中
中
中
中 國
國
國 醫
國
醫
醫 藥
醫
藥
藥
藥 大
大
大
大 學
學
學
學
碩士論文
編號：IEH-1717
抗氧化基因多型性和蛋白質羰基濃度標記
與冠狀動脈心臟病之關係
Polymorphisms of antioxidant genes and
biomarker of protein carbonyl associated
with coronary heart disease
所 別：環境醫學研究所
指導教授：吳芳鴦 教授
葉志清 助理教授
學 生：賴慶輿 Ching-Yu Lai
學 號：9465017
中華民國 九十六 年 六 月
誌謝
誌謝
誌謝
誌謝
回首兩年的研究所生活，真的是歡笑也有汗水。在研究的過程中，讓我深深體會 到完成任何研究都需要辛苦的付出，也需要許多人的合作與幫忙，在此感謝所有幫助 過我，使我可以順利完成這篇論文的每一個人。 首先誠摯的感謝指導教授吳芳鴦博士與葉志清博士，讓我知道學習與做事時應有 的積極態度，兩位老師對學問的嚴謹與認真更是我輩學習的典範。吳老師引領我進入 預防醫學的領域，引發我產生興趣以及學習動機。葉老師悉心的教導使我得以一窺分 子流行病學的深奧，不時的討論並指點我正確的方向，使我在這些年中獲益匪淺。雖 然不時督促自己要努力認真，但偶有犯錯時也感謝老師的包容與教誨。另外也要感謝 口試委員宋鴻樟院長、楊俊毓教授、謝玲玲教授在論文審查時給予的寶貴意見，使這 份論文更加充實完整。 大學時代就同班到現在的同學姿明、孟宏、泰進、子仲、永政、建安、敏慧、佳 琪和晉維，謝謝你們這六年來一路的陪伴，也感謝羽伶的打氣與體諒，給予了我精神 上的支持。感謝實驗室的學弟易承與振霽，因為有你們的幫忙，這篇論文才得以順利 完成。學妹硯青、筱真、中棻、帝堯、明蓁、宛儀、祥昱、菀屛、昱梅、彥熹和舒涵， 因為有你們的加入，辦公室變得更有朝氣與歡樂。倫愷、祖恩、紫渝、家玉、啟宏、 志偉與翊軒，謝謝你們在我情緒低落時，適時的給予我鼓勵。還要感謝在求學過程中， 伴隨我成長的所有師長及同學，因為有你們的勉勵，讓我有勇氣一步步向前邁進。 最後要深深感謝我親愛的父母及妹妹，感謝你們的支持與鼓勵，因為有你們的辛 苦付出，並且不時給予我關懷，讓我在求學過程無後顧之憂，能夠順利完成這份論文， 家人是我最大的動力。在此懷抱著感恩的心情，將此論文獻給我所摯愛的人們。 慶輿 2007.07.16 于中國醫藥大學 環境醫學研究所目錄
目錄
目錄
目錄
誌謝 ··· i 目錄 ···ii 表目錄 ··· iv 摘要 ··· v Abstract··· vii 第一章 前言 ··· 1 第二章 文獻探討··· 3 第一節 冠狀動脈心臟病的流行病學特徵 ··· 3 第二節 冠狀動脈心臟病的危險因子 ··· 4 第三節 氧化壓力與冠狀動脈心臟病 ··· 7 第四節 抗氧化 MnSOD、CAT 與 GPx1 基因··· 8 第五節 氧化壓力生物指標--蛋白質羰基濃度(Protein Carbonyls)··· 11 第三章 材料與方法··· 13 第一節 研究對象收集 ··· 13 第二節 基本資料及危險因子暴露收集 ··· 13 第三節 基因型檢定 ··· 14第五節 統計分析 ··· 22 第四章 結果 ··· 24 第一節 冠狀動脈心臟病研究對象之描述性統計分析 ··· 24 第二節 氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心臟病之相關性 ··· 29 第三節 氧化壓力基因型和環境因子與冠狀動脈心臟病之相關性 ··· 32 第四節 蛋白質羰基濃度與冠狀動脈心臟病之相關性 ··· 33 第五章 討論 ··· 36 第六章 結論 ··· 43 參考文獻 ··· 44
表目錄
表目錄
表目錄
表目錄
表一 冠狀動脈心臟病研究對象之人口基本變項分布 ··· 49 表二 冠狀動脈心臟病研究對象之生活習慣分布 ··· 50 表三 冠狀動脈心臟病研究對象之各項生化指標 ··· 51 表四 冠狀動脈心臟病研究對象之健康情形分佈 ··· 52 表五 依冠狀動脈阻塞程度分組比較人口基本變項和生化指標 ··· 53 表六 冠狀動脈心臟病研究對象依生活習慣相關之勝算比 ··· 54 表七 冠狀動脈心臟病研究對象和共病狀況之勝算比 ··· 55 表八 冠狀動脈心臟病研究對象依生化指標分組之勝算比 ··· 56 表九 冠狀動脈心臟病危險因子之多變項邏輯斯迴歸分析 ··· 57 表十 冠狀動脈心臟病研究對象之氧化壓力基因型分佈情形 ··· 58 表十一 冠狀動脈心臟病研究對象依氧化壓力基因型分組之勝算比 ··· 59 表十二 冠狀動脈阻塞程度與氧化壓力基因型之相關性 ··· 60 表十三 氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心臟病之相關性依年齡分組 ··· 61 表十四 氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心臟病之相關性依性別分組 ··· 61 表十五 氧化壓力基因型交互作用與冠狀動脈心臟病之勝算比 ··· 62 表十六 氧化壓力基因型(MNSOD、CAT、GPX1)變異數與冠狀動脈心臟病之勝算比 ··· 63 表十七 依年齡分組探討氧化壓力基因型(MNSOD、CAT、GPX1)變異數與冠狀動脈 心臟病之勝算比 ··· 63 表十八 依性別分組探討氧化壓力基因型(MNSOD、CAT、GPX1)變異數與冠狀動脈 心臟病之勝算比 ··· 63 表十九 抽菸和氧化壓力基因型與冠狀動脈心臟病之勝算比 ··· 64 表二十 飲酒和氧化壓力基因型與冠狀動脈心臟病之勝算比 ··· 65 表二十一 冠狀動脈心臟病研究對象之羰基濃度分布--依疾病及人口基本變項分組 66 表二十二 羰基濃度與冠狀動脈心臟病之勝算比 ··· 68 表二十三 冠狀動脈阻塞程度與羰基濃度之相關性 ··· 68 表二十四 冠狀動脈心臟病研究對象之羰基濃度分布--依疾病及基因型分組 ··· 69 表二十五 氧化壓力基因型和羰基濃度與冠狀動脈心臟病之勝算比 ··· 70摘要
摘要
摘要
摘要
心臟血管疾病為台灣地區常見慢性病之ㄧ，2005 年所公佈的台灣十 大死因顯示，心臟疾病排名第三位，而冠狀動脈心臟病則是心血管疾病 重要的病因。流行病學研究顯示，許多遺傳和環境因子包括年齡、性別、 抽菸、飲食習慣、高血壓、糖尿病和家族史都與冠狀動脈心臟病有關， 而氧化壓力對於冠心病發生的病原上亦扮演重要角色，但證據有限。抗 氧化壓力基因多形性可能修飾氧化壓力對冠心病的影響，而影響個人對 動脈粥樣硬化或心血管疾病的易感性。本研究要探討抗氧化壓力之基因 多形性（MnSOD、CAT、GPx1）和氧化壓力生物標記之蛋白質羰基濃度 與冠狀動脈心臟病之相關性。 研究對象選自基隆長庚醫院接受心導管門診檢查之民眾，病例組為 經由醫師詳細診斷，發現具有一條以上冠狀動脈阻塞超過 50％者。對照 組需為非癌症之病人，且並未發現有冠狀動脈阻塞的現象。最終病例組 有 663 位，對照組有 413 位，合計 1076 名研究個案進入統計分析。並使 用自填式問卷，其內容包含基本人口學資料、生活習慣、人格特質與家 族病史。抽取血液以進行 MnSOD Val-9Ala、CAT C-262T 和 GPx1 Pro198Leu 之基因多形性分析，進一步利用 ELISA 之方法分析血漿蛋白 質羰基濃度。 研究結果顯示，吸菸習慣與飲酒習慣對於冠狀動脈心臟病的發生有 顯著相關性，有吸菸者罹患冠心病之相對風險為未吸菸者之 3.06 倍（95% CI = 2.04-4.59），有飲酒者的相對風險較未飲酒者降低 48％（OR = 0.52， 95% CI = 0.35-0.77），皆具統計學上顯著差異（p < 0.05）。MnSOD 帶有 Ala 對偶基因者相較於帶有 Val/Val 者，有 1.8 倍之風險的到冠狀動脈心 臟病（OR = 1.81，95% CI = 1.05-3.10），而 CAT 與 GPx1 基因多形性與冠心病發生之相關性，並無發現顯著差異。但在將性別、年齡分組後發 現，男性和年輕族群帶有 MnSOD、CAT 變異型對偶基因，有較高的風 險罹患冠心病，尤其是男性個案 MnSOD 基因為 Ala 對偶基因者風險較 Val/Val 為最高（OR = 2.43，95% CI = 1.16-5.11）。觀察三個基因的共同 作用，與三個基因皆為常見之基因型相較，有一基因變異型和二個者， 風險分別為1.63 倍（95% CI = 1.03-2.58）和 2.40 倍（95% CI = 0.73-7.88）。 蛋白質羰基平均濃度，在病例與對照兩組之間並無顯著差異。 綜合言之，吸菸、飲酒、年齡、性別、糖尿病、家族史與血脂異常 與冠狀動脈心臟病之發生有相關性。MnSOD 基因多型性與發生冠心病有 關。蛋白質羰基濃度並未與冠心病有相關。 關鍵字：冠狀動脈心臟病、MnSOD、CAT、GPx1、羰基濃度、吸菸、飲 酒
Abstract
Coronary heart disease (CHD) is the most prevalent heart disease and the third leading cause of deaths in 2005 for Taiwanese population. Epidemiological studies have shown that genetic and environmental factors, including age, gender, cigarette smoking, diet, hypertension, diabetes and family history, are related to CHD. Oxidative stress also plays an important role in the etiology of this disease, but evidences are limited. Polymorphism of antioxidant genes may modify the CHD risk from oxidative stress, and contribute to the susceptibility for atherosclerosis or cardiovascular disease. Our study was conducted to examine the association between polymorphisms (MnSOD, CAT, GPx1) of antioxidant genes, plasma protein carbonyls (a biomarker of oxidative stress) and risk of coronary heart disease.
Participants were recruited from the Chang Gung Memorial Hospital in Keelung. Cases were angiographically diagnosed with the present of > 50% stenosis in one of the coronary arteries, and controls were with the normal coronary arterises. A total of 663 cases and 413 controls were included in our study. Information on sociodemographic characteristics of study participants were ascertained by a slef-reported questionnaire. Genotypes of MnSOD, CAT, and GPx1 were confirmed by PCR-RFLP methods. We analyzed protein carbonyls by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA).
Our results showed that cigarette smoking and alcohol comsunption were signifcantlly associated with the risk of coronary heart disease. Compared with non-smoker, the ORs for smokers was 3.06 (95% CI = 2.04-4.59). Drinkers had a 48% decreased risk compared with non-drinkers (OR = 0.52, 95% CI = 0.35-0.77). We also found that individuals carrying the MnSOD Ala allele had 1.8-fold risk of coronary heart disease than those carrying Val/Val genotype (OR = 1.81, 95% CI = 1.05-3.10). However, CAT and GPx1
genotype were not associated with CHD risk. After stratified by gender and age, men or younger subjects inheriting variant genotype of MnSOD and CAT would at higher CHD risk, especially for men having MnSOD Ala allele compared to Val/Val genotype (OR = 2.43，95% CI = 1.16-5.11). Compared to the most common genotypes of the three genes, the ORs for individuals carrying one variant and two variants were 1.63 (95% CI = 1.03-2.58) and 2.40 (95% CI = 0.73-7.88), respectively. However, the protein carbonyl levels were not significantly different between cases and controls.
Our results suggest that cigarette smoking, alcohol drinking, age, sex, diabetes, and dyslipidemia may contribute to the development of coronary heart disease. Genetic polymorphism of MnSOD also play a role in the CHD risk, but plasma protein carbonyls are not associated with the disease risk.
Keywords：Coronary heart disease, MnSOD, CAT, GPx1, protein carbonyl levels, cigarette smoking, alcohol drinking
第一章
第一章
第一章
第一章 前言
前言
前言
前言
心臟血管疾病是全世界最主要的致死疾病之ㄧ，全球每年約有一千 七百萬人死於心血管疾病，尤其是冠狀動脈心臟病和中風，大約佔全球 每年死亡人數的三分之ㄧ[1,2]。在台灣，心臟疾病是除了惡性腫瘤和腦 血管疾病之外，2005 年台灣地區第三大死因，其年齡標準化死亡率為每 十萬人口 48.3 人[3]。因此心血管疾病之預防是值得關注的公共衛生議題。 許多研究顯示，冠狀動脈心臟病危險因子包含年齡、性別、高血壓、 吸菸、高膽固醇飲食、糖尿病、肥胖、停經、缺乏運動、高尿酸、社會 經濟地位和家族史[4-6]。另外氧化壓力亦扮演重要角色。 氧化壓力調控的細胞傷害來自於活性氧化物種（reactive oxygen species, ROS），當內因性或外因性產生之 ROS，超過抗氧化系統負荷能 力時，即會造成氧化壓力（oxidative stress），經由正常細胞作用和高化學 反應而攻擊脂肪、蛋白質和 DNA，使其產生氧化的現象[7-10]。血管系 統中，內皮細胞、平滑肌肉細胞與巨噬細胞所產生的 ROS，主要與動脈 粥狀硬化有關[11]。過氧化物歧化酵素（superoxide dismutase, SOD）、過氧化氫酵素 （catalase, CAT）和麩胺基硫過氧化酵素（glutathione peroxidase, GPx1） 等酵素活性，具有抗氧化壓力之能力，構成人體內抵抗 ROS 傷害之第一 道防線。而 MnSOD、CAT 和 GPx1 基因皆有多形性，不同之基因型會影 響其酵素活性，進而影響預防氧化壓力之效果[12,13]。
而這些氧化的蛋白質，可以透過酵素連結免疫吸附分析法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）[14,15]分析蛋白質羰基濃度，為一良好的氧 化壓力生物偵測指標。
本研究連續收集至醫院進行心導管檢查的對象，利用病例對照研究 設計，探討抗氧化壓力之基因多形性（MnSOD、CAT、GPx1）和氧化壓 力生物標記（蛋白質羰基濃度）與冠狀動脈心臟病之相關性。
第二章
第二章
第二章
第二章 文獻探討
文獻探討
文獻探討
文獻探討
第一節 第一節 第一節 第一節 冠狀動脈心臟病的冠狀動脈心臟病的冠狀動脈心臟病的冠狀動脈心臟病的流行病學特徵流行病學特徵流行病學特徵流行病學特徵 心臟血管疾病是全世界最主要的致死疾病之ㄧ，根據 WHO 在 2004 年的研究估計，全球每年約有一千七百萬人死於心血管疾病，尤其是冠 狀動脈心臟病和中風，大約佔全球每年死亡人數的三分之ㄧ，其中超過 60％發生在開發中國家，且發生的對象並無社會經濟地位的區分，而更 年期後的婦女其罹病風險較高[1,2]。雖然心臟病的死亡率在北美和許多 西歐的已開發國家有逐漸下滑的趨勢，但在開發中國家預估在未來會再 增加 82％的死亡率。 在台灣，心臟疾病也是重要的致死疾病之ㄧ，行政院衛生署 2005 年 所公佈的資料顯示，心臟疾病是除了惡性腫瘤和腦血管疾病之外，為台 灣地區第三大死因，死亡人數高達為 12,970 人，佔全國死亡人數的 9.3 ％，其年齡標準化死亡率為每十萬人口 48.3 人；依性別分開來看，男性 與女性分別位居第二、四位。以主要死亡年齡來看，死於心臟病的平均 年齡為 73.4 歲，較所有死因平均年齡 67.9 歲來的高，可證明心臟血管疾 病屬於慢性疾病，死亡人口以老年人居多[3]。第二節 第二節 第二節
第二節 冠狀動脈冠狀動脈冠狀動脈冠狀動脈心臟病心臟病心臟病心臟病的的的的危險因子危險因子危險因子危險因子
全球最著名的心臟病流行病學研究為Framingham Heart Study，研究 中發現高膽固醇、高血壓和抽菸為冠狀動脈心臟病主要的致病因子，而 年 齡 、 性 別 與 家族 史 亦 為 重 要 的危 險 因 子 [16]。Krishnan 等 人 以 The Multiple Risk Factor Intervention Trial（MRFIT）為研究對象發現，痛風所 引起的關節炎也和急性心肌梗塞的發生有顯著的相關[17]。在Backer等人 的研究中發現，高尿酸也是心血管疾病獨立危險因子[18]。許多研究都顯 示，具有代謝功能異常疾病的人，其罹患心臟病的機率較一般人高，且 停經後婦女和老年人亦有較高的風險[4-6]。美國心臟協會依據流行病學 和臨床研究的證據，冠狀動脈心臟病危險因子包含高血壓、吸菸、高膽 固醇飲食、糖尿病、肥胖、停經、缺乏運動、年齡、性別、社會經濟地 位和家族史等等[19]。在台灣金山世代研究分析，年齡、高血壓、血脂異 常是冠狀動脈心臟病和中風共同的危險因子，但是以高血壓最為重要， 其預測冠狀動脈心臟病危害風險（hazard risk），男性為2.80、女性為 6.08[20]。 一、環境因子 （一）飲食 一般認為飲食是冠狀動脈心臟病形成的重要環境因子，其中結果最 顯著的是高膽固醇的攝取。動物脂肪中含有豐富的飽和脂肪酸，因此會 使得體內的總膽固醇（total cholesterol）和LDL（low density lipoprotein, 低
清濃度，已被證實會提高罹患心血管疾病的風險[22,23]。在一個包含 82,802名女性護士的世代研究中發現，由蔬菜中攝取脂肪和蛋白質，可以 適度降低罹患冠狀動脈心臟病的風險[24]。藉由食用牛奶等乳製品的方式 來吸收鈣質，也可以有效降低得到心臟病及中風的風險[25]。 （二）生活習慣 生活習慣也與冠狀動脈心臟病有密切的關係，如運動、抽菸、喝酒 [26-28]等。由於飲食和運動習慣會影響肥胖情形，Li等發現BMI（Body Mass Index, 身體質量指標）值越高，得到冠心病的風險也逐漸升高，若 BMI值在標準值之內，運動量小罹病機率亦較高[29]。Hu 等人研究發現， 患有糖尿病的婦女每週運動的時數越多，對於得到冠心病的風險也就變 的比較小[30]。因為吸菸而導致冠狀動脈心臟病的發生，在流行病學的研 究早已被證實，吸菸者罹患冠狀動脈心臟病的風險，是未吸菸者的2-4倍， 罹患中風的風險是2倍[19]。 二、遺傳因子 雖然環境因素佔了心臟血管疾病發生很重要的原因，但是遺傳因素 也是同等重要，家族史是心血管疾病重要的危險因子，有心血管疾病家 族史的年輕健康男女，其未來得到心血管疾病的壓力會大很多[19,31]。 而現在最常被討論的議題，則是基因多形性影響酵素活性，使得人們增 加心血管疾病的風險。Apo E2/ Apo E4（apolipoprotein E，脂蛋白原 E） [32]、IL-6 -174G＞C（interleukin-6，白細胞介素-6）[33]、ACE Ins/Del （angiotensin converting enzyme，血管轉化酶）[34]和 FIBB -455G＞A （β-fibrinogen，纖維蛋白原 B）[35]等基因型多形性，皆會影響罹患冠狀
動脈心臟病的風險。 三、環境因子與遺傳因子之交互作用 即使個體暴露在相同程度的環境因子下，發生疾病的機率也不盡相 同，會有這樣的差異，可能與個體本身之遺傳與習慣養成有關。常見之 遺傳變異（基因多型性）可能加強各體對環境致病因子的異感性，基因 多型性會改變酵素活性，使致病因子代謝速率有所不同，環境因子如吸 菸、飲酒、飲食和生活習慣，可能與這些常見之遺傳因子有交互作用 （interaction）的現象，使人在特定之疾病有較高或較低的危險性。 Humphries 等人[32]在英國收集了超過 3000 位男性，經過 6 年追蹤 （follow up）研究發現，單看吸菸對冠狀動脈心臟病之風險為 1.94 倍（95% CI = 1.258-3.01）。Apo E 帶有 ε4 對偶基因者之膽固醇較 ε3 者高 2%，而 ε2 之膽固醇濃度又較 ε3 低 7％，顯示 Apo E 基因型與膽固醇濃度高低有 關。相較於不吸菸者，有吸菸者且 ApoE 基因型為 ε3/ε3 之危險比為 1.68， 帶有 ε2 對偶基因者為 1.18，帶有 ε4 對偶基因者為 3.17，在 APOE 基因 型與吸菸與否之間，對於冠心病之風險有交互作用（p = 0.007）。由此研 究結果可發現，本來 ApoE 基因型對於冠心病的危險性就有所不同，若帶 有較高風險的基因型且有吸菸習慣，對於罹患冠心病的危險性，將會觀 察出有更高之風險。
第三節 第三節 第三節
第三節 氧化壓力氧化壓力氧化壓力氧化壓力與冠狀動脈心臟病與冠狀動脈心臟病與冠狀動脈心臟病與冠狀動脈心臟病
氧化壓力調控的細胞傷害來自於活性氧化物種（reactive oxygen species, ROS）或是活性氮化物種（reactive nitrogen species, RNS），像是 過氧化離子（superoxide anion）、過氧化氫（hydrogen peroxide）、氫氧根 （hydroxyl radical）和氧化氮（nitric oxide），是經由正常細胞作用和高化 學反應而攻擊脂肪、蛋白質和DNA，使其產生氧化的現象[7,8]。ROS的 產生可以分為外因性和內因性。外因性ROS包含香菸、污染物、有機溶 劑、麻醉藥物、過氧化環境、農藥和輻射線等暴露；內因性則來自於有 氧代謝、活化的白血球和酵素[9]。ROS的產生與抗氧化作用的能力如果 不平衡，且偏向製造氧化壓力這一方，就會使得氧化壓力相關疾病產生 [10]，這意味著ROS是許多疾病發生時重要的危險因子。氧化壓力已被證 實和一些慢性疾病的發生有關，像是癌症、心臟血管疾病、白內障、退 化 性 視 網 膜 黃 斑 部 病 變 （ age-related maculopathies ）、 阿 茲 海 默 症 （Alzheimer’s disease）和老化相關疾病[8-10]。 越來越多的證據顯示，氧化壓力在調控心臟肌肉功能上扮演重要的 角色[7,36,37]，血管壁中的脂肪與蛋白質氧化現象，是動脈硬化所出現的 特徵之ㄧ。血管系統中，內皮細胞、平滑肌肉細胞與巨噬細胞所產生的 ROS，主要與動脈粥狀硬化有關[11]。有些學者提出假說，氧化的 LDL 可能成為人類發展出心臟血管疾病，重要的原因之ㄧ[10,37,38]。
第四節 第四節 第四節
第四節 抗抗抗抗氧化氧化氧化氧化 MnSOD、、、、CAT 與與與與 GPx1 基因基因基因 基因
人體內的抗氧化系統可分為酵素系統與非酵素系統，酵素系統包含 過氧化物歧化酵素（superoxide dismutase, SOD）、過氧化氫酵素（catalase, CAT）和麩胺基硫過氧化酵素（glutathione peroxidase, GPx1）等酵素；非 酵素系統則有維生素 C、E 和 β-胡蘿蔔素等等。這些抗氧化酵素可由人體 自行製造，位於細胞內負責去除細胞內之 ROS，而細胞外的 ROS 就需要 靠非酵素系統的酵素去除。 一、MnSOD 當人體細胞或粒線體利用氧氣以進行新陳代謝時，電子和氫反應不 完全時，就會產生過氧化陰離子（．O2-），若不予消除而累積在體內，進 而攻擊正常細胞，使人類產生病變及老化。SOD是人體對抗自由基的第 一道防線，負責催化過氧化自由基的歧化作用（dismutation），使高破壞 性的過氧化物變成低破壞性的過氧化氫（H2O2）和氧。生物體內依作用 位置和與SOD結合的金屬離子不同，可分為三種不同亞型的SOD，為 MnSOD (manganese SOD) 、 Cu-ZnSOD (copper-zinc SOD) 和 ECSOD (extracellular SOD)。
MnSOD的基因座落於染色體6q25.2的位置，酵素主要是在細胞質內 合成，再傳送到粒線體基質中進行反應，約佔70% SOD的活性[12]。由於 MnSOD作用的位置是在粒線體，所以在控制粒線體所產生的自由基上， 扮演重要的角色。Chen[39]等人利用基因轉植的老鼠發現，MnSOD酵素
到一些因子影響，像是年齡（隨著年齡增長而減少）[40]、性別（在女性 的活性比較高）[41]和基因型。
目前已經發現MnSOD基因具有多形性，主要有兩個最常被研究，分
別是Val -9Ala和Thr58Ile，本研究以Val -9Ala多形性來做分析。MnSOD在 粒線體標靶序列（mitochondrial targeting sequence, MTS）上第16號胺基酸 鹽基T被C取代，使得胺基酸由Val (GTT)變成Ala (GCT)，也可以說是在成 熟蛋白質序列上第9個胺基酸，是人類粒線體標靶序列所發現第一個多形 性點[42-44]。基因多形性可能會因種族或地域的不同而有所改變， MnSOD Val-9Ala這個位置就有出現這樣的情形，在中國漢民族和日本的 研究，Ala對偶基因出現的頻率（11-30%）較少於歐洲人（41-62%）[43-45]。 而我們研究對象是台灣族群，Val對偶基因出現的頻率就比較高，因此將 Val/Val視為野生型（wild type）。 這個胺基酸的改變，可能會影響到之後的酵素活性，進一步影響生 物體內代謝ROS的能力，導致細胞遭受氧化性傷害，因而產生疾病。一 項在南韓研究發現[46]，患有第二型糖尿病的病人，他們帶有一個以上的 Ala，得到糖尿病引起之黃斑部水腫（diabetic macular edema）的風險， 是Val/Val病人的2.13倍（95% CI = 1.14-4.07, p = 0.01），且帶有一個以上 的Ala的病患，同時得到高血壓的情形，也是明顯多於帶有Val/Val的病 人。在芬蘭的Mitrunen等人[47]研究發現，帶有一個以上的Ala的芬蘭女 性，得到乳癌的風險是帶有Val/Val的1.5倍，停經後婦女則為1.7倍，停經 後婦女若有吸菸或喝酒的習慣，風險更高達3.7和2.2倍。
二、CAT 當 SOD 酵素所產生的過氧化氫，雖然對人體比較無害，但是分解時 所產生的衍生物，如氫氧根離子（．OH）對人體依舊是有危害性，所以 仍需要其他酵素系統來代謝過氧化氫。CAT 的功能就是代謝過氧化氫， 使其分解成對人體無害的氧與水。CAT 的酵素活性在女性比較高，與年 齡的關係不顯著，且有吸菸的女性較沒吸菸的活性來的高[41]。 CAT 的基因座落於染色體 11p13 的位置，約佔 34 kb 且包含 12 個內 含子（intron）和 13 個外顯子（exon）[48]。CAT 基因的啟動子區域（promoter region）一個常見的基因多形性，使得鹼基由 C 變成 T (C-262T)。CAT 的 酵素活性被認為與人體對抗氧化壓力的反應有關，實際上此基因的變異 型與高血壓[49]、白斑症[50]和砷引起的皮膚過度角化有關[51]，而這些 疾病都與氧化壓力有關。 三、GPx1 GPx1 的功能和 CAT 很相似，也是體內製造出來分解過氧化氫的酵 素，使過氧化氫分解成氧和水[13]。GPx1 利用還原的麩胺基硫（reduces glutathione, GSH）的氧化作用去除過氧化氫，而使 GSH 變成氧化的麩胺 基 硫 （ oxidized glutathione, GSSH ）， GSSH 靠 麩 胺 基 硫 還 原 酵 素 （glutathione reductase, GR）還原成 GSH，GSH 因而可以循環重複利用， GR 需要 NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide phosohate)當作還原劑 去驅動此還原作用[36]。
是 GPx 酵素的次單位。GPx 以硒胺酸（selenocysteine）為活化中心，可 以在催化循環中成功的進行氧化還原反應[13]。由於是在細胞中被發現， 所以可以稱之為細胞 GPx (cellular GPx)，現統稱為 GPx1[13]。在最近的 研究指出，GPx1 蛋白質的活性可以降低冠狀動脈粥狀硬化的形成，也可 以免於動脈組織的粥狀硬化[54]。對於維持心血管組織的健康扮演一個顯 著的角色。 人類的 GPx1 基因座落於體染色體 3p21.3 上，包含兩個外顯子。一 個 GPx1 基因之單核苷酸基因多形性位於第 594 個核苷酸上，胸腺嘧啶(T) 取代胞嘧啶(C)，使在第 198 對密碼子上的 proline (CTC)變成轉譯為 leusine (CCC)(Pro198Leu)[55,56]。在一份以日本第二型糖尿病患為對象的研究發 現[56]，有 Pro/Leu 基因型病患的頸動脈中層內膜（IMT）較 Pro/Pro 基因 型的人厚，罹患冠狀動脈心臟病和周邊血管疾病的比例也較高。 第五節 第五節 第五節 第五節 氧化氧化氧化氧化壓力生物指標壓力生物指標壓力生物指標壓力生物指標--蛋白質羰基濃度蛋白質羰基濃度蛋白質羰基濃度蛋白質羰基濃度(Protein Carbonyls) 研究發現細胞中的蛋白質和胺基酸，會成為 ROS 攻擊的目標，在老 化、氧化壓力和一些病理狀況下，氧化的蛋白質會累積下來，氧化所造 成的胺基酸殘基（residues）改變，會影響蛋白質的構造和功能，而這些 氧化的蛋白質，可以透過一些方法，進而偵測且測量到其濃度[57,58]。 蛋白質羰基濃度的測量，是最常用來當作蛋白質受到 ROS 攻擊之後，所 產生的氧化程度生物指標。 研究發現心臟在局部缺血下會增加氧化蛋白質濃度[59]。其他會引起 蛋白質羰基濃度升高的疾病還包括癌症、動脈硬化、糖尿病、阿茲海默
症、慢性腎臟疾病和帕金森氏症（Parkinson’s disease）[9,60-62]。Oberg 等人[61]利用 ELISA 的方法發現，慢性腎臟疾病患者的蛋白質羰基濃度 為 0.061 nmol/mg protein 明顯較健康族群 0.029 nmol/mg protein 來的高 （p<0.001）；進一步在慢性腎臟疾病患者身上發現，同時具有糖尿病的病 人，其蛋白質羰基濃度較不具糖尿病病人的濃度高（0.08 versus 0.052 nmol/mg protein）。Mutlu-Turkoglu 等人[63]也發現，冠狀動脈心臟病人血 漿蛋白質羰基濃度，明顯高於健康族群的濃度（p < 0.01）。
第三章
第三章
第三章
第三章 材料與方法
材料與方法
材料與方法
材料與方法
第一節 第一節 第一節 第一節 研究對象收集研究對象收集研究對象收集研究對象收集 本研究之研究對象，於 1999 年 11 月至 2001 年 11 月收集，選自基 隆長庚醫院接受心導管門診檢查之居民。病例組為經由醫師詳細診斷， 具有一條以上冠狀動脈阻塞超過 50％者。對照組需為非癌症之病人，接 受心導管檢查後，醫師並未發現有冠狀動脈阻塞的現象。已有過中風、 心臟病、老年癡呆現象之病史者，不予納入研究對象。 最初原有 1097 名研究個案收入本研究，排除曾經患有癌症病史個案 21 名，最終病例組有 663 位，對照組有 413 位，合計共有 1076 位研究個 案進入統計分析。 第二節 第二節 第二節 第二節 基本資料及危險因子暴露收集基本資料及危險因子暴露收集基本資料及危險因子暴露收集基本資料及危險因子暴露收集 在病人同意下，由護理師發給研究對象一份自填式問卷，來收集病 歷沒有記載的健康史及生活型態史。問卷資料包含： 1. 基本人口學資料（年齡、性別、種族、職業等） 2. 抽菸習慣（抽菸有無、抽菸量、戒菸年數等） 3. 喝酒習慣（喝酒有無、喝酒量、酒品種類、戒酒年數等） 4. 人格特質 5. 慢性病史與家族心臟病史之情形由病歷所記載之身高、體重等人體測量資料以求得身體質量指數 （body mass index, BMI）。由血液、尿液生化檢查結果獲得膽固醇、低密 度脂蛋白、高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL）、三酸甘油脂 （triglyceride, TG）、肌酐酸（creatinine）及尿酸（uric acid）等資料。
第三節 第三節 第三節
第三節 基因型檢定基因型檢定基因型檢定基因型檢定
抽取研究對象 10ml 靜脈血之後，由長庚醫院心臟內科實驗室，將研 究個案的全血，經由 Kit DNA 萃取試劑組（QIAGEN, Hilden, Germany） 萃取出 DNA，放入-20℃冰箱加以保存。DNA 檢體利用聚合酶連鎖反應 及 限 制 片 段 長 度 多 型 性 （ PCR-RFLP ； Polymorphism chain reaction-restriction fragment length polymorphism）之方法，進行 MnSOD、 CAT 和 GPx1 三種基因型之分析。三種基因型所用之核酸引子（primer） 序列，如下表所示。 表、MnSOD、CAT、GPx1 基因型之核酸序列 基因型 核酸引子序列(5’-3’) MnSOD 5’-GCACCAGCAGGCAGCTGGCGCCGG-3’ 5’-TGCGCGTTGATGTGAGGTTCCAG-3’ CAT 5’-TAAGAGCTGAGAAAGCATAGCT-3’ 5’-AGAGCCTCGCCCCGCCGGACCG-3’ GPx1 5’-TGTGCCCCTACGGTACA-3’ 5’-CCA AATGACAATGACACAGG-3’
一、MnSOD 基因多形性分析 (一) PCR 反應溶液之配置
1.濃度為 100 ng/ul 之 DNA 0.5ul 2.10×buffer((NH4)2SO4) 3ul
3.2.5mM 之 Mg2＋ 2.4ul
4.MnSOD forward primer (5 p mole) 0.5ul 5.MnSOD reverse primer (5 p mole) 0.5ul 6.濃度為 0.2 mM 之 dNTP 0.6ul
7.Taq polymerase (Fermentas) 0.5ul 8.最後以蒸餾水調製成 30ul
(二) PCR-RFLP 反應步驟
先以 95℃加熱五分鐘；其次以 95℃一分鐘，61℃一分鐘，72℃兩分 鐘的條件循環反應 35 次；最後再以 72℃七分鐘使產物反應更完全。 （denaturation at 95℃，annealing at 61℃，elongation at 72℃）。
接著在 15ul PCR 產物內加入 NgoM IV 限制酶 5ul、限制酶緩衝液 3 ul 及蒸餾水至總體積 30ul，放置於 37℃烘箱內 12 小時，使其完全反應。再 以 6% acrylamine gel 進行電泳分析（180V，40 min），以溴化乙錠（ethidium bromide）染色，接著在紫外光燈下觀察與照相。
(三)MnSOD 基因型之判定
二、CAT 基因多形性分析 (一) PCR 反應溶液之配置 1.濃度為 5 ng/ul 之 DNA 10 ul 2.10×buffer 1.5ul
3.CAT forward primer (5 p mole) 0.4ul 4.CAT reverse primer (5 p mole) 0.4ul 5.濃度為 0.2 mM dNTP 0.3ul
Line 1：Val/Va type（112bp）
Line 2：Ala/Ala type（112bp，，，，90bp，22bp） Line 3：Val/Ala type （90bp，22bp）
Line 4：negative control（NTC） Line 5：100 bp ladder marker
1 2 3 4 5 500 bp 200 bp 100 bp 90 bp 112 bp
(二) PCR-RFLP 反應步驟
PCR 實驗反應一開始為熱開始（Hot start），94℃加熱五分鐘使雙股 DNA 變性；其次以 94℃30秒，59 35℃ 秒，72 35℃ 秒的條件循環反應 35 次；最後設定在反應 72℃五分鐘使產物反應更完全。（denaturation at 94℃，annealing at 59℃，elongation at 72℃）。
接著在 15ul PCR 產物內加入 Sma I 限制酶 4u、限制酶緩衝液 3ul 及 蒸餾水至總體積 30 ul，放置於 30℃烘箱內 12 小時，使其完全反應。再 以 8% acrylamine gel 進行電泳分析（120V，70 min），以溴化乙錠（ethidium bromide）染色，最後在紫外光燈下判斷基因型與照相。 (三)CAT 基因型之判定 1 2 3 4 5 155 bp 185 bp 500 bp 200 bp 100 bp Line 1：C/C type（155bp） Line 2：T/T type（185bp） Line 3：C/T type（185bp，，，，155bp，30bp） Line 4：negative control（NTC）
三、GPx1 基因多形性分析 (一) PCR 反應溶液之配置
1.濃度為 100 ng/ul 之 DNA 0.5ul 2.10×buffer 3ul
3.GPx1 forward primer (5 p mole) 0.5ul 4.GPx1 reverse primer (5 p mole) 0.5ul 5.濃度為 0.2 mM 之 dNTP 0.6ul 6.Protech Taq 濃度為 2U/λ 取 0.5ul 7.最後以蒸餾水調製成 30ul (二) PCR-RFLP 反應步驟 PCR 實驗反應一開始為熱開始（Hot start），94℃加熱五分鐘使雙股 DNA 變性；其次以 94℃30秒，63 30℃ 秒，72 35℃ 秒的條件循環反應 35 次；最後設定在反應 72℃五分鐘使產物反應更完全。（denaturation at 94℃，annealing at 63℃，elongation at 72℃）。
接著在 15ul PCR 產物內加入 Apa I 限制酶 20u、限制酶緩衝液 3ul 及蒸餾水至總體積 30ul，放置於 30℃烘箱內反應 16 小時。再以 6% acrylamine gel 進行電泳分析（120V，55 min），以溴化乙錠（ethidium bromide）染色，並在紫外光燈下觀察與照相。
(三)GPx1 基因型之判定 第四節 第四節 第四節 第四節 血漿蛋白質羰基濃度分析血漿蛋白質羰基濃度分析血漿蛋白質羰基濃度分析血漿蛋白質羰基濃度分析(carbonyl assay) 一、使用比色法分析來做標準值
(一) 製作氧化 BSA（bovine serum albumin）步驟
1.將 0.234 g 的 FeSO4‧H2O 溶解到 150 ml 的 PBS（phosphate-buffered
saline）中
2.加入 16.7 ml 的 H2O2
3.將 5 g 的 BSA 溶入 100 ml 的 PBS 中，使得 BSA 濃度為 50 mg/ml 1 2 3 4
Line 1：100 bp ladder marker Line 2：negative control（NTC）
Line 3：Pro/Leu type（337bp，，，258bp，79bp） ， Line 4：Pro/Pro type（258bp）
100 bp 500 bp
200 bp
337 bp 258 bp
4.在 37℃的水中，水浴培養一小時 5.加入 17.6 mg 之 BHT()（butylated hydroxytoluene）停止氧化反應 6.貯存在-70℃中 (二) 氧化與未氧化的 BSA 中羰基與蛋白質濃度 1.將未氧化的 BSA 溶入 PBS 中使濃度為 50 mg/ml 2.分別加入 0.25 ml 氧化與未氧化的 BSA 到兩個 3.6 ml 的試管中 3.加入 1 ml 的 10 mM 之 2,4 DNPH（2,4 - dinitrophenylhydrazine）溶解在 2.5 M HCl 到其中一管當作是樣本 4.加入 1 ml 2.5 M HCl 到另一管當作是對照 5.在室溫中避光培養一小時，每 15 分鐘 vortex 一次 6.加入 1 ml 20%之 TCA（trichloroacetic acid），並 vortex 7.將試管放到碎冰中冰浴 10 分鐘 8.離心 3000rpm 五分鐘 9.丟棄表層物，再加入 1 ml 10%之 TCA，並且 vortex 直到顆粒狀物都溶 解為止 10.再度離心 3000rpm 五分鐘之後，倒掉上層液 11.將體積比 1：1 的乙醇與乙酸乙酯混和液加入試管 wash 三次，每次加 入後都要離心，並且倒掉上層液。經過 3 次的 washing，上層液要幾乎 都沒有顏色 12.加入 6M guanidine hydrochloride 使沉澱物溶解其中 13.在 37℃的環境下培養 10 分鐘，使所有的沉澱物都溶解 14.再離心 3000 rpm 五分鐘，將不能溶解的物質移除
(三)測量氧化與未氧化的 BSA 中羰基與蛋白質濃度
1.將未氧化的 BSA 利用 guanidine hydrochloride 稀釋成 2mg/ml，1.5 mg/ml ，1 mg/ml，0.5 mg/ml，0.25 mg/ml 以建立標準曲線；並以 guanidine hydrochloride 當作空白（blank） 2.利用 375 nm 波長測量羰基濃度；280 nm 波長測量蛋白質濃度 3.計算出 280 nm 波長下之平均吸光值，並且減去空白吸光值 4.算 375 nm 之平均吸光值，也減去空白吸光值 5.將有加入 DNPH 的吸光值，減去加入 HCl 的吸光值 6.羰基濃度＝375 nm 平均吸光值＊45.45
二、羰基酵素連結免疫吸附分析法（enzyme-linked immunosorbent assay； ELISA）
(一) 蛋白質衍生物
1.參照之前作好的標準曲線，運用氧化與未氧化的 BSA 和 PBS，將濃度 稀釋為 1.0%、0.5%、0.25%、0.125%及 0%
2.用 PBS 將每一個 sample 的蛋白質濃度稀釋成 4 mg/ml
3.將稀釋成 4 mg/ml 的 sample，取 2 ul 到 96-well plate 中，再加入 6ul 之 DNPH 混和
4.在室溫中避光培養 45 分鐘，每 15 分鐘 vortex 一次 5.加入 12 ul 之 2 M Tris 來停止衍生
(二) ELISA assay
1.將蛋白質衍生物和標準物依次各吸取 200 ul 到 ELISA plate 上，並做二 重複。放入 4℃冰箱 overnight，使其可以 coating 到 plate 上
2.用 300 ul/well 之 wash buffer（0.05% Tween 20 in PBS）來洗 plate，用 0.1%的 BSA in PBS (250 ul/well)來 block，且放置於室溫 1.5 小時。 3.再 wash 一次，加入第一次的抗體 200 ul/well（biotinylated anti-body,
Molecular Probes; diluted 1:2000 with 0.1% BSA, 0.1% Tween 20 in PBS），在 37℃烘箱中培養 1 小時。
4.再 wash 一次，加入第二次的抗體 200 ul/well（streptavidin-biotinylated horseradish peroxidase conjugate, Amersham; diluted 1:4000 in 0.1% BSA, 0.1% Tween 20 in PBS），在室溫中培養 1 小時。
5.最後再 wash 一次，加入 TMB substrate（Sigma Chemical Co., MO,USA） 200 ul/well，室溫中避光培養 15 分鐘 6.加入 2.5 M H2SO4 100ul/well 停止反應 7.在 450 nm 的光波長下，讀取其吸光值，減去 blank 之吸光值後，代入 標準曲線換算每個 sample 羰基濃度 第五節 第五節 第五節 第五節 統計分析統計分析統計分析統計分析 進行冠狀動脈心臟病病患本及正常族群的病例對照分析，依據問卷 訪視資料中的人口基本變項及血液生化檢查資料，進行描述性分析。若 變項為類別變項（categorical variables），使用卡方檢定（Chi-square test）； 若為連續型變項（continuous variables），則用 T 檢定（t-test）來分析，看
因多形性分組，是依基因型所產生之酵素活性選擇出參考組，根據 Bastaki 等人[45]研究結果，發現健康族群之 MnSOD Val/Val、CAT C/C、GPx1 Pro/Pro 基因型所產生之酵素活性最強，抗氧化的能力也是最強，本研究 以此為依據，將這三基因型列為參考組。 多變項分析時，以逐步（stepwise）回歸作為變項選擇，以決定顯著 的為危險因子，估計出各危險因子對於冠心病風險之貢獻。利用非條件 式邏輯斯迴歸（unconditional logistic regression），來計算 MnSOD、CAT 及 GPx1 基因多形性、蛋白質羰基濃度、生活習慣、各項生化指標和病例 與對照組之勝算比（odds ratio, OR）和 95％信賴區間（confidence intervals, CI）。生活習慣、三種抗氧化壓力基因多形性與蛋白質羰基濃度之間的交 互作用，是使用非條件式邏輯斯迴歸，將變項之間的交互作用 p 值分析 出來，再利用 OR11 > OR10*OR01，為協同作用；OR11 = OR10*OR01，為獨
立作用；OR11 < OR10*OR01，為頡抗作用的觀念[64]，推論是屬於何種累
乘性交互作用。所有統計檢定都採雙尾檢定（two-tails test），資料分析所 使用的軟體為 SAS 9.1 版。
第四章
第四章
第四章
第四章
結果
結果
結果
結果
第一節 第一節 第一節 第一節 冠狀動脈心臟病研究對象之描述性統計分析冠狀動脈心臟病研究對象之描述性統計分析冠狀動脈心臟病研究對象之描述性統計分析冠狀動脈心臟病研究對象之描述性統計分析 本研究選取之研究個案，共計有 1076 位進入分析，病例組為 663 位， 對照組為 413 位，其中男性有 744 位，女性有 332 位。對照組及病例組 的 社 會 人 口 學 變 項 之 分 布 如 表 一 所 示 ， 性 別 及 年 齡 存 在 顯 著 差 異 （p<0.001），病例組的男性比率較對照組的高（74% vs 61%, p < 0.001）， 也比較年長，病例組平均年齡為 64.7 歲，對照組平均年齡為 58.3 歲 （p<0.001）。在種族、個性、職業和家族病史等變項，兩組之間皆無顯著 差異，兩組之間的種族分布，超過七成七為閩南人，其次為外省人大約 為 10 %。超過一半的人自評個性都屬中庸，職業在兩組皆以家管最多， 其次為農漁工。約有 25%研究對象有冠狀動脈心臟病的家族病史。 分析病例及對照組的生活習慣（表二）分布狀況。病例組的 BMI 平 均值為 25.1 kg/m2，略低於對照組的 25.6 kg/m2，且超過六成的研究對象 在 24 ~ 27 之間，有略為過胖的情形。若以吸菸狀態來分組，對照組有 251 位（60.9%）從不吸菸，121 位（29.4%）有吸菸，40 位（9.7%）已經戒 菸超過一年。病例組中則有 302 位（45.8%）從未吸菸，276 位（41.8%） 有吸菸，82 位（12.4%）已經戒菸超過一年，兩組的吸菸分布具有統計學 上顯著差異（p < 0.001）。以吸菸量來看，每天吸菸超過一包的病患共有 156 位，佔病例組的 29.9 %，對照組中每天超過一包者為 68 位，大約佔 19.3%，具有統計上顯著差異（p < 0.001）。飲酒習慣來看，對照組有 26.0%
各項生化指標分布情形，如表三所示。病例組的肌酐酸平均為 2.0 mg/dl，顯著高於對照組的 1.7 mg/dl（p = 0.035）。對照組之肌酐酸值不正 常的人數佔 35.0%，也是較對照組之 21.1%明顯來得多。以尿酸值來看， 病患的平均尿酸濃度為 8.0 mg/dl，高於正常尿酸濃度 8.0 mg/dl 的病患有 236 位（41.3%），皆比健康族群平均濃度 7.3 mg/dl 和 107 位（32.9%）高 於正常尿酸濃度來得多，並且達到統計上差異（p < 0.001）。HDL 的平均 濃度在病例組為 34.8 mg/dl，較對照組 37.9 mg/dl 低（p = 0.001），病例組 中 HDL 低於正常值的個案比例為 23.4%和對照組的 25.0%，並無顯著不 同。病例組的平均 LDL、膽固醇、三酸甘油脂和 VLDL 指標，皆顯著高 於對照組的平均，且均達統計學上顯著差異（p < 0.001）；病例組的 LDL 大於 190 mg/dl、膽固醇高於 240 mg/dl 和三酸甘油脂高於 200 mg/dl 的人 數比例，分別高達 30.9%、47.9%及 34.4%，而對照組分別只 24.1%、34.6% 及 23.9%。 表四列出研究對象的健康分布，病例組同時患有高血壓的比例為 53.2%，患有糖尿病的比例為 36.1%，患有腎衰竭的比例為 7.8%，皆顯著 高於對照組（p≦0.04），消化性潰瘍和有手術經驗，則是對照組顯著比病 例組盛行（p≦0.03）。同時患有高脂血症、痛風和慢性阻塞肺部疾病的對 照組病患比例，亦略較對照組為盛行。慢性肝炎和曾經手術過的人，在 對照組的比例，則較病例組盛行。 在冠狀動脈心臟病的病例中，有一條冠狀動脈阻塞程度超過 50% 者，共有 246 位（22.9%），兩條動脈阻塞超過 50 %者有 200 位（18.6%）， 三條阻塞都超過 50%者則為 217 位（20.2%），依照冠狀動脈阻塞程度分 組之人口學資料如表五所示。隨著年齡的增加，冠狀動脈阻塞程度也越 趨嚴重，阻塞一條之病患平均年齡為 64.0 歲，兩條者為 65.0 歲，三條者
為 65.3 歲，達到統計上顯著相關（p < 0.001）。男性的冠狀動脈阻塞盛行 率高於女性。吸菸盛行率隨著阻塞數增加而增加（p < 0.001），皆是吸菸 者比非吸菸者多。肌酐酸、尿酸、膽固醇和三酸甘油脂之濃度，隨著冠 狀動脈阻塞程度愈高，濃度也隨之提高（p < 0.001），LDL 和 VLDL 亦有 相同趨勢（p≦0.06），HDL 雖無依疾病嚴重程度減少，但有隨著嚴重程 度而減少的趨勢（p < 0.001）。冠狀動脈阻塞程度愈高，有高血壓和糖尿 病的比率也愈高。 研究對象生活習慣和冠心病相關分析示於表六，吸菸習慣方面，目 前持續有吸菸習慣者，會顯著增加罹患冠狀動脈心臟病的風險，高達 1.90 倍（95% CI = 1.45-2.49），經年齡、性別校正之後，更高達 2.04（95% CI = 1.48-2.82），已戒菸者罹患冠心病的風險亦較從未吸菸者高 39%。以吸 菸量計算，一天一包菸以下者之風險較未吸菸者高 1.3 倍，一天吸菸高於 一包者，罹病的風險更高達 2 倍左右，且具有統計顯著意義（OR = 2.17， 95% CI = 1.48-3.20）。酒類之飲用習慣方面，有喝酒習慣者會降低罹患冠 狀動脈心臟病的風險（OR = 0.75，95% CI = 0.56-1.00），校正年齡、性別 之後，保護作用更加顯著，較無飲酒習慣者降低 33%之罹病風險（OR = 0.67，95% CI = 0.48-0.92）。 依研究對象共病狀態分組計算之勝算比如表七所示，患有高血壓 者，罹患冠狀動脈心臟病的風險高達 1.61 倍（95% CI = 1.26-2.07），校正 年齡、性別後則降為 1.51 倍，依然具有顯著意義（p = 0.002）。罹患有糖 尿病者，不論是否較正年齡、性別，得到冠心病的勝算比更將近 3 倍， 並且達到統計上顯著水準（p < 0.001）。患有高脂血症、腎衰竭和痛風者， 雖不具顯著性，亦可能增加得到冠心病的風險。有消化性潰瘍和手術經
0.36-0.77）與 0.75（95% CI = 0.56-0.99）。患有慢性肝炎和慢性阻塞肺部 疾病者，可能具有保護作用，但未達統計上顯著水準（p≧0.62）。 各項生化指標若異於正常值，皆有可能提高罹患冠狀動脈心臟病之 風險（表八）。肌酐酸值若不正常，得到冠心病之 OR 為 2.01，校正年齡、 性別後則為 1.66（95% CI = 1.21-2.27）。尿酸濃度高於正常值 8.0 mg/dl 時，罹病風險為 1.44（p < 0.05），校正之後為 1.27（p < 0.05）。HDL 高 於正常值時，無論是否校正性別、年齡，皆有降低罹病的趨勢，但並未 達顯著（p≧0.13）。LDL 值越高，則罹患冠狀動脈心臟病的勝算比亦隨 之提高，由 130 ~ 159 mg/dl 的 1.70，增加到 160 ~ 189 mg/dl 的 1.83，最 大為高於 190 mg/dl 的 2.13。校正年齡、性別之後，三組的 OR 分別為 1.68， 1.92 和 2.49。膽固醇、三酸甘油脂與 LDL 亦有相似之趨勢，數值愈高罹 病之風險也愈高。膽固醇≧240 mg/dl 時，罹患冠心病之風險超過 2.5 倍 （OR = 2.52，95% CI = 1.78-3.54），三酸甘油脂≧400 mg/dl 時之風險超 過 2.6 倍（OR = 2.63，95% CI = 1.55-4.46）。VLDL 方面，大於 40 mg/dl 的 OR 為 2.24。 經由逐步（stepwise）回歸方式建立可能影響冠狀動脈心臟病之危險 因子的多變項邏輯斯迴歸模式如表九所示。model 1 為所有研究對象的迴 歸 分 析 結 果 ； 發 現 每 增 加 一 歲 患 病 風 險 之 OR = 1.06 （ 95% CI = 1.04-1.08），男性顯著地比女性危險（OR = 2.04，95% CI = 1.36-3.05）， 糖尿病者較正常者危險（OR = 2.20，95% CI = 1.51-3.19），有心血管疾病 家族史者風險較高（OR = 1.44，95% CI = 1.00-2.09），目前吸菸者和戒菸 者較不吸菸高 3.06 倍（95% CI = 2.04-4.59），和 1.93 倍（95% CI = 1.10-3.39）。LDL 值愈高愈危險，比起< 130 mg/dl，130 ~159 mg/dl、160 ~ 189 mg/dl 和≧190mg/dl 的勝算比，分別為 1.56（95% CI = 0.94-2.59）、
1.81（95% CI = 1.03-3.20）和 1.70（95% CI = 0.88-3.27）。高膽固醇、高 三酸甘油脂和高血壓也有增加罹患冠心病的風險。HDL 值高、有飲酒習 慣者，皆具有保護作用 OR 分別為 0.78（95% CI = 0.53-1.15）和 0.52（95% CI = 0.35-0.77）。
model 2 為具有 DNA 檢體者的多變項邏輯斯迴歸模式。與 model 1 比較，少了 LDL、三酸甘油脂、家族史和高血壓等因子。每增加一歲罹 病風險增加 1.06 倍（95% CI = 1.04-1.07），男性較女性高出 79%的危險（OR = 1.79，95% CI = 1.08-2.95），有吸菸習慣者較不曾吸菸者危險性超過 3 倍（OR = 3.48，95% CI = 2.07-5.85），糖尿病患者較正常者危險（OR = 4.13，95% CI = 2.46-6.93），比起膽固醇< 200 mg/dl 者，200 ~ 239 mg/dl 和≧240 mg/dl 的 OR 分別為 1.26（95% CI = 0.83-2.46）和 3.24（95% CI = 1.90-5.51）。有飲酒習慣、HDL 值高者之勝算比分別為 0.56（95% CI = 0.34-0.92）與 0.59（95% CI = 0.36-0.96），皆具有顯著的保護作用。 而 具 有 血漿 樣本 罹患冠 心病 危險性 之多變 項邏 輯斯迴 歸模式 如 model 3。結果與 model 1 相似，但少了 HDL、LDL 和高血壓三個因子， 卻多了尿酸一項因子。年長、男性、吸菸習慣、糖尿病和膽固醇高於 240 mg/dl 皆會顯著增加冠心病的風險。另外尿酸濃度高者，風險較正常者提 高 67%（OR = 1.67，95% CI = 1.06-2.63）。有飲酒習者之之風險會降低超 過 50%（OR = 0.45，95% CI = 0.26-0.78）。
第二節 第二節 第二節 第二節 氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心臟病之相關性氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心臟病之相關性氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心臟病之相關性氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心臟病之相關性 合計共有 1076 位個案，收集到之 DNA 檢體共計 691 位（64%），比 較起無收集到 DNA 之個案，性別與年齡在兩者之間並無差異。對照組之 MnSOD -9Ala 對偶基因頻率為 7.14%，CAT 之-262T 頻率為 3.01%，GPx1 之 198Leu 頻率為 4.48%，MnSOD Val-9Ala、CAT C-262T 和 GPx1 Pro198Leu 在對照組之分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡定律（p 值分別為 0.40、0.65 和 0.50）。此三種氧化壓力基因多形性在病例組及對照組的分 布狀況如表十，發現 MnSOD -9Ala 的分布略有差異（p = 0.06），但若將 含有 Ala 對偶基因合併（Val/Ala + Ala/Ala），與 Val/Val 之分布即有顯著 差異（p = 0.02）。病例與對照兩組在 CAT C-262T、GPx1 Pro198Leu 之分 布情形差不多，若將含有 CAT -262T 對偶基因合成一組，雖然病例組 T 對偶基因較對照組多，但未達到顯著差異。GPx1 則未發現 Leu/Leu 基因 型的個案。 表十一為研究對象之氧化壓力基因型分組之勝算比，MnSOD 基因以 Val/Val 為參考族群，Val/Ala 得到冠心病的 OR 為 1.60，校正年齡、性別、 吸菸習慣、飲酒習慣、膽固醇濃度和 HDL 等危險因子之後更提高至 1.78， 皆達到顯著差異（p < 0.05）。Ala/Ala 有提升風險的趨勢但未達顯著性。 若將含有 Ala 對偶基因合成一組，OR = 1.69（95% CI = 1.07-2.65），校正 後為 1.81 倍，皆達統計標準（p≦0.03）。CAT 基因以 C/C 為參考族群， 無論是 C/T、T/T 或是將兩組合併，甚至是校正危險因子之後，都有提高 得病之風險，OR 介於 1.37-1.64，但未達統計上顯著意義。GPx1 基因以 Pro/Pro 為參考族群，Pro/Leu 基因型得到冠心病的勝算比，不論是否有經 過校正，皆無顯著的提升。
冠狀動脈阻塞程度與氧化壓力基因型之相關性分析如表十二所示， 以 MnSOD Val/Val 且沒有動脈阻塞者為參考族群，基因型為 Val/Ala + Ala/Ala 者，患有一條冠狀動脈阻塞 OR = 2.04（95% CI = 1.20-3.46），二 條阻塞為 1.64（95% CI = 0.92-2.91），三條阻塞為 1.39（95% CI = 0.80-2.44），校正年齡、性別、吸菸習慣、飲酒習慣、膽固醇濃度和 HDL 後，OR 值亦呈現下降趨勢（OR 分別為 2.34，2.15 和 1.67）。CAT 基因 以 C/C 為參考族群，基因型為 C/T + T/T 者，OR 值隨阻塞程度越趨嚴重 也越來越高，從阻塞一條的 1.43，阻塞二條的 1.54，到阻塞三條的 1.94， 但皆未達顯著。校正危險因子之後，亦呈現相同趨勢，仍未達顯著差異。 GPx1 基因以 Pro/Pro 為參考族群，Pro/Leu 基因型對於冠心病之動脈阻塞 程度，不論是否有經過校正，並無發現明顯的差異，OR 值介於 0.74 至 1.43 之間。 進一步以診斷年齡、性別來探討氧化壓力基因多形性與冠狀動脈心 臟病的相關性，如表十三、十四所示。在診斷年齡未滿 60 歲之個案中發 現，MnSOD 基因有 Ala 對偶基因者，相較於 Val/Val 者得到冠心病的 OR 為 1.84（95% CI = 0.84-4.03），而在大於 60 歲以上個案的 OR 為 2.16（95% CI = 0.95-4.89），年齡與 MnSOD 基因型間，並無交互作用。CAT 基因有 T 對偶基因者，相較於 C/C 基因型，在未滿 60 歲及大於 60 歲以上之個 案得病 OR 分別為 3.65（95% CI = 0.94-14.1）和 0.71（95% CI = 0.29-1.74）， 年齡與 CAT 基因型間並無交互作用，但有修飾的趨勢。GPx1 基因型變 異之風險，不受診斷年齡所影響。以性別分組探討氧化壓力基因多形性 與冠狀動脈心臟病的相關性，經年齡、抽菸習慣、喝酒習慣、膽固醇濃 度和 HDL 校正後發現，性別與這三個基因之間並無顯著交互作用（p 皆 大於 0.32）。
表十五為氧化壓力基因 MnSOD、CAT、GPx1 三者的組合對冠心病 之勝算比，發現三個基因之間並未有明顯的交互作用（p 值皆大於 0.56）。 在屬於 GPx1 野生基因型族群中，為 MnSOD 變異型者，罹患冠狀動脈心 臟病危險增加到 1.77 倍，具統計上顯著意義（95% CI = 1.09-2.87），經校 正之後更增加到 1.98 倍。在屬於 GPx1 變異基因型族群中，不論 MnSOD 基因形為何，危險性略為提高，OR 值介於 1.10-1.41 之間，但都未達顯 著差異。在 GPx1 基因與 CAT 基因分析方面，GPx1 為變異型且 CAT 為 變異形者有增加風險達 2 倍的趨勢，但未達顯著意義。CAT 基因與 MnSOD 基因的組合分析結果與 GPx1 相似，CAT 為 C/C 基因型，MnSOD 為 Val/Ala + Ala/Ala 者，其罹患冠狀動脈心臟病危險性顯著，校正的 OR 為 1.77（95% CI = 1.02-3.07）。 進一步將三基因之基因型進行組合如表十六所示，以 MnSOD、 CAT、GPx1 之酵素活性較高者（Val/Val、C/C、Pro/Pro）為參考族群， 三個基因中具有任一基因型有變異者，得到冠心病的風險為 1.52（95% CI = 1.04-2.22），校正後提高至 1.63（95% CI = 1.03-2.58），具有二個基因為 有變異型者，其 OR 值更增加至 1.9 倍左右（校正後 OR = 2.40，95% CI = 0.73-7.88）。可以發現致病之風險是隨著基因變異數目的增加而上升（p for trend = 0.017），研究中並未發現有研究對象同時具有三個變異型基因。 表十七、十八依照診斷年齡、性別分組，分析三基因之基因型組合 之差異。診斷年齡小於 60 歲，其中有一基因型發生變異者，得到冠心病 的 OR = 1.98（95% CI = 1.00-3.95），有二基因發生變異者得到冠心病的 OR 則提高為 4.18（95% CI = 0.70-25.1），每增加一個變異形基因，便顯 著地提高致病之風險（p for trend = 0.018）。診斷年齡大於 60 歲以上，基 因型變異增加也會增加罹患冠心病的風險，但未達統計上顯著差異（p for
trend = 0.26）。在男性族群中發現，有一基因型發生變異者，得到冠心病 的 OR 為 1.96（95% CI = 1.09-3.53），有二基因發生變異者得到冠心病的 OR 值則提高為 4.64（95% CI = 0.58-36.8），每增加一個變異形基因，便 顯著地提高致病之風險（p for trend = 0.008）。在女性族群亦有此趨勢， OR 值分別為 1.40 和 2.10，但未達顯著差異。 第三節 第三節 第三節 第三節 氧化壓力基因型和環境因子與冠狀動脈心臟病之相關性氧化壓力基因型和環境因子與冠狀動脈心臟病之相關性氧化壓力基因型和環境因子與冠狀動脈心臟病之相關性氧化壓力基因型和環境因子與冠狀動脈心臟病之相關性
表十九闡釋 MnSOD Val-9Ala、CAT C-262T 和 GPx1 Pro198Leu 基因 多形性及吸菸習慣之對冠心病風險共同影響。相較於 MnSOD 基因型為 Val/Val 且不曾吸菸者，個案 MnSOD 基因型為 Val/Val 且有吸菸習慣者， 罹患冠狀動脈心臟病的風險為 1.87 倍（p < 0.001），校正年齡、性別、飲 酒習慣和膽固醇濃度後為 2.92 倍（p < 0.001），個案基因型為 Val/Ala + Ala/Ala 且無吸菸習慣者，無論校正與否風險皆為 1.5 倍左右，未達顯著 意義。個案基因型為 Val/Ala + Ala/Ala 且有吸菸習慣者，具有 3.85 倍罹 病風險（95% CI = 1.82-8.16），經校正之後更提高為 8.41 倍。以 CAT C/C 基因型者且不曾吸菸為參考族群，C/C 基因型且有吸菸習慣者，得到冠心 病的 OR 為 2.98（95% CI = 1.82-4.88），C/T + T/T 基因型且無吸菸習慣者， OR 值有 1.5 倍，並未達統計上顯著差異，C/T + T/T 基因型且有吸菸習慣 者，罹病勝算比為 3.84（95% CI = 1.20-12.3）。GPx1 基因若為 Pro/Pro 且 有抽菸習慣者，風險為 2.99 達統計差異（p < 0.001），若為 Pro/Leu 且無 吸菸者風險並未增加，但 Pro/Leu 且有吸菸習慣者，風險即明顯增加到 5.81 倍（95% CI = 1.55-21.8）。但此三種氧化壓力基因與抽菸之交互作用，
表二十探討飲酒習慣及三種基因對冠狀動脈心臟病危險性之共同作 用。以 MnSOD 基因型為 Val/Val 且無飲酒習慣者為參考組，個案有 Ala 對偶基因且無飲酒者的風險最高，其罹患冠心病的 OR 為 3.47（95% CI = 1.59-7.58）。CAT 基因型與飲酒的交互作用與 MnSOD 基因型相似，CAT 基因型為變異的 T 對偶基因且有飲酒者風險最高，為 2.59（95% CI = 1.06-6.32）。不同的 GPx1 基因型與飲酒習性，對冠心病的風險差異不大， OR 介於 1.02 到 2.24 之間，且皆未達顯著水準。此三種氧化壓力基因與 飲酒之交互作用，並未達統計上顯著相關（p≧0.80）。 第四節 第四節 第四節 第四節 蛋白質羰基濃度與冠狀動脈心臟病之相關性蛋白質羰基濃度與冠狀動脈心臟病之相關性蛋白質羰基濃度與冠狀動脈心臟病之相關性蛋白質羰基濃度與冠狀動脈心臟病之相關性 研究對象共有 658 人具有血漿檢體（61%），病例組和對照組分別有 394 人和 264 人，比較有收集與未收集到血漿檢體之研究對象，兩者在性 別與年齡之間並無差異。表二十一為研究個案依人口基本變項分組之羰 基濃度分布情形。以全體個案來觀察，病例組之平均羰基濃度為 0.1287 （nmol carbonyls/mg protein），較對照組的 0.1236 高一些，但並未達統計 學上顯著差異（p = 0.11）。依照性別分組，羰基濃度不論在病例或對照組， 男女之間並未有顯著差異。依照年齡分組，病例組隨著年紀越大，各組 平均羰基濃度也越來越高（p for trend = 0.03），從小於 50 歲的 0.1163（nmol carbonyls/mg protein），到大於 70 歲的 0.1351，對照組雖有此趨勢，但並 未達顯著意義（p for trend = 0.17）。依照種族分組，各族群病例組之平均 羰基濃度皆高於對照組，其中客家族群病例組之平均羰基濃度則顯著高 於對照組（p = 0.02）。個性傾向消極、憂愁者，病例組之平均羰基濃度亦 顯 著 高 於 對 照 組 （ p = 0.03 ）（ 0.1512 vs. 0.1229 nmol carbonyls/mg
protein）。無論是病例或是對照組，無心血管疾病家族史的個案平均羰基 濃度，發現皆高於有家族史者，病例組中無家族史個案的羰基濃度，顯 著高於有家族史的個案（p = 0.03）。 在病例與對照組中發現，曾有吸菸者之平均羰基濃度皆高於從未吸 菸者（病例組，0.1296 vs. 0.1275；對照組，0.1248 vs. 0.1228 nmol carbonyls/mg protein）。在病例與對照組中亦發現，有飲酒習慣者之平均 羰基濃度皆低於從無喝酒習慣之個案，病例組中不曾喝酒者平均羰基濃 度為 0.1305（nmol carbonyls/mg protein），高於曾有喝酒者之 0.1223。對 照組中不曾喝酒者平均羰基濃度為 0.1241（nmol carbonyls/mg protei n）， 高於喝酒者之 0.1229。 依照對照組之蛋白質羰基濃度之三分位數分組，發現羰基濃度愈 高，其罹患冠狀動脈心臟病的危險性也愈高（趨勢檢定 p < 0.02）（表二 十二）。相對於第一分位，第二分位的危險勝算比為 1.47 倍（95% CI = 1.00-2.17），達顯著邊緣，第三分位的勝算比則為 1.58 倍（95% CI = 1.07-2.33）。校正危險因子後，第二和第三分位相較於第一分位的罹病風 險，變為 1.26 和 1.43 倍且未達顯著差異。 表二十三為觀察冠狀動脈阻塞程度對蛋白質羰基濃度的影響。有一 條、二條冠狀動脈阻塞超過 50%者，其羰基濃度皆較對照組略高，但無 統計上的顯著差異，而有三條動脈阻塞之病患，其平均羰基濃度較健康 族群之濃度高出 0.0091 nmol carbonyls/mg protein，且達到統計上顯著差 異（p = 0.038）。進一步將潛在干擾因子放入模型中，無論冠心病嚴重程 度為何，皆無統計上顯著差異。
羰基濃度依氧化壓力基因型分組如表二十四所示，由於一些研究個 案並未同時具有 DNA 和血漿檢體，導致最後進入此分析之病例組有 294 人，對照組有 141 人。在病例組中 MnSOD 基因型為 Val/Ala 或 Ala/Ala 者，其羰基濃度皆較 Val/Val 者高，多一個對偶基因變異，羰基濃度有愈 高之趨勢，CAT 基因為 T/T 基因型，羰基濃度亦較 C/C 基因型高，GPx1 基因為 Pro/Pro 基因型羰基濃度則是比 Pro/Leu 基因型高。在對照組中， 三種基因多形性之羰基濃度，皆有隨著對偶基因變異數增加，呈現有逐 漸降低之趨勢，但趨勢檢定皆未達統計上顯著差異。 表二十五表示不同基因型與羰基濃度高低組合時，是否會影響罹患 冠狀動脈心臟病之風險。MnSOD 若為 Val/Ala + Ala/Ala，無論羰基濃度 高低與否，皆呈現有風險增加之趨勢，OR 值介於 1.33-2.12 之間但未達 顯著差異，若 MnSOD 基因型為 Val/Val 的個案，即使羰基濃度較高罹病 風險也不會升高（OR = 0.85）。CAT 基因多形性與 MnSOD 情況類似，羰 基濃度高低不影響罹患冠心病之風險，對偶基因有一變異，OR 值介於 1.91-7.39 之間，若 CAT 為 C/C，且羰基濃度高於平均值，冠心病之風險 降低約 6%。分析 GPx1 基因型和羰基濃度高低組合發現，罹病風險最低 為個案具有 GPx1 Pro/Leu 基因型且羰基濃度高於平均值（OR = 0.43，95% CI = 0.11-1.74），但皆未達統計上顯著差異。基因型和羰基濃度間並未有 顯著交互作用（p 皆大於 0.10）。
第五章
第五章
第五章
第五章 討論
討論
討論
討論
本研究探討生活習慣和冠狀動脈心臟病的相關，結果顯示有吸菸經 驗、吸菸量高，皆是罹患冠心病重要之危險因子，而酒類之飲用則具有 保護作用，這些生活習慣，對冠心病的影響情形與之前其他研究結果一 致[27,28]。多數研究者皆認為，適當的飲酒習慣，對於預防冠狀動脈心 臟病的發生，有良好的保護效果。吸菸量愈多或吸菸時間愈長者，引起 冠心病的危險性或是因心血管疾病而死亡的機率也隨之升高[65]。 本研究中並未發現BMI值較高者會有較高的罹病風險，與一般所認 知的肥胖者較易引起心血管疾病的觀念並不一致[29]。BMI雖常用來當作 判定人們肥胖與否的指標，但並非與實際肥胖狀況相符，Tseng[66]在台 灣以第二型糖尿病患為研究對象發現，患有冠狀動脈心臟病之病患，其 腰臀比（waist/hip ratio，WHR）和BMI值兩種肥胖指標，與無冠心病之 病患並無顯著差異，而使用生物電子阻抗儀（Bioimpedance analysis，BIA） 所測得之體脂肪比率，即與冠狀動脈心臟病之風險有關，每增加1%的脂 肪，風險增加1.02倍。金山世代研究[20]亦推測，肥胖可能是動脈粥狀硬 化之中介因子，體重的控制仍是預防心血管疾病重要的課題。 血液分析包括有肌酐酸、尿酸、HDL、LDL、膽固醇、三酸甘油酯 及VLDL等生化指標。由單變項分析發現，HDL濃度若高，即有保護人們 罹患冠狀動脈心臟病的作用，其餘指標若高於正常範圍，皆有提高罹患 冠心病之風險，且都達統計學上顯著作用（p < 0.05）。若進入多變項邏輯 斯迴歸分析，LDL和三酸甘油脂對於冠心病的作用，則較其他指標顯著。三酸甘油脂、膽固醇和LDL來的重要[66,67]。Chien 等人研究指出，高LDL 之危害風險為1.25倍，HDL小於40 mmol/l則為2.09倍，皆達顯著意義[20]。 高血壓及糖尿病一直以來被認為是心血管疾病重要的危險因子， Zyriax[23]等人研究發現，將飲食和臨床因子放入多變項迴歸模型中發 現，高血壓和糖尿病對於女性冠心病風險的貢獻較其他因子強，勝算比 超過 3 倍且具顯著意義。在台灣許多研究也發現，高血壓及糖尿病與冠 狀動脈心臟病之相關性非常顯著[20,66-68]，本研究結果亦發現有相同趨 勢，患有糖尿病者罹患冠心病風險勝算比為 2.20（95% CI = 1.51-3.19）， 高血壓患者則增加 29%之風險（OR = 1.29，95% CI = 1.51-3.19）達統計 顯著邊緣。本研究之問卷是由個案自行填寫，其患有其他疾病之狀況， 除高血壓與糖尿病較為人所認識外，其他疾病之有無並未接受專業醫師 再確診，恐有錯誤分組之虞，因此其他疾病之狀態，本研究未納入討論 範圍。而高血壓與糖尿病若有錯誤分組之誤差，將導致相關性減小。 過去的研究顯示亞洲人之 MnSOD -9Ala 頻率約為 11-30%，歐洲人則 為 41-62%[43-45]，而本研究中對照組為 7.14%，較其他研究稍低；另外 CAT -262T 本篇研究為 3.01%，與中國人族群頻率 4-5%比較[69-71]，略 低了一些，然而 Ahsan [51]等人在孟加拉所測的-262T 頻率則高達 16.9%， 白種人約為 17.5-20%[45,72,73]。GPx1 Leu 的對偶基因頻率在亞洲人是不 高的，在日本只有 5%，白人卻高達 31-36%[45,74]，而本研究則有 4.48%， 與日本族群差異不大。種種研究結果顯示，此三種氧化壓力基因多形性 之頻率，在種族之間有很大的差異。 MnSOD 至少有一對偶基因帶有 Ala 者，其罹患冠狀動脈心臟病之風 險，顯著高於帶有 Val/Val 基因型者；CAT 為 C/T + T/T 者，比起帶有 C/C 者之危險性亦有較高之趨勢；而 GPx1 為 Pro/Leu 者，則對於冠心病的影
響較無趨勢性。此三種抗氧化基因型與心血管疾病之研究，目前全球少 有研究發表。Hsueh [69]等人在台灣的研究發現，MnSOD 基因帶有 Ala 對偶基因者，有 2 倍的風險（95%CI = 1.0-3.9）會罹患高血壓，而 CAT 多形性之間則無差異。但在中國也有研究指出，在收縮壓超過 160 mmHg 的高血壓病患，CAT T 對偶基因的血壓，比起野生型更高[49]。在日本， 針對第二型糖尿病人進行分析 GPx1 四個多形性位置（-602A/G，+2C/T， Ala5/Ala6 和 Pro198Leu ）， 這 四 個 位 置 有 強 烈 的 連 鎖 不 平 衡 ； 針 對 Pro198Leu 分析發現，比起 Pro/Pro 的人，頸動脈厚度、心血管疾病和周 邊血管疾病，Pro/Leu 的人有較顯著的盛行[56]。Winter 等人[75]在英國的 研究發現，帶有 Ala6 對偶基因者，得到冠狀動脈心臟病的 OR = 2.07 （ 95%CI = 1.08-3.99 ）。 Valenti 等 人 針 對 遺 傳 性 血 色 素 沉 著 （haemochromatosis）病人的研究發現，MnSOD Val/Val 基因型有 10.1 倍 的危險性得到心肌病[76]。 在不同疾病之間，基因型的影響有所不同。以MnSOD基因來看，在 急性骨髓性白血病（acute myeloid leukemia）[77]、糖尿病[46]、乳癌， 尤其是停經後婦女[47]，Ala/Ala風險顯著較高；在關節炎、雪氏貝症[12]、 女性的動脈中層內膜厚度[78]則是Val/Val風險顯著較高。CAT基因而言， 不吸菸且為氣喘者[71]、第一型糖尿病病患[79]帶有T對偶基因，具有顯 著的保護作用；而高血壓[49]、砷引起的皮膚角化過度[51]，與帶有T對 偶基因顯著相關。GPx1基因來看，帶有Leu對偶基因，會增加罹患乳癌的 風險[80]，而Leu與降低的膀胱癌風險有關[74]。本研究結果與這些研究 結果，並非完全一致，也顯示出不同種族之間，基因型對於冠心病的影 響，即有很大的不同，而每個研究之樣本數不是很大，想要推論到一般 大眾的狀態，有其困難度。所以需要進一步擴大個案數，以了解真正具
