雌鰻以外源激素進行催熟過程中與 PTEN 和 EDF-1 的關係

以鯰魚腦下垂體催熟過程中，會增加其紅體(RMI 値)組織發育 (圖

9A、B)。且 PTEN long(圖 9C、D、E、F)、PTEN short(圖 9G、H、I、J) 和 EDF-1(圖 9K、L、M、N)表現量都有增加的趨勢。與不同體重大小的 養殖日本鰻其紅體的 PTEN 和 EDF-1 基因表現量的趨勢相同。隨之，紅 體組織進行IHC 染色，觀察紅體組織之微血管管壁，發現 PTEN long 與 PTEN short 的免疫染色情形與其紅體的 PTEN 基因表現量呈正相關。鯰 魚腦下垂體促進紅體組織發育，而 PTEN 和 EDF-1 基因表現量以及 PTEN 之IHC 染色，隨著紅體(RMI 値)組織發育，增加其表現。反之，以鯰魚 腦下垂體催熟過程中，會增加其卵巢(GSI 値)發育(圖 10A、B)。而 PTEN long 基因表現量與卵巢組織(GSI 値)發育成負相關，但是 PTEN short 基 因表現量與卵巢組織(GSI 値)發育的正負相關性較不一致。而 EDF-1 基 因表現量與卵巢組織(GSI 値)發育成負相關。隨之，卵巢(GSI 値)組織進 行IHC 染色，而依據(山本等,1974)所述之日本鰻卵細胞分期，共分為十 期，第一期為卵原細胞期(0ogonia stage)，卵徑約 10~20 μm 左右；第二期 為染色絲核仁期(Chromatin nucleolar stage)，卵徑約 55 μm 左右；第三期 為周邊核仁期(Perinucleolar stage)，卵徑約 99 μm 左右，細胞核周圍有許 多核仁顆粒；第四期為油滴期(Oildroplet stage)，卵徑約 120~150 μm 左 右，油滴由細胞質邊緣開始堆積，漸漸往細胞核周邊堆積，最後充滿整 個細胞質；第五期為第一卵黃球期(Primary yolk globule stage)，卵徑約 200~230 μm 左右，卵黃球開始在細胞質邊緣堆積；第六期為第二卵黃球 期(Secondary yolk globule stage)，卵徑約 450 μm 左右，卵黃球繼續堆積；

第七期為第三卵黃球期(Tertiary yolk globule stage)，卵徑約 600 μm 左右，

卵黃球堆積充滿整個細胞質；第八期為核移動期(Migratory nucleus

stage)，卵徑約 750-850 μm 左右，細胞核往邊緣移動，準備進行減數分裂；

第九期為最後成熟期(Final maturation stage)，卵徑約 900-1070 μm 左右，

細胞核消失進行減數分裂；第十期為排卵期(ovulating stage)，成熟透明的 卵細胞由濾泡中排出。結果顯示，其PTEN 會在卵巢的濾泡層被觀察到 免疫反應染色情形，而我們發現 PTEN mRNA 表現量與 PTEN 之 IHC 染 色呈負相關。我們推測在催熟過程中，卵巢(GSI 値)組織持續發育時，

PTEN 的表現下降，但是當卵巢(GSI 値)組織發育近乎成熟時，PTEN 則 又會啟動其功能，進而調節正常的發育情形。PTEN long 和 PTEN short 基因表現量與免疫染色反應強度呈負相關，推測在卵巢，PTEN 的轉錄和 轉譯是分開。。

文獻指出注射外源性的鮭魚腦下垂體研磨液可促進卵巢從卵原細胞 至成熟卵細胞一連串卵黃蓄積過程，甚至達吸水卵階段，顯示在催熟過 程中注射外源性的鮭魚腦下垂體研磨液是必要的。但單獨使用鮭魚腦下 垂體研磨液處理組卵胞卵徑頻度分佈廣，呈現雙峰且非同步化現象，單 獨施打甲基睪固酮(17α-methyltestosterone ,17MT)或雌二醇

(Estradiol-17β,E2)處理組則對卵黃蓄積效果不大。外源性性類固醇，尤其 為甲基睪固酮併用鮭魚腦下垂體研磨液確實可促進日本鰻的卵巢發育至 卵黃蓄積甚至達吸水卵之階段，卵徑頻度呈單峰之同步化現象(王, 1999)。我們以鯰魚腦下垂體+睪固酮之混合液進行催熟，發現以含有睪 固酮之混合液與未含睪固酮之混合液催熟，紅體(RMI 値)發育沒有太大 差異，但是 PTEN 和 EDF-1mRNA 表現量卻明顯受到抑制，但是 PTEN 之IHC 染色卻與 PTEN mRNA 表現量呈負相關。在催熟過程中，添加睪

固酮之混合液比未添加的使卵巢(GSI 値)發育更為明顯，而 PTEN 和 EDF-1mRNA 表現量卻明顯受到抑制，而卵巢組織進行 IHC 染色，其 PTEN 會在卵巢的濾泡層被觀察到染色情形，也與 PTEN mRNA 表現量 呈正相關。

以兩種方式催熟(添加和無添加睪固酮)過程中推測，當紅體(RMI 値) 組織發育，其 PTEN mRNA 表現量和蛋白質都會增加，但是添加睪固酮 促使紅體(RMI 値)組織發育，卻會抑制 PTEN mRNA 表現量；而當卵巢 (GSI 値)發育，PTEN long 基因表現量與卵巢組織(GSI 値)發育成負相關，

但是 PTEN short 基因表現量與卵巢組織(GSI 値)發育的相關性較不一 致。而PTEN 蛋白質會受到抑制。這似乎也代表著 PTEN 在不同的組織 中作用的方式會有所不同。另外，在只以鯰魚腦下垂體催熟過程中，刺 激紅體(RMI 値)發育，也同時刺激 EDF-1mRNA 表現量增加，但是以鯰 魚腦下垂體+睪固酮之混合液進行催熟，卻抑制 EDF-1mRNA 表現量，而 紅體(RMI 値)發育卻沒有持續增加；但在以兩種方式催熟過程中，發現 卵巢(GSI 値)發育中，EDF-1mRNA 表現量會受到抑制。所以，我們推測 在發育的情況下，會抑制 EDF-1mRNA 表現量，而不發育的情況下，則 會增加 EDF-1mRNA 表現量。催熟過程中，發現以有添加睪固酮之混合 液進行催熟，會抑制 EDF-1mRNA 表現量。