea)，利用生物電阻法原理，測量受試者的身體組成，使用前依操 作手冊所列之程序進行校正。
5. 檢視抽血針筒、止血帶等用具是否清潔、安全，並確定醫護人員支 援的時間。
（二） 運動測量前置步驟 1. 採氣裝置
受試者配戴合適大小之面罩後，採 breath by breath 之方式，將呼出 的氣體透過自動偵測器收集並導入 Vmax 29 能量代謝測量系統。
2. 原地腳踏車座椅高度調整
每位受試者在熟悉儀器時皆須調整座椅高度至其最適當位置，然後 加以記錄，以便爾後進行運動測量時直接以該座椅高度實施。
（三） 中等強度運動之設定 1. 固定式腳踏車運動
以腳踏車測功器進行，持續45 分鐘，運動強度為 60% HRR，迴轉 數為 60 rpm，運動時以無線 Polar 錶全程監控運動心跳，並設定為 每一分鐘記錄心跳值一次。
2. 腳踏車負荷的設定 （YMCA 次強度運動負荷測驗）
所有受試者第一個階段功率皆設定在25 瓦特，每階段持續 3 分鐘，
於第2 分鐘至第 3 分鐘的最後 30 秒測量心跳率，假如兩個時間的 心跳率差異小於每分鐘5 下，則代表達穩定狀態，若無，則此一階 段需再增加一分鐘。假設在第三分鐘時其心跳小於80 次/分，則第 二階段功率設定在 125 瓦特；假設心跳介於 80~89 次/分，則第二 階段功率設定在100 瓦特；假設心跳介於 90~100 次/分，則第二階 段功率設定在75 瓦特；假設心跳大於 100 次/分，則第二階段功率 設定在 50 瓦特，而第三及第四階段功率設定是根據其第二階段負 荷往下實施 (Golding, 2000)。
3. 60 % HRR 運動強度之設定
YMCA 測驗後，所得之各個功率負荷及相對心跳率，再以簡單直 線迴歸方程式，依內插法分別求得受試者在 60 % HRR 運動強度時 之功率負荷。
（四） 實驗實施方法
1. 中等強度運動實驗之實施
受試者於測試當天早上 7:10 抵達實驗室，並在空腹至少 8 小時 的狀態下於7:15 進行採血，接著食用由研究者提供之早餐。安靜休 息30 分鐘後，進行一次 45 分鐘且運動強度為 60 % HRR 的實驗，
並全程記錄心跳及採氣（圖2），運動結束後以坐姿休息 45 分鐘。
圖2 受試者之一進行 60% HRR 中等強度運動測量的情形
2. 控制實驗
為排除日夜節律所可能造成的影響，以了解中等強度運動的介 入對瘦體素所產生之變化，本研究所有受試者須在運動測量的前一
天早上7:10 到達實驗室進行一次控制實驗，流程及方法與 60 % HRR 運動實驗相同，但不進行運動、心跳及採氣等記錄，僅於安靜空腹 (7:15)、運動前 (8:15)、運動後立即 (9:00)、運動後 45 分鐘 (9:45) 進行採血。
（五） 飲食提供
每次實驗提供之早餐，內容為：（醣類：C, 脂肪：F, 蛋白質：P）
肥胖者：ORION 蛋黃派 1 塊+蘋果麵包 6 個+味全果汁牛奶 1 瓶。
體重過輕者：ORION 蛋黃派 1/2 塊+蘋果麵包 3 個+味全果汁牛奶 1/2 瓶。
1. ORION 蛋黃派一塊=23g
每 23g 熱量 100 kcal (C: 12g, F: 5g, P: 1g) 2. 蘋果麵包 6 個=50g
每 50g 熱量 141.55 kcal (C: 24.1g, F: 1.05 g, P: 3.9g) 3. 味全果汁牛奶一瓶= 200g
每 100g 熱量 57.5 kcal (C: 9.5g, F: 1.5g, P: 1.5g) Total 200g 熱量 115 kcal (C: 19g, F: 3g, P: 3g)
4.總熱量：
肥胖者：356.55 kcal，比例為：
CHO: 55.1g (76.4 %)、Fat: 9.05g (12.6 %)、Protein: 7.9g (11 %)。
體重過輕者：178.28 kcal，比例為：
CHO: 27.55g (76.4%)、Fat: 4.53g (12.6%)、Protein: 3.95g (11%)。
五、採血與血液分析
（一） 中等強度運動之採血
所有受試者於早上 7:10 必須空腹到達實驗室，先由護士在其肘前靜脈
埋設留置針，然後分別在 7:15 （安靜空腹）、8:15 （運動前）、9:00（運動 後立即）和 9:45（運動後 45 分鐘）等 4 個時間點（圖 3），以注射筒由留置 針處各採血 3 ml，再裝入含有抗凝血劑 EDTA 之試管，所有檢體皆於當天 實驗結束後立即送至邱內科臨床醫事檢驗中心進行檢驗，其中 1 ml 之 EDTA 管進行血液常規之檢測，而 2 ml 之 EDTA 管則在離心後取出血漿置 於離心管內，放到零下 20℃冷凍，於日後統一分析瘦體素。
（二） 控制實驗之採血
控制實驗之採血流程與中等強度運動之採血流程相同。所有受試者於 運動實驗前一天的早上 7:10 到達實驗室，分別在 4 個時間點上 （圖 3），
以注射筒由留置針處分別採血 3 ml。
圖3 運動試驗之採血流程圖。 ↓: 代表採血時間。
（三） 血液分析
本 研 究 之 血 漿 瘦 體 素 濃 度 檢 測 係 採 放 射 免 疫 分 析 法 (Radioimmunoassay, RIA) 進行定量分析，由於實驗室並無相關設備，因此 所有檢體皆委託台北市邱內科聯合醫事檢驗中心代為測定。主要檢測方式 簡述如下（詳細檢測程序見附錄三）：
1.檢測方法：RIA
2.使用儀器：γ-閃爍計數器 (DPC GAMBYT CR 20 well Gamma Counter)。
3.使用試劑：Human Leptin RIA-Kit (Linco ResearchInc., Missouri, USA)。
4.檢測極限：最低濃度 0.5 ng/ml (100 µl 的檢體)。
5.精 密 度：CV<6.0 % （與樣本複份之測量值差）。
6.測 量 值：以雙份試管測量值之平均值為代表。
安靜恢復 60% HRR 運動
7:15 坐姿休息
7:10 到達實驗室 7:35 進食 7:45 進食完畢 8:15 運動開始 9:00 運動結束
安 靜 休 息 30 分 鐘
9:45 實驗結束
六、資料處理與統計分析
實驗所得資料以 SPSS 13.0 for Windows 統計套裝軟體進行以下考驗與 分析：
（一）以獨立樣本 t-test 考驗受試者身體組成、安靜空腹時血漿瘦體素濃度 及運動期的 HR、V•O2、RER 及 V•E 等依變項之差異顯著情形。
（二）以二因子混合設計變異數分析考驗體重因子 （肥胖組與體重過輕組）
及時段因子 （共 4 個時間點） 之血漿瘦體素變化的差異顯著情形。
（三）以重複量數二因子變異數分析分別考驗肥胖組與體重過輕組在實驗 因子 （控制及運動） 及時段因子 （共 4 個時間點） 之血漿瘦體素 濃度變化的差異顯著情形。
（四）以皮爾遜積差相關法考驗瘦體素與身體組成指標的相關。
（五）本研究中之顯著水準，皆訂為 α=.05。
