第四章 討論
4.9 與生長因子作用的關係
文獻指出內皮細胞生長補充劑(Endothelial cell growth supplement)可 以觸進人類臍帶靜脈內皮細胞進行有絲分裂以及增加細胞生長(Wang et al.,2001)。分別以 PBS(100 μl/ml)、內皮細胞生長補充劑(Endothelial Cell Growth supplement；ECGs；75 μg、150 μg、300 μg)處理紅體細胞 12 小 時，再以RT-PCR 分析其 PTEN 和 EDF-1 表現量。結果顯示在劑量為 50 μl/ml 的 ECGs 作用下，明顯抑制 PTEN long(圖 20A)和 PTEN short(圖 20B) 表現量，但是分別以PBS(50 μl/ml)、ECGs(150 μg)處理紅體細胞 12 小時，
結果顯示對於PTEN long(圖 21B、D、I)和 PTEN short(圖 21F、H、J) 免 疫反應的強度沒有明顯差異。我們推測ECGs 劑量為 150 μg 的作用下會 抑制 PTEN mRNA 表現量，進而增加細胞生長。而在劑量為 150 μg 的 ECGs 作用下，明顯刺激 EDF-1 表現量(圖 20C)，我們推測當 ECGs 刺激 內皮細胞生長，而當內皮細胞進行生長和分化時，會刺激EDF-1 活化，
進而減少內皮細胞分化。
文獻指出在隱靜脈(Saphenous vein,SV)和內乳動脈(Internal
mammaryartery,IMA)平滑肌細胞(Smooth muscle cells)大量表現PTEN會 抑制Akt/PKB訊號路徑活化，而且Akt/PKB會向上調控，使得IGF-1 接受 器減少。當PTEN過度表現會抑制IGF-1 誘導隱靜脈和內乳動脈平滑肌細 胞增殖，當抑制PTEN時，會減少其負調控PI3K/Akt訊號路徑，進而使 IGF-1 刺激更多細胞增殖反應(Mitra et al ., 2009)。在IGF-1 作用下，對於 PTEN long和PTEN short沒有太大相關性，但有抑制其PTEN long(圖 22A、B)和PTEN short(圖 22C、D)表現量之趨勢，但是劑量為 10-7，卻 會增加PTEN short表現量之趨勢。而在IGF-1 劑量為 10-9 M、10-8 M會抑
制PTEN long免疫反應的強度(圖 23B、F、J、Q)，但是劑量為 10-7 M，
卻會增加PTEN long免疫反應的強度(圖 23B、N、Q)。在IGF-1 作用下，
對於PTEN short(圖 23D、H、L、P、R) 免疫反應的強度沒有明顯差異。
我們推測當IGF-1 處理紅體細胞，會抑制PTEN表現，這與在哺乳類動物 中，IGF-1 調控PTEN作用一致，但是對於PTEN long的抑制效果較為顯 著，而對於PTEN short是乎會受其抑制但沒有太大差異性。而結果顯示 會抑制其EDF-1 的表現量之趨勢 (圖 22E、F)。我們推測IGF-1 活化細胞 增生的訊號路徑，會抑制EDF-1 mRNA表現量。
相關文獻指出Insulin會誘導PTEN 表現，而且insulin會減少IGF-1 誘 導AKT磷酸化和細胞增生，但是不會影響ERK1/2 磷酸化(Iwase A et al.,2009)。另外，並未有相關報告進一步探討bFGF與PTEN和EDF-1 的相 關性。分別以PBS(10 μl/ml)、Insulin (10-9 M、10-8 M、10-7 M)處理紅體細 胞24 小時，結果顯示在Insulin作用下，會增加PTEN long、PTEN short 表現量(圖 24A、B)。而對於PTEN long和PTEN short免疫反應的強度，沒 有太大差異(圖 25B、F、J、；D、H、L、N)。我們推測在胰島素作用於 鰻魚紅體細胞中，與在哺乳類動物中，胰島素調控PTEN作用不一致，其 會會促進PTEN mRNA表現量增加，但是不會影響PTEN螢光表現。而對 於EDF-1 表現量沒有差異(圖 25C)，我們推測胰島素作用與EDF-1 表現無 相關性。
文獻指出鹼性纖維母細胞生長因子(Basic fibroblast growth factor；
bFGF)會增加FGF receptor (FGFR)1 和FGFR2 mRNA表現量和增加磷酸化 細胞外訊號調節激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase；
pERK1/pERK2)，但不會使得磷酸化p38MAPK或磷酸化PI3K訊號途徑 (Luo et al.,2008)。分別以PBS(10 μl/ml)、bFGF (10-10 M、10-9 M、10-8 M) 處理紅體細胞24 小時，結果顯示在bFGF作用下，PTEN long表現量有隨 著劑量增加而使其表現量增加的趨勢(圖 26A)；會抑制PTEN short表現 量，但隨著增加bFGF劑量會使PTEN short表現量增加(圖 26B)。會抑制 PTEN long免疫反應強度的趨勢(圖 27B、F、J、N、Q)，但對於PTEN short 的免疫反應強度，沒有太大差異。而在bFGF作用下，會抑制EDF-1 表現 量，但隨著增加bFGF劑量會使EDF-1 表現量增加(圖 26C)。我們觀察到 在bFGF劑量為 10-8 M/ml時，PTEN和EDF-1 表現量會受其抑制，但是乎 隨著bFGF劑量增加會因而增加PTEN和EDF-1 表現量，這還需要進一步 實驗以及探討。