切片染色

2.8.1 日本鰻性腺和紅體組織石蠟組織切片染色之蘇木精伊紅染

色

xylene(無水)浸泡 10 分鐘，xylene(含水)浸泡 10 分鐘，100％酒精(無水) 浸泡5 分鐘，100％酒精(含水)浸泡 1 分鐘，95％酒精浸泡 25 秒，90％酒 精浸泡25 秒，80％酒精 浸泡 25 秒，70％酒精浸泡 25 秒後，50％酒精 浸泡25 秒後，以二次水清洗 5 分鐘，蘇木精(Hematoxylin) 浸泡 20 分鐘，

水洗蘇木精，scott solution(固定液)3 分鐘，水洗 scott solution，50％酒精 浸泡1~2 分鐘，70％酒精浸泡 2~3 分鐘，伊紅(Eosin Y；使用前加 2~3 滴 醋酸) 浸泡 5 分鐘，80％酒精浸泡 1 分鐘，90％酒精浸泡 1 分鐘，95％

酒精浸泡1 分鐘，100％酒精(含水)浸泡 2~3 分鐘，100％酒精(無水)浸泡 2~3 分鐘，xylene(含水)浸泡 3~5 分鐘，浸泡於 xylene(無水)，封片。

2.8.2 日本鰻性腺和紅體組織石蠟組織切片染色之免疫組織化學

染色

方法一:

以 65℃烘箱中烤片， 5 分鐘，Coating Slide在室溫中冷卻後，進行 脫臘步驟， xylene浸泡 10 分鐘，進行兩次，100％ 酒精浸泡 2 分鐘，進 行兩次，90％酒精浸泡 2 分鐘，80％酒精 浸泡 2 分鐘，70％酒精浸泡 2 分鐘後，以水清洗5 分鐘，置於磷酸鹽緩衝溶液中，滴 3％

H₂O₂(deperoxidase)於組織上，靜置 5 分鐘，以磷酸鹽緩衝溶液浸泡清洗 2 分鐘，3 次，(利用此時間預熱Citrate buffer，功率 100％，3 分鐘「要注 意是否有乾掉的情形，加水補回原容量」，將Coating Slide浸泡於Citrate buffer，功率 70％，7 分鐘，兩次，在隔冰水回溫 10~15 分鐘後，以磷酸 鹽緩衝溶液浸泡清洗2 分鐘，3 次，置於潮濕盒中以一級抗體 ，以磷酸 鹽緩衝溶液進行1：1000 稀釋】 於室溫中反應(PTEN long反應 20 分鐘；

PTEN short反應 40 分鐘)，以磷酸鹽緩衝溶液浸泡清洗 2 分鐘，3 次，於 潮濕盒中以HRP Label於室溫中反應 20 分鐘，以磷酸鹽緩衝溶液浸泡清 洗2 分鐘，3 次，再滴DAB於組織上呈色反應 3 分鐘 【DAB chromogen 1 滴 / DAB buffer 1c.c.（配置於避光的微量離心管中）】，以流動水清洗 Coating Slide上的組織 5 分鐘後，組織依序以 70％酒精、80％酒精、90

％酒精、100％酒精分別 10 ~ 20 秒進行脫水，再置於 70℃烘箱中烘乾，

約10 分鐘後，在室溫中冷卻，泡於xylene中(乾淨的xylene)，進行封片。

利用正立顯微鏡觀察染色情形(若具PTEN的胞器則呈褐色)，以Viewfinder Lite系統照相。

方法二:

以 65℃烘箱中烤片， 5 分鐘，Coating Slide在室溫中冷卻後，進行 脫臘步驟， xylene浸泡 10 分鐘，進行兩次，100％ 酒精浸泡 2 分鐘，進 行兩次，90％酒精浸泡 2 分鐘，80％酒精 浸泡 2 分鐘，70％酒精浸泡 2 分鐘後，以水清洗5 分鐘，置於磷酸鹽緩衝溶液中，滴 3％

H₂O₂(deperoxidase)於組織上，靜置 5 分鐘，以磷酸鹽緩衝溶液浸泡清洗 2 分鐘，3 次，滴Immuno DNA Digester於組織上作用 10 分鐘，以磷酸鹽緩 衝溶液浸泡清洗2 分鐘，3 次，置於潮濕盒中以一級抗體 【以磷酸鹽緩 衝溶液進行1：1000 稀釋】 於室溫中反應(PTEN long反應 20 分鐘；PTEN short反應 40 分鐘)，以磷酸鹽緩衝溶液浸泡清洗 2 分鐘，3 次，於潮濕盒 中以HRP Label於室溫中反應 20 分鐘，以磷酸鹽緩衝溶液浸泡清洗 2 分 鐘，3 次，再滴DAB於組織上呈色反應 3 分鐘【DAB chromogen 1 滴 / DAB buffer 1c.c.（配置於避光的微量離心管中）】，以流動水清洗Coating

Slide上的組織 5 分鐘後，組織依序以 70％酒精、80％酒精、90％酒精、

100％酒精分別 10 ~ 20 秒進行脫水，再置於 70℃烘箱中烘乾，約 10 分鐘 後，在室溫中冷卻，泡於xylene中(乾淨的xylene)，進行封片。利用正立 顯微鏡觀察染色情形(若具PTEN的胞器則呈褐色)，以Viewfinder Lite系統 照相。