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國立成功大學�邁向頂尖大學計畫
ˇ ˇ 延攬優秀人才工作報告表
NCKU’s “Aim for the Top University Project”
Work Report Form for Distinguished Scholars
﹍續聘 continuation of employment
離職resignation100 年 7 月 13 日更新
受聘者姓名 Name of the Employee
江倪全����������������������������������
男 女 Male Female
聘 期 Period of Employment
from 101 年(y) 04 月(m) 01 日(d) to 101 年(y) 07 月(m) 31 日(d) 研究或教學或科技研發與
管理計畫名稱 The project title of research,
teaching, technology development and management
邁向頂尖大學計畫 計畫主持人
�申請單位主管
Project Investigator (Head of Department/Center)
吳俊忠 教授
補助延聘編號
Grant Number D101-22005
一︾ 研究︾教學︾科技研發與管理工作全����������������������������������程經過概述〈�由受聘人填寫
Please summarize the entire research, teaching, or science and technology R&D and management work process (To be completed by the employee)
參 與 課 程 ：
1. Infection and Immunity- Special lecture on bacteria (2011/12/22)
2. 醫學生物技術概論- 生物科技在監控流行性感染症的應用 (2011/11/30) (2012/04/10) 3. 醫技導論 PBL 課程 (2011/10/31, 11/7, 11/14, 11/28, 12/5)
4. Advanced Biotechnology and Future Perspectives- Microbes in current biotechnology (2011/04/19) (2012/04/10)
5. Infectious disease journal club- Molecular evolution of Streptococcus pyogenes (2011/03/11) 6. Infectious disease journal club- Stress signals and group A streptococci pathogenesis (2012/03/09) 發 表 文 獻 ：
1. Hung, C. H., Tsao, N., Zeng, Y. F., Lu, S. L., Chiang-Ni, C., Lin, Y. S., Wu, J. J. & Kuo, C. F.
(2012). Synergistic effects of streptolysin S and streptococcal pyrogenic exotoxin B on the mouse model of group A streptococcal infection. Med Microbiol Immunol. (Ahead of print).
2. Chiang-Ni, C., Zheng, P. X., Tsai, P. J., Chuang, W. J., Lin, Y. S., Liu, C. C. & Wu, J. J. (2012).
Environmental pH changes, but not the LuxS signalling pathway, regulate SpeB expression in M1 group A streptococci. J Med Microbiol 61, 16-22.
3. Wu, A. B., Wang, M. C., Tseng, C. C., Lin, W. H., Teng, C. H., Huang, A. H., Hung, K. H., Chiang-Ni, C. & Wu, J. J. (2011). Clinical and microbiological characteristics of community-acquired Staphylococcus lugdunensis infections in southern Taiwan. J Clin Microbiol 49, 3015-3018.
4. Su, Y. F., Chuang, W. J., Wang, S. M., Chen, W. Y., Chiang-Ni, C., Lin, Y. S., Wu, J. J. & Liu, C. C.
(2011). The deficient cleavage of M protein-bound IgG by IdeS: Insight into the escape of Streptococcus pyogenes from antibody-mediated immunity. Mol Immunol 49, 134-142.
5. Chiang-Ni, C., Wu, A. B., Liu, C. C., Chen, K. T., Lin, Y. S., Chuang, W. J., Fang, H. Y. & Wu, J. J.
(2011). Emergence of uncommon emm types of Streptococcus pyogenes among adult patients in southern Taiwan. J Microbiol Immunol Infect 44, 424-429.
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研究工作內容概述「
A 群鏈球菌為重要之人類����������������������������������致病菌︽能引起咽喉炎︽膿疱疹︽壞死性肌膜炎︽及毒性休克症候 群等疾病〈A 群鏈球菌所引發之侵襲性疾病雖然較為少見︽但其致死率高達 20% (壞死性肌膜炎) 至 40% (毒性休克症候群)︽且到目前為止並沒有預防或早期診斷的方法〈由於細菌感染進入人體 後︽與宿主免疫系統的互動或抵禦宿主內環境壓力之能力為其是否造成疾病之主因︽因此研究 A 群鏈球菌如何抵禦環境壓力為重要的課題〈
實驗室在過去發現︽PerR 調控因子對 A 群鏈球菌之 DNase Sda1 於氧化壓力下之表現有其 重要性〈perR 突變株無法在氧化壓力培養條件下表現 sda1︽且相較於野生株︽perR 突變株較 不易於人類����������������������������������全����������������������������������血中生存〈由於 DNase Sda1 已知為 A 群鏈球菌逃脫白血球釋放之 neutrophil extracellular trap (NET) 的重要蛋白質︽因此我們推測 PerR 突變株較不易於人類����������������������������������全����������������������������������血中生存︽可 能是由於此突變株無法表現 DNase Sda1 以逃脫 NET 所造成〈利用 Sytox orange 染色法標定 NET 的生成︽結果發現無論是野生株或是 perR 突變株感染之多核型白血球均不易生成 NET 結構〈主要原因為野生株及 perR 突變株均會造成白血球快速死亡︽若降低細菌感染量︽則會發 現 perR 突變株較易被清除︽因此︽在野生株及 perR 突變株抵禦白血球清除能力明顯不同的情 況下︽無法判斷是否在 perR 突變株之 Sda1 表現較少且具有較弱之 DNase 活性〈
為釐清 perR 基因突變是否直接影響 Sda1 蛋白質之表現量︽利用重組部分片段之 Sda1 蛋 白質生產多株抗體︽以使用於偵測 A 群鏈球菌 Sda1 蛋白質的表現〈未使用 Sda1 全����������������������������������長重組蛋 白質的原因為 Sda1 對表現重組蛋白質的大腸桿菌具有毒性〈在取得多株抗體之後︽我們利用抗 體進行三個不同的分析︽以分析多株抗體是否具有偵測 Sda1 蛋白質表現的能力〈首先︽因文獻 報告抗 DNase 之抗體往往具有抑制 DNase 活性之能力︽因此︽我們將野生株︾perR 突變株︾
以及 perR 互補株細菌之培養液加入不同稀釋倍數之多株抗體︽於 37ºC 培養 15 分鐘後︽再加 入 DNA 以分析細菌培養液之 DNase 活性〈然而︽結果顯示︽加入多株抗體於細菌培養液並無 顯著抑制其 DNase 活性之趨勢〈其次︽我們將細菌培養液中之蛋白質固定於 ELISA plate 上︽
並以 ELISA 的方法︽以多株抗體為一級抗體︽並以抗小鼠 IgG 之抗體為二級抗體︽在雜交反 應過後進行呈色反應以分析抗 Sda1 多株抗體是否能偵測到細菌培養液中之 Sda1 蛋白質︽結果 顯示︽無論是使用野生株︾perR 突變株︾或是互補株之培養液︽其呈色後之吸光值均與背景值 相近︽因此︽以 ELISA 方法進行分析︽亦說明此多株抗體無法偵測分泌至培養液中之 Sda1 蛋 白質〈為進一步確認此多株抗體無法辨識 A 群鏈球菌分泌之 Sda1 蛋白質︽或是 A 群鏈球菌 分泌之 Sda1 蛋白質的量太低︽導致抗體無法偵測︽我們將菌體中之蛋白質箤取出來︽以及將細 菌培養液濃縮 100 倍後︽以西方墨點法分析檢體中之 Sda1 蛋白質〈在以多株抗體為一級抗體 (1:2000) 及並以抗小鼠 IgG 之抗體為二級抗體 (1:5000) 的雜交條件下︽抗 Sda1 多株抗體僅能 偵測由大腸桿菌表現之重組 Sda1 蛋白質︽但無法偵測到由 A 群鏈球菌所表現之 Sda1 蛋白 質〈這些結果顯示︽無論是比較野生株及 perR 突變株清除 NET 結構之能力︽或是利用多株抗 體偵測細菌表現之 Sda1 蛋白質︽均無法達成定量野生株及 perR 突變株分泌 Sda1 蛋白質的目 的〈
由 RNA 分析結果推測 PerR 於氧化壓力下啟動 sda1 表現可能與 A 群鏈球菌抵禦免疫細 胞清除有關︽由於在蛋白質層面無法證實 PerR 與 Sda1 表現是否有直接的相關性︽因此進一步 的分析 PerR 調控 Sda1 是否與 A 群鏈球菌抵禦免疫細胞清除有關則有其必要性〈利用同源基 因重組的方式︽我們將 perR 突變株中之 sda1 基因進行突變︽得到 perR 及 sda1 雙基因突變 株︽並利用由人類����������������������������������全����������������������������������血中分離之多核型白血球進行 in vivo 感染實驗︽比較 perR 突變株與 perR 及 sda1 雙基因突變株抵禦多核型白血球清除之能力〈實驗結果顯示︽與野生株的存活率相較︽
perR 突變株在與人類����������������������������������多核型白血球共同培養的條件下︽其存活率約只有野生株一半左右 (0.57±0.021)︽符合文獻以及先前實驗室的實驗結果〈當比較 perR 突變株與 perR 及 sda1 雙突 變株時︽發現 perR 及 sda1 雙突變株抵禦多核型白血球之能力也約只有 perR 突變株的一半左 右 (0.54±0.075)〈此結果說明︽雖然 perR 突變株失去於氧化壓力下活化 sda1 表現之能力︽但 其所表現的 sda1 對 perR 突變株抵禦多核型白血球清除仍有其重要性〈然而︽此結果並不能證
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實 PerR 於氧化壓力下活化 sda1 表現是否對其抵禦多核型白血球具有重要角色〈
實驗結果顯示 PerR 為 A 群鏈球菌於氧化壓力下表現 Sda1 必要之調控因子︽利用生物資 訊以及 EMSA (Electrophoresis mobility shift assay) 分析顯示︽sda1 基因之啟動子中具有 PerR 結合序列 (PerR box)︽且重組之 PerR 蛋白質具有結合至 PerR box 之能力〈為進一步確認 PerR 是否在氧化壓力的培養條件下透過結合至 sda1 啟動子區域並調控其表現︽我們將 sda1 啟動子 以 PCR 方式選殖後︽以轉錄融合的方式與報導基因 cat 接合︽預計送入野生株及 perR 突變株 以分析 sda1 啟動子的活性〈另一方面︽將以 PCR-directed site specific mutagenesis 的方法︽將 sda1 啟 動 子 中 之 PerR box 序 列 進 行 改 變 ( 由 TTANAATNATTNTAA 改 變 為 TTCATTATTACTAGT)︽並利用相同的方法與報導基因 cat 接合︽於一般培養環境及 0.5 mM 過 氧化氫培養環境培養︽量測 sda1 啟動子活性︽以確認 PerR 是否藉由 sda1 啟動子中之 PerR box 調控 sda1 的表現〈目前已取得帶有 PerR box 及 PerR box 序列經過修飾的報導質體︽在 未來可直接以電轉型的方式送入 A 群鏈球菌野生株及 perR 突變株中︽以分析 PerR 是否直接 辨識 sda1 啟動子中之 PerR box 以調控 sda1 基因之表現〈
perR 突變株在 in vitro 培養環境下對氧化壓力之抗性較野生株強，但在小鼠感染模式則顯 示，相較於野生株，perR 突變株較不易造成小鼠感染，因此，除了抗氧化壓力的能力之外，perR 突變株可能喪失其它未知的能力，使其在動物感染模式之毒力明顯下降。由於 Sda1 為 A 群鏈 球菌抵禦白血球清除的重要毒性因子之一，無法有效表現 Sda1 可能造成 A 群鏈球菌較易被白 血球清除並在動物感染模式毒力下降。雖然以目前所得到的實驗結果無法直接證實 PerR 於氧化 壓力培養條件下活化 sda1 與 A 群鏈球菌抵禦多核型白血球清除相關︽但由於目前已知 PerR 主要調控標的基因之成式為抑制其之表現︽而我們卻證實 PerR 於氧化壓力下具有活化 sda1 基 因表現之能力︽後續分析 PerR 調控 sda1 基因表現之機制可能會引導我們進一步了解 PerR 調 控其標的基因之調控機制〈
二︾研究或教學或科技研發與管理成效評估�由計畫主持人或單位主管填寫
Please evaluate the performance of research, teaching or science and technology R&D and management Work: (To be completed by Project Investigator or Head of Department/Center)
(1)是否達到延攬預期目標」
Has the expected goal of recruitment been achieved?
已達到延攬預期目標
(2)研究或教學或科技研發與管理的方法︾專業知識及進度如何」
What are the methods, professional knowledge, and progress of the research, teaching, or R&D and management work?
執行的研究包含基礎細菌學研究及臨床微生物研究︽並已有數篇研究文章已完成撰寫並進行發表〈此外︽由於受聘人具有細 菌遺傳學及分子生物學之知識及多年的實際操作經驗︽因此︽不但能有效管理自身研究進度︽並提供其專業知識與其它研究團隊 分享︾討論〈
(3)受延攬人之研究或教學或科技研發與管理成果對該計畫((或貴單位))助益如何」
How have the research, teaching, or R&D and management results of the employed person given benefit to the project (or your unit)?
醫技系為臨床醫學相關之系所︽因此︽由具有基礎研究背景之博士後研究員參與臨床微生物研究︽並發表研究報告︽有助於 提升基礎與臨床研究的結合程度〈
(4)受延攬人於補助期間對貴單位或國內相關學術科技領域助益如何」
How has the employed person, during his or her term of employment, benefited your unit or the relevant domestic academic field?
除了發表研究文獻外︽另參與針對醫技系大學或專科學生之教科書撰寫及針對有興趣參與實驗室研究之大學生進行基礎研究 訓練︽對學術領域及基礎教育均有助益〈
(5)具體工作績效或研究或教學或科技研發與管理成果「
Please describe the specific work performance, or the results of research, teaching, or R&D and management work:
發表之研究文獻 (2011 年) 詳列於著作目錄︽教科專書亦已完稿付印〈受聘人積極參加學術研討會︽連續二年 (99 年及 100 年) 於台灣微生物學舉辦之研討會︽獲得臨床微生物組口頭報告第一名︽並於 101 年榮獲養樂多特優論文獎 (微免與感染雜 誌)〈
(6)是否續聘受聘人?? Will you continue hiring the employed person? ﹍續聘Yes ﹎不續聘No
□ 此報告表篇幅以三ˇ四頁為原則〈This report form should be limited to 3-4 pages in principle.
□ 此表格可上延攬優秀人才成果報告繳交說明網頁下載〈
This report form can be downloaded in http://scholar.lib.ncku.edu.tw/explain/
