補充八週綠茶萃取物對人體肌肉肝醣之影響

全文

(1)國立臺中教育大學教育學院體育學系碩士論文. 指導教授:程一雄博士協同指導:呂香珠博士. 補充八週綠茶萃取物對人體肌肉肝醣之影響. 研究生:陳顥文撰中華民國一百零三年六月.

(2) 補充八週綠茶萃取物對人體肌肉肝醣之影響摘要綠茶萃取物(Green tea extract, GTE)會提高脂肪酸氧化和減少體內的脂肪。而補充綠茶萃取物可增加脂肪酸作為能量，節省葡萄糖氧化，如此可能有利於運動後肌肉肝醣合成。故本研究探討持續補充八週綠茶萃取物對運動後人體肌肉肝醣合成效果之影響。8 名健康自願受試者(年齡平均 21.9±0.77 歲)接受八週綠茶萃 ‧ 取物(500 毫克/天)補充，於八週補充期前後，受試者分別進行 70%VO2 peak 固定式腳踏車運動 60 分鐘。運動後立即補充高碳水化合物飲食（每公斤體重 2 克的碳水化合物，80%碳水化合物，8%脂肪，12%蛋白質），觀察運動後恢復期 3 小時的生理反應。在運動後恢復期 0、3 小時，從股外側肌採取肌肉樣本;每隔 30 分鐘採取血液，60 分鐘收集氣體，研究結果顯示，GTE-supplement 組肌肉肝醣的回補速率 5.67±0.95μmol/g wet tissue 顯著性高於 Pre-supplement 組 3.83±1.14 μmol/g wet tissue(p<.05)，血液中的游離脂肪酸顯著性高於 Pre-supplement 組。 GTE-supplement 組在運動後恢復期的呼吸生理反應顯著性低於 Pre-supplement 組。結論:本研究結果顯示補充八週綠茶萃取物，能在運動後恢復期提高肌肉肝醣回補速率。. 關鍵字:肌肉肝醣、綠茶萃取物、碳水化合物.

(3) Effect of Eight-week Green Tea Extracts Supplementation on Glycogen Synthesis in Exercised Human Skeletal Muscle Abstract. Previous studies showed that green tea extracts (GTE) are able to reduce body fat mass in mice and humans. The mechanism behind this phenomenon and GTE impact on metabolic consequences in human skeletal muscle remains unclear.. Therefore,. the present study investigated whether GTE supplementation enhanced fatty acid oxidation and attenuated glucose utilization resulting in enough glycogen reserves in exercised human skeletal muscle. Eight male athletes (age 21.9 ± 0.77 years) participated in this study, and served as eight weeks GTE supplementation (500 mg GTE/day for 8-week).. Before and after GTE supplementation, subjects were. separately performed a single bout of 60-min cycling exercise at 70-75 % (VO2 max) and consumed a carbohydrate meal (2 g carbohydrate/kg body weight, 80 % carbohydrate, 8 % fat, 12 % protein) immediately after exercise.. Biopsied muscle. samples were obtained from vastus lateralis immediately and 3 h after exercise. Simultaneously, blood were collected every 30-min and gaseous samples were collected every 60-min during 3-h recovery.. The results in this study were shown. that the rate of muscle glycogen synthesis with GTE administration was significant higher after eight weeks oral GTE supplementation (p<.05). On the other hand, GTE had advantages for enhancing fat oxidation, based on the evidences from gaseous.

(4) exchanges method and higher responses in circulating non-esterify fatty acid (NEFA) after 8 weeks GTE supplementation (p<0.05).. The present study suggested that. eight weeks oral GTE supplementation can be used as ergogenic aids, evidences from our results showed the beneficial effect of GTE on glycogen synthesis in exercised human skeletal muscle.. Keywords: muscle glycogen, GTE, carbohydrate.

(5) 目. 錄. 第壹章緒論 ....................................................... 1 第一節問題背景 ................................................... 1 第二節研究問題...................................................................................................... 4 第三節研究目的...................................................................................................... 5 第四節研究假設...................................................................................................... 5 第五節研究範圍與限制.......................................................................................... 6 第六節名詞操作型定義.......................................................................................... 6. 第貳章文獻探討 ......................................................................................................... 7 第一節運動與肌肉肝醣 .......................................................................................... 7 第二節肌肉肝醣合成與運動後能量的恢復.......................................................... 8 第三節綠茶萃取物對運動表現的影響................................................................ 11 第四節本章總結.................................................................................................... 14. 第參章研究方法與步驟 ........................................................................................... 16 第一節研究對象 .................................................................................................... 16 第二節實驗設計與流程 ........................................................................................ 16 第三節資料處理與統計分析................................................................................ 27 第肆章結果 ............................................................................................................... 28 第一節受試者基本資料 ........................................................................................ 28 第二節呼吸生理反應 ............................................................................................ 29 第三節血液生化值反應 ........................................................................................ 31 第四節肌肉肝醣濃度反應 .................................................................................... 37 第伍章討論與結論 ................................................................................................... 41 第一節呼吸生理反應 ............................................................................................ 41 第二節血液生理反應 ............................................................................................ 42 第三節肝醣合成 .................................................................................................... 43.

(6) 第四節結論 ............................................................................................................ 44. 參考文獻 ............................................................................................................... 45 附錄一受試者須知 ................................................................................................ 51 附錄二受試者同意書 ............................................................................................ 52 附錄三混合餐點營養成分表................................................................................ 53 附錄四血液胰島素檢測 ........................................................................................ 54 附錄五肌肉穿刺步驟 ............................................................................................ 55 附錄六肌肉肝醣分析步驟.................................................................................... 56.

(7) 表次表 3-1 測量受試者個別攝氧峰值之運動設計..................................................... 18 表 4-1 受試者基本資料......................................................................................... 28.

(8) 圖次圖 2-1 人體肌肉肝醣合成圖 ..................................................................................... 11. 圖 3-1 碳水化合物飲食內容................................................................................. 19 圖 3-2 實驗設計與流程......................................................................................... 21 圖 3-3 實驗流程..................................................................................................... 22 圖 3-4 肌肉穿刺步驟............................................................................................. 26 圖 4-1 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後呼吸交換率 .............. 29 圖 4-2 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後 3 小時內總能量消耗30 圖 4-3 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後血糖濃度反應 .......... 31 圖 4-4 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後血糖曲線下面積 ...... 32 圖 4-5 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後胰島素濃度反應 ...... 33 圖 4-6 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後胰島素曲線下面積 .. 34 圖 4-7 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後甘油濃度反應 .......... 35 圖 4-8 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後游離脂肪酸濃度反應36 圖 4-9 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之肌肉肝醣濃度 ...................... 37 圖 4-10 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之 0 至 3 小時肌肉肝醣增加量38 圖 4-11 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之 3 小時內肌肉肝醣回補速率39 圖 4-12 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之 3 小時內肌肉肝醣增加率 40.

(9) 補充八週綠茶萃取物對人體肌肉肝醣之影響第壹章第一節. 緒論. 問題背景. 人體中的肝醣分別儲存於肝臟與肌肉中，儲存於肝臟中的肝醣稱之為肝臟肝醣(liver glycogen)，是用來調節血液中葡萄糖濃度;儲存於肌肉中的肝醣稱之為肌肉肝醣(muscle glycogen)，是用於肌群能量代謝的能源。研究發現，肌肉肝醣儲存量與耐力運動表現成正比關係(Bergstrom, Hermansen, Hultman, & Saltin, 1967)肌肉肝醣濃度及消耗程度與疲勞表現有關。Spriet(2007)研究發現運動強度增加或是運動時間增長，肌肉肝醣含量會逐漸減少。當肌肉肝醣耗盡，肌肉就很難維持高強度及耐力運動，所以肌肉肝醣儲存量是耐力運動比賽的勝負關鍵之一。故肌肉肝醣的回補及儲存量對於運動員來說是相當重要。碳水化合物是人類的主要食物，經過消化分解會轉變成葡萄糖，而葡萄糖是肝醣的原料。研究發現，運動後攝取碳水化合物對於肝醣合成具有相當大的幫助 (Costill, Sherman, Fink, Maresh, Witten, & Miller, 1981）。Coyle(1999)證實，運動後補充碳水化合物的時間點，會影響肌肉肝醣的合成。FairchildFairchild, Fletcher, Steele, Goodman, Dawson, & Fournier (2002) 發現單次高強度腳踏車運動 ‧ (130%VO2peak 踩 180 秒再全力衝刺到耗竭)立即給予高碳水化合物餐(每公斤體重 10.3 公克)，結果肝醣濃度顯著性增加。這樣的過程稱之為「肝醣超載法」（glycogen supercompensation），而造成此結果的原因是由於運動會增強胰島素. 1.

(10) 敏感性以及提升肝醣合成酶活性。. 高強度運動會造成高代謝壓力(metabolic stress)，這種情況是急需要很多的能量，以調控至恆定狀態(homeostasis condition)。脂肪含有人體大量所需的能量 (Holloszy,1982)。在運動後恢復期，若是能夠使能量偏向於脂肪氧化，而運動後補充的高碳水化合物，就可以直接進入肌肉細胞儲存，進而節省碳水化合物氧化，這將會有助於提升肌肉肝醣合成。故各種能夠增加脂肪氧化以及節省葡萄糖氧化的增補劑(ergogenic aids)便成為運動科學家的一大課題。. 綠茶萃取物(Green tea extract, GTE)，在台灣綠茶已經是最受歡迎的飲料之一。而綠茶中含有豐富的多酚黃酮類(polyphenolic flavonoids)，也稱為兒茶素 (catechins)，其中主要成分:表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)、表兒茶素(epicatechin, EC)、表沒食子兒茶素(epigallocatechin, EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate, ECG)，而綠茶萃取物中的兒茶素已經知道具有多種生理特性。Lu, Meng, & Yang (2003)發現 EGCG 是一種兒茶酚酶，會抑制兒茶酚氧位甲基轉移酶(catechol-O-methyl transferase, COMT)，COMT 是一種分解正腎上腺素的酵素。EGCG 抑制 COMT，促使正腎上腺素刺激脂肪細胞，將會提升脂肪分解的效果(Venables, Hulston, Cox, & Jeukendrup, 2008)。若是綠茶萃取物能在運動後恢復期提升脂肪分解的效果，那運動後補充的碳水化合物，就可以進入肌肉細胞內儲存為肌肉肝醣，並快速提升肌肉肝醣濃度，以準備面對下 2.

(11) 次的運動挑戰。. 3.

(12) 第二節. 研究問題. 茶葉自古代以來，最早即被用作為是一種藥物，是直接吃的，後來，飲茶已普及為生活飲食，茶葉更是進貢及貿易的重要物品，品茶更是中國傳統文化的一部分。現今綠茶已經是受到相當歡迎的飲料，綠茶中含有豐富的多酚類 (polyphenols) 物質，如兒茶素類 (catechins) 、沒食子單寧酸類 (orgallotannins) 、黃酮醇類 (flavonols) 、黃烷醇類 (flavandiols) 和酚酸類 (phenolic acids)，這些成份有抗氧化功能，都有利於身體健康。 Dulloo等(1999)觀察人體受試者在休息時24小時，結果發現補充綠茶萃取物的確能有效增加脂肪氧化。綠茶萃取物能夠增加基礎能量代謝 (energy expenditure)，在RQ值顯著性的降低。Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Tokimitsu, & Hase (2006)觀察補充綠茶萃取物加運動的小鼠，發現運動耐力表現、游離脂肪酸以及脂肪酸β氧化顯著性提升，呼吸交換率和Malonyl-CoA顯著性下降，顯示脂肪氧化提升。由上述研究可得知，運動時綠茶萃取物的確能促使脂肪氧化，增加脂肪對能量的供應，這便能夠降低肝醣氧化的量，延遲疲勞的產生，增進運動表現。除了上述運動時延遲肌肉肝醣氧化重要之外，在連續接二連三的運動賽事，肌肉肝醣能否在運動後恢復期，有效率的快速回補甚至是超補，這也是相當重要的。在休息攝食後，食物經過消化會變成葡萄糖再經由吸收進入至血液，使血糖. 4.

(13) 提升。這時候胰島素便會分泌，促使葡萄糖進入細胞內，這時候能量會傾向於碳水化合物氧化。在高強度運動後的恢復期，身體會急切需要很多能量至運動前的水準，這時候攝食碳水化合物，便更易於氧化，並且產生能量提供於恢復。而此時的能量需求來源若是傾向於碳水化合物氧化，那對於肌肉肝醣的存儲將是不利。Costill, Coyle, Dalsky, Evans, Fink, & Hoopes (1977)發現若是增加脂肪酸的氧化，就會降低葡萄糖的利用。綠茶萃取物是否能在運動後恢復期，促進脂肪氧化之效果，以供應恢復期所需之能量，以便讓運動後補充的碳水化合物，直接進入肌肉細胞內存儲為肌肉肝醣，甚至達到快速回補的效果，便是本研究所探討的主題。. 第三節. 研究目的. ‧ 本研究探討持續補充八週的綠茶萃取物增補劑，對於單次70%VO2 peak60分鐘固定式腳踏車運動，是否可以增加運動後第0、3小時期間人體骨骼肌肉肝醣合成量。並在運動後0至3小時期間，藉由分析二組血糖、胰島素濃度、呼吸交換率、甘油、游離脂肪酸的變項作為佐證資料。. 第四節. 研究假設. ‧ 持續補充綠茶萃取物增補劑八週後，經單次 70%VO2 peak 固定式腳踏車運動 60 分鐘後的恢復期，立即補充碳水化合物飲食，對於人體肌肉肝醣合成有顯著 5.

(14) 增加效果。. 第五節一、. 研究範圍與限制補充綠茶萃取物增補劑持續八週，並於單次運動訓練結束立即補充高碳. 水化合物，觀察運動後第 0、3 小時肌肉肝醣濃度之變化，對於 3 小時之後肝醣濃度是否有再變化則無法推估。二、. 本研究的肌肉樣本是透過肌肉穿刺取得，穿刺的部位為股外側肌。雖然. 再穿刺部位要求一致，但是對於樣本的肌肉類型，無從證實是否一致。無法排除肌肉型態不同，對於肌肉肝醣濃度是否有影響。. 第六節一、. 名詞操作型定義綠茶萃取物(Green tea extract)增補劑:. 本研究所使用的增補劑，每顆為500毫克綠茶之填充粉末膠囊。二、. 肌肉肝糖濃度(muscle glycogen concentration)：. 本研究以受試者骨骼肌肉中每公克濕肌肉內所含的微莫耳葡萄糖(μmol/g wet tissue)為測量依據。 ‧ 三、最大攝氧峰值(peak oxygen intake, VO2 peak)：本研究的攝氧量並非攝氧量的絕對最大值，使用固定式腳踏車運動來測量受試者的攝氧量。在腳踏車運動期間攝氧量達到穩定狀態後，且腳踏車功率持續增加的情況下，攝氧量不再隨著運動負荷的增加而升高，或增加的值在 2 ml/kg/min 之內，且呼吸交換率在 1.15 以上的最大值，即判定為最大攝氧峰 6.

(15) 值。. 第貳章第一節. 文獻探討. 運動與肌肉肝醣. 人體中的肝醣分別存儲於肝臟與肌肉中，儲存於肝臟中的肝醣稱之為肝臟肝醣(liver glycogen)，是用來調節血液中葡萄糖濃度;存儲於肌肉中的肝醣稱之為肌肉肝醣(muscle glycogen)，是用於肌群能量代謝的能源。提供運動能量代謝的 ‧ 途徑，是取決於運動的強度和時間。人體進行 60% VO2 peak 以下的運動強度，能 ‧ 量的使用是偏向於脂肪;人體進行 60-85% VO2 peak 運動強度，能量的使用是偏向於肝醣，而隨著運動時間的增加，肝醣也會隨之殆盡，疲勞感也會隨之產生。所以在運動比賽中，特別是高強度且時間長的項目，肌肉肝醣的存儲量通常都是比賽的關鍵之一。 Romijn, Coyle, Sidossis, Gastaldelli, Horowitz, Endert, & Wolfe (1993)已經證實，當中、高強度運動時，肌肉肝醣是主要的能量來源。Bergstrom, Hermansen, Hultman, & Saltin (1967)發現運動強度越大，對於肝醣能源的需求也越大。人體在進行運動過程中，疲勞感與肌肉肝醣耗損的程度是有相關，只要肌肉肝醣耗竭，肌肉就難以維持高強度耐力運動。Harris, Edwards, Hultman, Nordesjö, Nylind, & Sahlin (1976)證實當身體中的醣類耗竭時，將會引起肌肉疲勞，而無法再進行運動。 Demarco, Sucher, Cisar, & Butterfield (1999)在運動前 30 分鐘，補充碳水化合 7.

(16) ‧ ‧ 物，再進行 2 小時腳踏車運動(65~70% VO2 peak)後，最後將強度調至 100% VO2 peak 騎至力竭，結果發現力竭時間延長了 59%。主要目的是增加醣類可利用率，進而延緩醣類耗竭，藉以增加耐力運動表現。Wu, Nicholas, Williams, Took, & Hardy (2003)指出，運動前攝取中、低升糖指數的飲食能夠維持較穩定的血糖，並且有助於提升運動表現。綜合上述文獻，人體在面臨中、高強度的運動時，肝醣是扮演一個重大的角色。當體內肝醣存量不足以應付運動所需，這時候疲勞便產生，運動表現則會下降，最後會將無法持續中、高強度運動。因此，在高運動強度及時間較長的競賽中，人體中的肝醣儲存量往往是決定勝負的重要關鍵。. 第二節. 肌肉肝醣合成與運動後能量的恢復. 葡萄糖轉運蛋白(GLUT4)在肌肉肝醣合成上是一個重要的角色。血液中葡萄糖要進入肌肉細胞，必須透過葡萄糖轉運蛋白才能夠穿越細胞膜表面，當葡萄糖穿過細胞膜進入細胞後，隨即被六碳糖激酶(hexokinase)磷酸化成為葡萄糖-6磷酸(glucose-6-phosphate, G-6-P)，G-6-P 被葡萄糖磷酸轉換酶 (phosphoglucomutase)轉變成葡萄糖-1-磷酸(glucose-1-phosphate, G-1-P)，然後 G-1-P 與尿嘌呤核苷三磷酸(uridine triphosphate, UTP)經由尿嘌呤核苷 1 磷酸轉換酶(uridine monophosphate transferase)催化成為尿嘌呤核苷二磷酸-葡萄糖 (uridine diphosphate - glucose, UDPG)，形成肝醣分子。UDPG 經由肝醣合成酶的催化，形成 α-1,4 醣苷鍵，串成直鏈狀。當肝醣分子結構超過 11 個分子後，支 8.

(17) 鏈酵素(branching enzyme)會將葡萄糖鏈切下，再以 α-1,6 肝醣鍵將葡萄糖連接至附近的肝醣上(Jentjens & Jeukendrup, 2003) (圖 2-1)。運動會減少肌肉肝醣儲存量，而血液中的葡萄糖透過運送，能夠在進入肌肉細胞內再合成。運動後肝醣合成可細分為二個階段:第一階段稱為快速合成階段，此階段不需要依賴胰島素參與作用，所以又稱為非胰島素依賴期 (insulin-independent phase)。Price, Rothman, Taylor, Avison, Shulman, & Shulman, (1994)發現此階段肝醣合成速率每小時約 12-30 mmol/g，時間可持續約 30-60 分鐘。Nielsen 等(2001)此階段由於肌肉收縮，會增加細胞膜對於葡萄糖的通透性，並且提升胰島素敏感性。第二階段稱為慢速合成階段，此階段依賴胰島素參與作用，故此階段又稱為胰島素依賴期(insulin-dependent phase) (Wojtaszewski & Hansen, 2000)。此外在運動過程中，肝醣消耗越多越能夠使胰島素刺激葡萄糖轉運蛋白(glucose transporter,GLUT4)轉位至細胞膜上，幫助葡萄糖進入細胞內，並且促進肌肉肝醣濃度提升(Derave, Lund, Holman, Wojtaszewski, Pedersen & Richter, 1999)。 Price, Rothman, Taylor, Avison, Shulman, & Shulman (1994)發現此階段的肝醣合成速率只有快速期的 10-30%，運動後立刻補充碳水化合物，慢速時期的肝醣合成速率則能增加(Ivy, 1991)。Bergstrom, Hermansen, Hultman, & Saltin (1967)證實，運動訓練後持續補充碳水化合物，肌肉肝醣合成量會高於運動前的儲存量。此方法又稱為「肝醣超載法」（glycogen supercompensation），因此除了運動訓 9.

(18) 練，能夠增加肝醣濃度;運動訓練後的碳水化合物補充對於肝醣也是相當重要。 Coyle(1999)發現運動訓練後碳水化合物補充的類型與時機，是影響肝醣合成的重要因素。補充不同升糖指數(Glycemic Index, GI)的碳水化合物，對於身體能量代謝反應會有所不同。Burke, Collier, & Hargreaves (1993)研究 5 位自行車選 ‧ 手進行 75%VO2 peak 腳踏車運動，再全力衝刺 4 次後，立即補充高 GI 或低 GI 食物(1.0 公克/公斤體重)，再由肌肉穿刺切片觀察肌肉肝醣，結果發現補充高 GI 組的肌肉肝醣儲存量顯著性高於低 GI 組。在運動後補充碳水化合物，是為了補充在運動過程中，所消耗掉的肝臟肝醣以及肌肉肝醣。另一方面則是，提高肌肉肝醣再合成速度，快速恢復體能，保持最佳體能狀態，以便應付接二連三的運動賽事與訓練。. 10.

(19) 圖 2-1. 第三節一、. 人體骨骼肌肉肝醣合成圖，取自 Jentjens & Jeukendrup (2003). 綠茶萃取物對運動表現的影響綠茶萃取物簡介. 在台灣綠茶已經是最受歡迎的飲料之一。而綠茶中含有豐富的多酚黃酮類，也稱為兒茶素，其中主要成分:表沒食子兒茶素沒食子酸酯 (EGCG)、表兒茶素 (EC)、表沒食子兒茶素 (EGC)、表兒茶素沒食子酸酯 (ECG)，而綠茶萃取物中的兒茶素已經知道具有多種生理特性(Diepvens, Westerterp, & Westerterp-Plantenga, 2007)。 11.

(20) 在許多研究上，證實綠茶具有預防心血管疾病、癌症以及第 2 型糖尿病的效果，另一方面綠茶也能夠提升胰島素的敏感性與降低體重及體脂肪(Mahaboob & Kour,2007; Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Nagasawa & Tokimitsu, 2005; Nagao, Hase & Tokimitsu, 2007; Nagao, Komine, Soga, Meguro, Hase, Tanaka & Tokimitsu, 2005)。二、. 綠茶萃取物對脂肪代謝的機轉. Lu, Meng & Yang (2003) 綠茶萃取物中的EGCG一種兒茶酚酶，會抑制兒茶酚氧位甲基轉移酶(COMT)，COMT是一種分解正腎上腺素的酵素。EGCG抑制 COMT，促使正腎上腺素刺激脂肪細胞，將會提升脂肪分解的效果(Venables, Hulston, Cox, & Jeukendrup, 2008)。Dulloo, Duret, Rohrer, Girardier, Mensi, Fathi, Chantre, & Vandermander (1999) 觀察 10 名男性受試者補充綠茶萃取物(375 毫克兒茶素)24 小時，研究結果發現在靜態的能量消耗是顯著性的提升，呼吸交換率也顯著性降低。Nagao, Hase, & Tokimitsu (2007) 觀察 240 名肥胖受試者(年齡介於 25~50 歲)，12 週內每天補充 340 毫升兒茶素飲料(實驗組劑量是 583 毫克兒茶素;控制組劑量是 96 毫克兒茶素)，研究結果發現體重、體脂肪和 BMI 顯著性降低於控制組。Auvichayapat, Prapochanung, Tunkamnerdthai, & Auvichayapat (2007) 觀察 60 位肥胖受試者(女性:42 位;男性:18 位)，12 週三餐餐後攝取 250 毫克綠茶萃取物膠囊，結果發現在第 8 週呼吸商、體重、體脂肪和呼吸交換率都顯著性下降。 Harada, Chikama, Saito, Takase, Nagao, Hase, & Tokimitsu (2005) 探討 12 位男性 12.

(21) 受試者(年齡介於:27~48 歲)每天補充 350 毫升綠茶萃取物飲料(高劑量:592.9 毫克;低劑量:77.7 毫克)，研究結果發現在第 8 和 12 週，餐後氧消耗量顯著性增加。 Wu, Juan, Ho, Hsu, & Hwang (2004) 研究雄性大鼠，12 週每日攝取 0.5 克綠茶粉，再進行口服葡萄糖耐受度測驗。研究結果發現在第 4 週，口服葡萄糖耐受度測驗後的 90 和 120 分鐘的血糖和胰島素顯著性低於控制組。在第 12 週的口服葡萄糖耐度測驗後，胰島素顯著性低於控制組，空腹血糖也是如此。而細胞中的葡萄糖攝取和胰島素結合都顯著性增加。Venables, Hulston, Cox, & Jeukendrup (2008) 觀察 12 位男性單次攝取綠茶萃取物(多酚類:340 毫克;EGCG:136 毫克)，在進行口服葡萄糖耐受度測驗，結果發現胰島素曲線下面積顯著性低於安慰劑組，而胰島素敏感指數顯著性高於安慰劑組。這些研究結果說明綠茶萃取物能夠使胰島素敏感性提升以及能量代謝偏向於脂肪，將使運動表現能力提升。三、. 綠茶萃取物對運動表現的影響. 綠茶萃取物具有提升脂肪氧化的效果，當脂肪酸 β 氧化作用後降解成乙醯輔酶 A，進入克式循環，再進入電子傳遞，並且產生人體運動時所需的能量。若是綠茶萃取物能在運動後恢復期提升脂肪氧化之效果，那運動後立即補充的碳水化物，就能夠直接進入肌肉細胞內儲存為肌肉肝醣，快速提升肌肉肝醣含量，以便面臨接二連三的賽事或訓練。 Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Nagasawa, & Tokimitsu (2005) 餵食 4 週 13.

(22) 歲雄性 BALB/c 小鼠綠茶萃取物(總飲食 0.2%或 0.5%綠茶萃取物)10 週，研究結果發現補充綠茶萃取物的 BALB/c 小鼠游泳耐力表現顯著性提升，游離脂肪酸、脂肪酸氧化以及 β 氧化活性提升，而呼吸交換率也顯著性下降。Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Tokimitsu, & Hase (2006)餵食 6 週歲雄性 BALB/c 小鼠綠茶萃取物(總飲食 0.2%或 0.5%綠茶萃取物)，研究結果發現補充綠茶萃取物的 BALB/c 小鼠跑步耐力表現顯著性的提升，呼吸交換率和 Malonyl-CoA 顯著性降低，肌肉肝醣含量和脂肪酸β氧化活性也顯著性提升。Ichinose 等(2011)觀察 12 名男 ‧ 性受試者，補充綠茶萃取物(572.8 毫克飲料)10 週再進行 60%VO2 peak 固定式腳踏車運動，研究結果發現綠茶萃取物組的呼吸交換率顯著性低於安慰劑組。由上述實驗得知，綠茶萃取物確實能夠提升脂肪氧化，使能量偏向於脂肪氧化，如此一來便能降低肝醣氧化的量，延遲疲勞的產生，促進運動表現。. 第四節. 本章總結. 肝醣和脂肪是人體運動的二大主要能量，在緊急需要能量時，醣類可快速供給能量，而脂肪是較慢的;但是能量儲存量來說，脂肪蘊含的能量是高於醣類。而人體大部分的能量儲存都是偏向於脂肪的型態，對於碳水化合物的儲存是比較差的，但是對於人類來說這是不可缺少的。人體在面臨到高強度運動時，能量代謝會偏向於碳水化合物氧化，但是碳水化合物的儲存是有限的，當肌肉肝醣耗竭時，疲勞便會產生，這個結果將無法維 14.

(23) 持高強度運動。在競技運動比賽中，運動員必須能夠一直維持高強度運動，獲勝的機會才會提高。人體在面臨高強度運動後的恢復期，會需要大量的能量來回到運動前的水準，這時候攝取碳水化合物的飲食，會造成胰島素的分泌，使能量偏向於碳水化合物氧化，對於肝醣的儲存是不好的。若此時藉由綠茶萃取物提升脂肪氧化，使能量代謝偏向於脂肪氧化，而補充的碳水化合物飲食，將可進入細胞內儲存為肌肉肝醣，達到快速回補的作用。因此，本研究探討持續補充八週綠茶萃取物後，經單次運動挑戰後，立即補充碳水化合物飲食，是否能夠有效提升人體肌肉肝醣合成?. 15.

(24) 第參章. 研究方法與步驟. 第一節研究對象本研究以 8 名平時有運動習慣，且無患有心血管疾病史、沒有抽煙習慣的健康大學男性作為實驗對象。. 第二節實驗設計與流程本研究實驗是經過國立臺灣體育運動大學人體試驗委員會審查同意，每位受試者參與實驗之前，要告知受試者實驗目的與流程（附錄一），受試者必須同意後簽署參與實驗同意書（附錄二）。正式實驗前，受試者需接受最大攝氧峰值測量。8 名受試者分別完成兩項實驗設計。實驗期間，要求受試者避免激烈運動，禁止咖啡的攝取和抽煙，直至實驗當天。實驗前一晚需禁食 12 小時。一、實驗設計 (一)實驗處理：採前後實驗設計，8 名受試者分別參與兩項試驗，每次試驗間隔 8 週。 ‧ 實驗 1(Pre-supplement)：60 分鐘 70％VO2 peak 固定腳踏車運動後，進行第一次肌肉穿刺與抽血，立刻補充碳水化合物。飲食補充後，在 3 小時運動後恢復期間內，每隔 30 分鐘採血 1 次、每隔 1 小時收集氣體 1 次，至第 3 小時，於第 3 小時進行第 2 次肌肉穿刺。 ‧ 實驗 2(GTE-supplement)：持續補充 8 週綠茶萃取物後，進行 60 分鐘 70 %VO2 16.

(25) peak 固定腳踏車運動後，進行第一次肉穿刺與抽血，立刻補充碳水化合物，飲食. 補充後，在 3 小時運動後恢復期間內，每隔 30 分鐘採血 1 次、每隔 1 小時收集氣體 1 次，於第 3 小時進行第 2 次肌肉穿刺。 (二)飲食控制實驗期間，受試者應避免攝取含有咖啡因成份之飲料，注意每天的飲食，在食物攝取上需均衡，避免暴飲暴食，並且紀錄每天 3 餐的飲食狀況，掌控每天飲食攝取量。 ‧ (三)最大攝氧峰值(VO2 peak)測量與運動強度設定受試者於接受試驗前進行個別最大攝氧峰值測量，執行腳踏車運動 (Monark 874E, Vansbro, Sweden)，戴上集氧式面罩及可攜式氣體分析儀 MetaMax3B (Cortex Biophysik, Nonnenstrasse, Leipzig, Germany)，於分析軟體中輸入個別年齡、身高、體重後開始測試。受試者進行腳踏車運動剛開始 0~4 分鐘時，需維持每分鐘 60 轉(rpm)的轉速，功率 30 瓦特(Watt)。之後每 2 分鐘腳踏車功率增加 30 瓦特(如表 3-1)，直到受試者攝氧量達到穩定，且在腳踏車功率增加的情況下，攝氧量不再隨著運動強度而增加或增加值小於 2 ml/kg/min，且呼吸交換率(Respiratory exchange ratio, RER)大於 1.15 (Williams, Powers, & Stuart, 1986)，此時為受試者的最大攝氧峰值，將測量所得最大攝氧峰值的時間點對應 ‧ 至腳踏車功率上，再將數值乘以 70％即為受試者進行 70％VO2 peak 60 分鐘腳踏車之運動強度。. 17.

(26) 表 3-1. 測量受試者個別攝氧峰值之運動設計. 持續時間. 負荷. 轉速. 阻力. (min). (kp). (rpm). 1. 0~4. 0.5. 60. 30. 0.5. 2. 4~6. 1.0. 60. 60. 1.0. 3. 6~8. 1.5. 60. 90. 1.5. 4. 8~10. 2.0. 60. 120. 2.0. 5. 10~12. 2.5. 60. 150. 2.5. 6. 12~14. 3.0. 60. 180. 3.0. 7. 14~16. 3.5. 60. 210. 3.5. 8. 16~18. 4.0. 60. 240. 4.0. 9. 18~20. 5.0. 60. 300. 5.0. 階段. 18. (watt). (kg).

(27) (四)碳水化合物飲食內容每公斤體重 2g 碳水化合物飲食(80%碳水化合物，8%脂肪，12%蛋白質)，內容物包括：白土司、草莓果醬、葡萄糖水、玉米片、低脂牛奶和水(Wu, Nicholas, Williams, Took, & Hardy, 2003)附錄三。. 圖 3-1 碳水化合物飲食內容. (五)綠茶萃取物來源與劑量：本研究使用的綠茶萃取物，每顆內容物為 500 mg，美國的 GNC (General Nutrition Centers)以填充綠茶粉末膠囊製備，每天中午 12:00 給予受試者增補 1 顆，共 500 mg。. 19.

(28) 二、實驗流程 ‧ 受試者個別攝氧峰值(VO2 peak)測定. ‧ 確定受試者個別 70% VO2 peak 的踏車負荷. 前測 -------------------------------------------------------------------(一)實驗前一晚禁食 12 小時，隔天早上 8 點至實驗室 (二)受試者空腹狀態接受採血. ‧ 70% VO2 peak 腳踏車運動 60 分. 運動後 0 小時立即進行採血、第 1 次肌肉穿刺. Pre-supplement 運動後補充碳水化合物飲食. (一)受試者飲食補充後 3 小時內每 30 分鐘接受採血(第 30、60、90、120、150 與 180 分)。 (二)受試者飲食補充後第 3 小時進行第 2 次肌肉穿刺。. (一)運動前與運動後每 30 分鐘血液樣本以及第 0、3 小時肌肉樣本 (二)進行血液生化值與肌肉肝醣濃度分析。 20.

(29) 補充八週綠茶萃取物. ‧ 受試者個別攝氧峰值(VO2 peak)測定. ‧ 確定受試者個別 70% VO2 peak 的踏車負荷前測. (一)實驗前一晚禁食 12 小時，隔天早上 8 點至實驗室 (二)受試者空腹狀態接受採血. ‧ 70% VO2 peak 腳踏車運動 60 分. 運動後 0 小時立即進行採血、第 1 次肌肉穿刺. GTE-supplement 運動後補充碳水化合物飲食. (一)受試者飲食補充後 3 小時內每 30 分鐘接受採血(第 30、60、90、120、150 與 180 分)。 (二)受試者飲食補充後第 3 小時進行第 2 次肌肉穿刺。. (一)運動前與運動後每 30 分鐘血液樣本以及第 0、3 小時肌肉樣本 (二)進行血液生化值與肌肉肝醣濃度分析。圖 3-2. 實驗設計與流程 21.

(30) 一週前測量. 一週前測量. 運動後恢復期. VO2max. VO2max. 10 分鐘吃碳水化合物餐. 補充八週綠茶萃取. 60 分鐘 70-75%VO2max. 實驗當天. 時間(分鐘). 物. 腳踏車運動. -60. 0. 運動後恢復期. 30 60 90 120 150 180. 60 分鐘 70-75%VO2max. 實驗當天. 腳踏車運動. -60. 採取血液. 採取氣體. 肌肉穿刺. 圖 3-3. 10 分鐘吃碳水化合物餐. 實驗流程圖. 在手肘橈骨靜脈採血液樣本在嘴巴及鼻子收集氣體樣本在股外側肌進行肌肉穿刺採肌肉樣本. 22. 0. 30 60 90 120 150 180.

(31) 三、樣本收集與實驗分析方法 (一)血液樣本收集與分析 1.血液收集與處理由合格護士來採集血液樣本，使用無菌拋棄式針頭和 10 ml 針筒，從受試者手肘橈骨靜脈抽取 10 ml 靜脈血，置入含有 EDTA(抗凝血劑)的真空採血管內，再透過離心機以 3000 rpm 的轉速，進行 10 分鐘的離心之後，取出上清液，並儲存於-20℃冰箱內。 2.血液生化值檢測分析 (1)血糖分析血糖分析方式使用穩豪血糖機（One Touch Ultra Blood Glucose Meter, Life Scan Inc., Milpitas,California,USA）及試紙測得。 (2)胰島素分析：以酵素免疫分析法(enzyme-link immunosorbent assay, ELISA)，檢測工具為 Human Insulin ELISA kit (Linco Research, Missouri, USA)，將血清樣本加入含有一級抗體之96孔盤來偵測捕捉胰島素蛋白質，洗去未結合的物質，再加入另一個與酵素結合並對一級抗體具有專一性之二級抗體(或稱酵素連結抗體， enzyme-labeled antibody)，二級抗體與一級抗體產生專一性結合，並藉此將酵素帶到有胰島素存在的位置，然後加入酵素的受質 (substrate)3,3’5,5’-tetramethylbenzidine，經過一段時間的作用，酵素會催化受質 23.

(32) 反應而呈現顏色，以OD450 nm讀取吸光值，再利用標準溶液和吸光值，將所得數據畫出標準曲線，計算回歸公式，最後換算出樣本之胰島素濃度，步驟參閱附錄四。 (3)游離脂肪酸分析：血漿中游離脂肪酸的濃度以商業試劑進行操作以及反應(WAKO NEFA,Germany)，並以全自動分析儀(Hitachi7020, HitachiSciencesystems, Ltd, Lbaranki, Japan)檢測。. (4) 甘油分析：血漿中的甘油濃度，以商業試劑（Randox, Co. Antrim, United Kingdom）進行操作與反應，並以全自動生化分析儀（Hitachi 7020, Hitachi Science systems, Ltd, Lbaranki, Japan）檢測。. (二)氣體樣本收集與分析: 受試者運動後恢復期補充飲食後第1、2、3小時分別透過氣體分析儀 MetaMax3B(Cortex Biophysik,Nonnenstrasse,Leipzing,Germany)收集10分鐘氣 ‧ ‧ 體，並分析氧(VO2)和二氧化碳(VCO2)。 (三)肌肉樣本收集與分析 1.肌肉樣本收集與處理：由合格醫師執行肌肉穿刺取肌肉樣本，先在大腿股外側肌作上一個記號，此處 24.

(33) 以優碘與酒精進行消毒，蓋上無菌之洞巾，接著注射 2 ml 麻醉劑 (2%Lidocaine) 後，再使用 14 號肌穿針(Temno, McGaw Park, IL, USA)於股外側肌採取肌肉樣本，取出肌肉後立即置入液態氮中保存。肌肉穿刺步驟參閱圖 3-4 與附錄五。 2.肌肉肝醣濃度分析：先使用1 N之氫氧化鉀(KOH)溶解肌肉樣本，再以0.3 M 醋酸鈉(sodiumacetate) 調節試管內的酸鹼值(pH)後，加入澱粉糖基酶(amyloglucosidase, Boehringer Mannheim)將肝醣分解成葡萄醣，接著使用過氧化呈色組合方式(Trinder Glucose Kit,Sigma)，並在分光光譜儀OD505 nm下測定葡萄糖濃度(glucosyl unit)，將所得數據畫出標準曲線，計算回歸公式最後換算出樣本之肌肉肝醣濃度，步驟參閱附錄六。. 25.

(34) 圖 3-4 肌肉穿刺步驟. 26.

(35) 第三節資料處理與統計分析將實驗數據以 SPSS for Windows 19.0 版統計套裝軟體進行分析: 一、以相依樣本二因子變異數分析(two-way ANOVA)，比較 2 組受試者運動後 0 至 3 小時內，每 30 分鐘血液生化值（血糖、胰島素、甘油、游離脂肪酸）、呼吸交換率之差異。二、以相依樣本 t 檢定，比較 2 試驗受試者運動後各時間點肌肉肝醣濃度、回補率、增加量、肌肉肝醣增加率、運動後總能量消耗，以及血糖與胰島素曲線下面積之差異。三、所有結果以平均值 ± 標準誤 (mean ± SE)表示，檢定水準設為 ɑ＜.05 達顯著水準。. 27.

(36) 第肆章. 結果. 本研究資料經由統計軟體處理後，將所得結果分為受試者基本資料、呼吸生理反應、血液生化值反應與肌肉肝醣濃度反應等四部份，分別敘述。. 第一節受試者基本資料本研究以 8 名平時有運動習慣，且無患有心血管疾病史、沒有抽煙習慣的健康大學男性作為實驗對象，平均年齡為 21.9±0.77 歲、身高為 173.9±1.04 cm、體重為 76.67±2.96 kg、身體質量指數為 25.35±0.96 kg/m2 、最大攝氧峰值為 46.32 ±2.21 ml/kg/min，如表 4-1 所示。. 表 4-1 項. 受試者基本資料 (n=8) 目. mean ± SE. 年齡 (yr). 21.9±0.77. 身高 (cm). 173.9±1.04. 體重 (kg). 76.67±2.96. BMI (kg / m2). 25.35±0.96. VO2peak (ml/kg/min). 46.32±2.21. 註：數值以平均數(mean) ± 標準誤(SE)表示。. 28.

(37) 第二節呼吸生理反應一、呼吸交換率 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組分別於運動後 3 小時內，每 1 小時收集氣體樣本進行分析，以相依樣本二因子變異係數分析比較 2 組呼吸交換率之差異。從圖中可觀察到，2 組呼吸交換率在碳水化合物的補充後，GTE-supplement 組在圖中顯示皆比 Pre-supplement 組來的低，GTE-supplement 組在第 2 小時顯著性低於 Pre-supplement 組（p<.05），如圖 4-1 所示。. 圖 4-1 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後呼吸交換率註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。『＊』表示與 Pre-supplement 組比較達顯著差異（p<.05）數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=4)。. 29.

(38) 二、運動後 3 小時內總能量消耗 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組分別於運動後 3 小時內，每 1 小時收集氣體樣本進行分析，利用可攜式氣體分析儀 MetaMax3B (Cortex Biophysik, Nonnenstrasse, Leipzig, Germany)，計算在運動後恢復期 3 小時內的總能量消耗。計算結果 Pre-supplement 組為 186.98 ± 4.06 kcal/3 hr ；GTE-supplement 組 201.44 ± 5.75 kcal/3 hr 。以相依樣本 t 檢定比較兩組在運動中 3 小時內總能量消耗之差異，結果未達顯著差異 (p>.05)，如圖 4-2 所示。. 圖 4-2 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後 3 小時內總能量消耗註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=4)。. 30.

(39) 第三節血液生化值反應一、血糖反應比較兩組在運動後立刻補充碳水化合物飲食後，觀察運動後恢復期 3 小時內之血糖反應，以相依樣本二因子變異係數分析比較 2 組的血糖之差異。血糖濃度在攝食後快速上升，至 30 分鐘達到最高值，隨後逐漸下降，經由統計分析後未達顯著差異 (p>.05)，如圖 4-3 所示。. 圖 4-3 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後血糖濃度反應註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 31.

(40) 二、血糖曲線下面積 (glucose area under the curve, GAUC) 以運動前空腹血糖值為基準線，計算 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組在基準線上的血糖曲線面積，低於基準線以下不列入計算，而計算結果稱為血糖曲線下面積 (Wolever, 2004)。計算結果 Pre-supplement 組為 26861.25±879.57 mg/dl x min；GTE-supplement 組 26152.77±680.51 mg/dl x min。以相依樣本 t 檢定比較兩組在運動後飲食補充 3 小時內血糖曲線下面積之差異，結果未達顯著差異 (p>.05)，如圖 4-4 所示。. 圖 4-4 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動期後血糖曲線下面積註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 32.

(41) 三、胰島素反應 (Plasma Insulin) 比較兩組在運動後立刻補充碳水化合物飲食後，觀察運動後恢復期 3 小時內之胰島素反應，以相依樣本二因子變異係數分析比較 2 組的胰島素之差異。胰島素濃度在攝食後快速上升，至 30 分鐘達到最高值，隨後逐漸下降，經由統計分析後未達顯著差異 (p>.05)，如圖 4-5 所示。. 圖 4-5 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後胰島素濃度反應註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 33.

(42) 四、胰島素曲線下面積 (insulin area under the curve, IAUC) 以運動前空腹胰島素值為基準線，計算 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組在基準線上的胰島素曲線面積，低於基準線以下不列入計算，而計算結果稱為胰島素曲線下面積 (Wolever, 2004)。計算結果 Pre-supplement 組為 12633.78±2319.11 mg/dl x min；GTE-supplement 組 12703.52±2375.77 mg/dl x min。以相依樣本 t 檢定比較兩組在運動後飲食補充 3 小時內胰島素曲線下面積之差異，結果未達顯著差異 (p>.05)，如圖 4-6 所示。. 圖 4-6 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動期後胰島素曲線下面積註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 34.

(43) 五、甘油 (Plasma glycerol) 比較兩組在運動後立刻補充碳水化合物飲食後，觀察運動後恢復期 3 小時內之甘油，以相依樣本二因子變異係數分析比較 2 組的甘油濃度之差異。甘油濃度在運動結束後達到最高點，隨後逐漸下降，經由統計分析後未達顯著差異 (p>.05)，如圖 4-7 所示。. 圖 4-7 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之運動後甘油濃度反應註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 35.

(44) 六、游離脂肪酸 (Plasma nonesterified fatty acid, NEFA) 比較兩組在運動後立刻補充碳水化合物飲食後，觀察運動後恢復期 3 小時內之游離脂肪酸濃度，以相依樣本二因子變異係數分析比較 2 組的游離脂肪酸濃度之差異。由圖中可以觀察到，GTE-supplement 組在第-60、60 和 90 分鐘，游離脂肪酸濃度顯著性高於 Pre-supplement (p<.05)，如圖 4-8 所示。. 圖 4-8 Pre-supplement 與 GTE-supplement 組之運動後游離脂肪酸濃度反應註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。『＊』表示與 Pre-supplement 組比較達顯著差異（p<.05）。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 36.

(45) 第四節肌肉肝糖濃度反應一、運動進食後 3 小時內之肌肉肝醣濃度反應 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組在單次運動後 3 小時內之肌肉肝醣濃度，Pre-supplement 組 0 小時為 49.38±5.58 μmol/g wet tissue，第 3 小時為 60.88±5.69 μmol/g wet tissue; GTE-supplement 組 0 小時為 48.07±8.88 μmol/g wet tissue，第 3 小時為 65.10±7.97 μmol/g wet tissue。以相依樣本二因子變異數分析( two-way ANOVA )比較 2 組在 0、3 小時之差異，結果如圖 4-9 所示。結果顯示， Pre-supplement 組第 3 小時顯著高於第 0 小時（p<.05）。GTE-supplement 組第 3 小時顯著高於第 0 小時（p<.05）。2 組的第 0、3 小時未達顯著差異。. 圖 4-9 Pre-supplement 組與 GTE-supplement 組之肌肉肝醣濃度註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。『＊』表示與 0 小時比較達顯著差異（p<.05）。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。 37.

(46) 二、肌肉肝醣增加量 2 組在運動進食後 3 小時內肌肉肝醣的增加量，Pre-supplement 組為 11.49 ±3.44 μmol/g wet tissue；GTE-supplement 組為 17.02±2.87 μmol/g wet tissue。以相依樣本 t 檢定比較兩組的肌肉肝醣增加量，結果顯示 GTE-supplement 組顯著高於 Pre-supplement 組（p<.05），如圖 4-10 所示。. 圖 4-10 Pre-supplement 與 GTE-supplement 組之 0 至 3 小時肌肉肝醣增加量註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。『＊』表示與 Pre-supplement 組比較達顯著差異（p<.05）。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 38.

(47) 三、肌肉肝醣回補速率 2 組在運動進食後 3 小時內肌肉肝醣的回補速率，Pre-supplement 組為 3.83±1.14 μmol/g wet tissue；GTE-supplement 組為 5.67±0.95 μmol/g wet tissue。以相依樣本 t 檢定比較兩試驗的肌肉肝醣增加量，結果顯示 GTE-supplement 組顯著高於 Pre-supplement 組（p<.05），如圖 4-11 所示。. 圖 4-11 Pre-supplement 與 GTE-supplement 組之 3 小時內肌肉肝醣回補速率註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。『＊』表示與 Pre-supplement 組比較達顯著差異（p<.05）。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 39.

(48) 四、肌肉肝醣增加率 2 組在運動進食後 3 小時內肌肉肝醣增加率，Pre-supplement 組為 26.65±11.43 %；GTE-supplement 組為 42.39±12.69 %。以相依樣本 T 檢定比較 2 組肝醣的增加率，結果顯示 GTE-supplement 組顯著性高於 Pre-supplement 組（p<.05），如圖 4-12 所示。. 圖 4-12 Pre-supplement 與 GTE-supplement 組 3 小時內肌肉肝醣增加率註：Pre-supplement 組為補充八週綠茶萃取物前；GTE-supplement 組補充八週綠茶萃取物後。『＊』表示與 Pre-supplement 組比較達顯著差異（p<.05）。數值以平均值 ± 標準誤表示 (n=8)。. 40.

(49) 第伍章. 討論與結論. 本研究探討補充八週綠茶萃取物後，經單次腳踏車運動後恢復期，採集氣體、血液和肌肉，結果發現(一)呼吸交換率顯著性低於 Pre-supplement 組、(二)血液中的游離脂肪酸顯著性高於 Pre-supplement 組、(三)肌肉肝醣回補速率顯著性高於 Pre-supplement 組，以下分別討論。. 第一節呼吸生理反應本研究結果顯示，GTE-supplement 組顯著性低於 Pre-supplement 組，這意味著在運動後 3 小時的恢復期內能量是偏向於脂肪氧化，而 Lu, Meng, & Yang (2003) 發現 GTE 中的 EGCG 會抑制 COMT，他是一種分解正腎上腺素的酵素。所以 EGCG 抑制 COMT，會促使正腎上腺素刺激脂肪細胞，結果將會提升脂肪分解的效果(Venables, Hulston, Cox, & Jeukendrup, 2008)。 Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Nagasawa, & Tokimitsu (2005)進行一項動物實驗，餵食小鼠 10 週 GTE，並且每週進行游泳訓練 3 次，在最後 1 週測量呼吸商，結果發現呼吸商顯著性低於控制組。Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Tokimitsu, & Hase (2006)以小鼠進行了一項動物實驗，餵食 GTE10 週，分成 4 組為沒運動組、運動組、0.2%GTE 加運動組、0.5%GTE 加運動組，最後在運動前和運動期間觀察老鼠的呼吸交換率，結果發現 RER 顯著性低於運動組。 41.

(50) Venables, Hulston, Cox, & Jeukendrup (2008)進行一項人體實驗，受試者為 12 名健康男性，在實驗前一晚補充 GTE，實驗當天，受試者必須完成 30 分鐘 60% 的腳踏車運動，並觀察這 30 分鐘的能量消耗，研究結果發現 GTE 組的能量是偏向於脂肪氧化，顯著性高於控制組 17%。綜合上述學者的理論，本研究結果證實補充 GTE 能夠調控在運動後恢復期的能量代謝，提升脂肪氧化，節省碳水化合物氧化，利於葡萄糖吸收和儲存，最後轉化合成為肝醣。. 第二節血液生理反應本研究結果顯示，血糖和胰島素在各個時間點都未達到顯著水準，這意味著當受試者補充八週綠茶萃取物，在運動後恢復期所攝食的碳水化合物飲食，並沒有促使葡萄糖更有效能的吸收和儲存，但是在呼吸交換率上，我們發現運動後恢復期能量是偏向於脂肪氧化，而在總能量是沒有差異性。Lu, Meng, & Yang (2003) 提出 GTE 中的 EGCG 會抑制 COMT，促使正腎上腺素刺激脂肪細胞，提升脂肪分解的效果(Venables, Hulston, Cox, & Jeukendrup, 2008)。在圖 4-8 顯示， GTE-supplement 組的游離脂肪酸顯著性高於 Pre-supplement 組，這樣的結果再次證實運動後恢復期能量是偏向於脂肪氧化，因此節省碳水化而物氧化。 Wu, Juan, Ho, Hsu, & Hwang (2004) 以大鼠進行一項動物實驗，餵食 12 週 GTE，分別在第 4 和 12 週進行口服葡萄糖耐受度測驗(OGTT)，研究結果顯示， 42.

(51) 第 4 週的血糖和胰島素在時間點 90 和 120 均顯著性低於控制組，在第 12 週只有空腹血糖低於控制組，但是胰島素在各個時間點均低於控制組。這樣的研究結果和本研究不相同。 Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Tokimitsu, & Hase (2006)的研究結果發現，餵食 GTE10 週，小鼠在跑步運動後立刻採集血液樣本，血糖和甘油是未達到顯著性差異，游離脂肪酸顯著性高於控制組，這樣的結果是意味著，小鼠被餵食 GTE 後，能量是偏向於脂肪氧化。Venables, Hulston, Cox, & Jeukendrup (2008)研究結果發現，單次攝食 GTE 觀察運動期間的血液，血糖、胰島素、甘油和游離脂肪酸均未達到顯著性差異。綜合上述各學者研究結果，補充 GTE 在不同的實驗方法，血液反應也會產生不同的結果，而本研究顯示補充八週綠茶萃取物，在運動後恢復期，無法提升葡萄糖的吸收，但是卻能夠使能量偏向於脂肪氧化，回補運動後所需的能量。. 第三節肝醣合成本研究結果顯示，GTE-supplement 組在運動後恢復期肌肉肝醣增加量、回補速率、增加率，均顯著性高於 Pre-supplement 組。這樣的結果就意味著，補充八週綠茶萃取物。在運動後恢復期總能量消耗是沒有差異，而綠茶萃取物在運動後恢復期提升脂肪氧化，節省碳水化物氧化，促使葡萄糖吸收和合成，最後轉化成肌肉肝醣。本研究在圖 4-1 和 4-8，都能夠證實在運動後恢復期，能量是偏向於 43.

(52) 脂肪氧化，這樣的機轉是因為 GTE 中的 EGCG 抑制 COMT，促使正腎上腺素刺激脂肪細胞，提升脂肪分解的效果。 Cheng, Huang, Lu, Wu, Chu, Lee, Huang, & Kuo (2012)進行一項人體實驗，受試者補充藤黃果(HCA)，這是一種有助於脂肪分解的營養補充品，受試者進行腳踏車運動後，立即採取肌肉樣本，結果發現肌肉肝醣濃度顯著性高於控制組。Murase, Haramizu, Shimotoyodome, Tokimitsu, & Hase (2006)小鼠在運動後採取肌肉樣本，結果發現肌肉肝醣顯著性高於控制組。綜合上述的研究，補充八週綠茶萃取物，在運動後恢復期，能夠促使能量偏向於脂肪氧化，節省碳水化合物氧化，以利於葡萄糖吸收和儲存，最後轉化合成為肝醣。. 第四節結論 ‧ 補充八週綠茶萃取物後，經單次 70% VO2 peak 固定式腳踏車運動 60 分鐘後的恢復期，立刻補充碳水化合物飲食，結果發現呼吸交換率降低，游離脂肪酸提高，肌肉肝醣合成提高。. 44.

(53) 參考文獻英文部分: Auvichayapat, P., Prapochanung, M., Tunkamnerdthai, O., & Auvichayapat, N. (2007). Effectiveness of green tea on weight reduction in obese Thais: A randomized, controlled trial. Srinagarind Med J, 22(2), 182-18 Bergstrom, J., Hermansen, L., Hultman, E., & Saltin, B. (1967). Diet, muscle glycogen and physical performance. Acta Physiologica Scandinavica, 71(2), 140-150. Burke, L. M., Collier, G. R., & Hargreaves, M. (1993). Muscle glycogen storage after prolonged exercise: effect of the glycemic index of carbohydrate feedings. Journal of Applied Physiology, 75(2), 1019-1023. Cheng, I.-S., Huang, S.-W., Lu, H.-C., Wu, C.-L., Chu, Y.-C., Lee, S.-D., . . . Kuo, C.-H. (2012). Oral hydroxycitrate supplementation enhances glycogen synthesis in exercised human skeletal muscle. British Journal of Nutrition, Accepted (2011.06. 18). Costill, D., Sherman, W., Fink, W., Maresh, C., Witten, M., & Miller, J. (1981). The role of dietary carbohydrates in muscle glycogen resynthesis after strenuous running. The American journal of clinical nutrition, 34(9), 1831. Costill, D., Coyle, E., Dalsky, G., Evans, W., Fink, W., & Hoopes, D. (1977). Effects. 45.

(54) of elevated plasma FFA and insulin on muscle glycogen usage during exercise. Journal of Applied Physiology, 43(4), 695-699. Coyle. (1999). Muscle glycogen utilization during prolonged strenuous exerc when fed CHO. 61 (1) 165-172. Demarco, H. M., Sucher, K. P., Cisar, C. J., & Butterfield, G. E. (1999). Pre-exercise carbohydrate meals: application of glycemic index. Medicine and Science in Sports and Exercise, 31(1), 164-170. Derave, W., Lund, S., Holman, G. D., Wojtaszewski, J., Pedersen, O., & Richter, E. A. (1999). Contraction-stimulated muscle glucose transport and GLUT-4 surface content are dependent on glycogen content. American Journal of Physiology-Endocrinology And Metabolism, 277(6), E1103-E1110.. Dulloo, A. G., Duret, C., Rohrer, D., Girardier, L., Mensi, N., Fathi, M., Chantre, P., Vandermander, J. (1999). Efficacy of a green tea extract rich in catechin polyphenols and caffeine in increasing 24-h energy expenditure and fat oxidation in humans. Am J Clin Nutr, 70(6), 1040-1045. Diepvens, K., Westerterp, K. R., & Westerterp-Plantenga, M. S. (2007). Obesity and thermogenesis related to the consumption of caffeine, ephedrine, capsaicin, and green tea. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology, 292(1), R77-R85. 46.

(55) Fairchild, T. J., Fletcher, S., Steele, P., Goodman, C., Dawson, B., & Fournier, P. A. (2002). Rapid carbohydrate loading after a short bout of near maximal-intensity exercise. Medicine and Science in Sports and Exercise, 34(6), 980-986. Harada, U., Chikama, A., Saito, S., Takase, H., Nagao, T., Hase, T., & Tokimitsu, I. (2005). Effects of the long-term ingestion of tea catechins on energy expenditure and dietary fat oxidation in healthy subjects. Journal of health science, 51(2), 248-252. Harris, R. C., Edwards, R., Hultman, E., Nordesjö, L., Nylind, B., & Sahlin, K. (1976). The time course of phosphorylcreatine resynthesis during recovery of the quadriceps muscle in man. Pflügers Archiv, 367(2), 137-142. Holloszy, J. (1982). Muscle metabolism during exercise. Archives of Physical Medicine and Rehabilitation, 63(5), 231. Ichinose, T., Nomura, S., Someya, Y., Akimoto, S., Tachiyashiki, K., & Imaizumi, K. (2011). Effect of endurance training supplemented with green tea extract on substrate metabolism during exercise in humans. Scandinavian Journal of Medicine and Science in Sports, 21(4), 598-605. Ivy, J. L. (1991). Muscle glycogen synthesis before and after exercise. Sports medicine (Auckland, NZ), 11(1), 6. 47.

(56) Jentjens, R., & Jeukendrup, A. E. (2003). Determinants of post-exercise glycogen synthesis during short-term recovery. Sports Medicine, 33(2), 117-144. Lu, H., Meng, X., & Yang, C. S. (2003). Enzymology of methylation of tea catechins and inhibition of catechol-O-methyltransferase by (−)-epigallocatechin gallate. Drug metabolism and disposition, 31(5), 572-579. Mahaboob Khan, S., & Kour, G. (2007). Subacute oral toxicity of chlorpyriphos and protective effect of green tea extract. Pesticide Biochemistry and Physiology, 89(2), 118-1 Murase, T., Haramizu, S., Shimotoyodome, A., Nagasawa, A., & Tokimitsu, I. (2005). Green tea extract improves endurance capacity and increases muscle lipid oxidation in mice. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology, 288(3), R708-R715. Murase, T., Haramizu, S., Shimotoyodome, A., Tokimitsu, I., & Hase, T. (2006). Green tea extract improves running endurance in mice by stimulating lipid utilization during exercise. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology, 290(6), R1550-R1556. Nagao, T., Hase, T., & Tokimitsu, I. (2007). A green tea extract high in catechins reduces body fat and cardiovascular risks in humans. Obesity, 15(6), 1473-1483. 48.

(57) Nagao, T., Komine, Y., Soga, S., Meguro, S., Hase, T., Tanaka, Y., & Tokimitsu, I. (2005). Ingestion of a tea rich in catechins leads to a reduction in body fat and malondialdehyde-modified LDL in men. Am J Clin Nutr, 81(1), 122-129. Nielsen, J. N., Derave, W., Kristiansen, S., Ralston, E., Ploug, T., & Richter, E. A. (2001). Glycogen synthase localization and activity in rat skeletal muscle is strongly dependent on glycogen content. The Journal of Physiology, 531(3), 757-769. Price, T., Rothman, D., Taylor, R., Avison, M., Shulman, G., & Shulman, R. (1994). Human muscle glycogen resynthesis after exercise: insulin-dependent and-independent phases. Journal of Applied Physiology, 76(1), 104-111. Romijn, J., Coyle, E., Sidossis, L., Gastaldelli, A., Horowitz, J., Endert, E., & Wolfe, R. (1993). Regulation of endogenous fat and carbohydrate metabolism in relation to exercise intensity and duration. American Journal of Physiology-Endocrinology And Metabolism, 265(3), E380-E391. Spriet, L. L. (2007). Regulation of substrate use during the marathon. Sports Medicine, 37, 4(5), 332-336. Venables, M. C., Hulston, C. J., Cox, H. R., & Jeukendrup, A. E. (2008). Green tea extract ingestion, fat oxidation, and glucose tolerance in healthy humans. Am J Clin Nutr, 87(3), 778-784. 49.

(58) Wojtaszewski, J., & Hansen, B. F. (2000). Insulin signaling and insulin sensitivity after exercise in human skeletal muscle. Diabetes, 49(3), 325. Wu, C. L., Nicholas, C., Williams, C., Took, A., & Hardy, L. (2003). The influence of high-carbohydrate meals with different glycaemic indices on substrate utilisation during subsequent exercise. British Journal of Nutrition, 90(6), 1049-1056. Wu, L. Y., Juan, C. C., Ho, L. T., Hsu, Y. P., & Hwang, L. S. (2004) Effect of green tea supplementation on insulin sensitivity in Sprague-Dawley rats.Journal of Agricultural and Food Chemistry,52(3),643-648.. 50.

(59) 附錄一. 受試者須知. 一、本研究目的：探討持續補充八週的綠茶萃取物增補劑，對於單次運動後人體骨骼肌肉肝醣合成的影響。在人體測量方面，包括身高、體重、身體質量指數以及最大攝氧峰值；肌肉樣本的部分為肌肉肝醣之濃度；血液生化值的部分為血糖、胰島素、游離脂肪酸、甘油。二、受試者必須參加下列兩項實驗設計: ‧ 1. 進行 70%VO2 peak 之運動強度 60 分鐘固定式腳踏車運動。 ‧ 2. 持續補充八週綠茶萃取物，進行 70%VO2 peak 之運動強度 60 分鐘固定式腳踏車運動。三、可能產生的風險 1.每次抽血均使用拋棄式無菌針頭與針筒，從受試者手肘橈骨靜脈抽取8 ml血液進行分析，絕不重複使用，以杜絕感染問題。 2.由具備合格之護士擔任採血人員，可降低其危險性，造成局部淤血現象的機率不大，若發生局部瘀血時，立刻以冰敷處理即可。四、其他配合事項 1.實施最大攝氧峰值測驗時，請著輕便運動服(上衣、短褲)至實驗室報到，測驗前避免從事激烈的運動訓練或體育活動。 2.接受採血前一晚需禁食十二小時（空腹狀態）。 3.實驗期間受試者務必維持平日正常的飲食習慣，不得刻意節食或暴飲暴食。 4.受試者請於約定的時間內，前往實驗室報到接受運動訓練或採血。. 51.

(60) 附錄二. 受試者同意書. 研究題目：補充綠茶萃取物對運動後人體骨骼肌肉肝醣合成之效果指導教授：程一雄博士、呂香珠博士研究生：陳顥文研究單位：國立臺中教育大學體育學系碩士班聯絡電話：（手機）0989-055516 為了保護受試者的健康與權利，研究者有責任將實驗過程以及可能發生的危險說明清楚，並隨時回答受試者所提出的問題，請受試者安心加入實驗。受試者若臨時改變意願無法參加實驗，或身體出現不適情形時，可隨時停止或退出實驗不受任何限制，但務必事先通知研究者。參與本實驗之受試者，必須瞭解流程與同意下列事項：一、受試者必須詳細閱讀「受試者須知」，以瞭解整個實驗目的、過程、受試者的權益以及相關要求配合的事項（如附錄二）。二、受試者必須填寫「受試者同意書」（如附錄三），以確定願意全程參與本實驗。三、受試者必須參加實驗前之說明會，以瞭解實驗過程、注意事項及配合事宜。四、實驗期間受試者必須做好生活習慣的管理。五、實驗期間受試者必須控制每日的飲食習慣。六、實驗期間受試者要避免額外激烈的運動訓練。七、實驗期間受試者不得服用任何會影響實驗結果之藥物或含咖啡因的飲料。如您願意參與本實驗，請在同意書上之姓名欄內簽名，以及填寫聯絡資料，表示同意並願意遵守「受試者須知」及同意書內所列之規定。受試者簽名:. （簽名）. 聯絡電話：中華民國 52. 手機：年. 月. 日.

(61) 附錄三. 混合餐點營養成分表. 體重營養成分分析. 70.0 (公斤) g/kg 飲食內容. 總重量. CHO. CHO. (g/100g). (g/serving). 蛋白質. 脂肪. 醣類. 熱量. （g）. （g）. （g）. （Kcal）. body （g） wt. 玉米片. 0.86. 60.2. 84.0. 50.6. 4.2. 0.5. 50.6. 223.5. 低脂鮮奶. 3.50. 245.0. 5.1. 12.6. 7.1. 1.2. 12.6. 89.8. 白土司. 1.15. 80.5. 51.0. 41.0. 8.3. 3.7. 41.0. 230.5. 草莓果醬. 0.29. 20.3. 65.6. 13.3. 0.1. 0.1. 13.3. 54.6. 葡萄糖水. 1.80. 126.0. 17.9. 22.6. 0.0. 0.0. 22.6. 90.2. 水. 8.00. 560.0. 140.1. 0.0. 0.0. 0.0. 0.0. 19.7. 5.5. 140.1. 688.5. 總量. 1092.0. 註: 附錄四混合餐點營養成分表以體重 70 公斤為例。. 53.

(62) 附錄四. 血液胰島素檢測. 1、將稀釋 10 倍的 HRP 緩衝液(Wash Buffer)以 450 ml 的去離子水混合。 2、加入 300 μl 的緩衝液到分析盤(Assay Plate)，室溫下放置 5 分鐘。以紙巾輕拍吸取殘餘的 Wash Buffer，避免污染 Assay Plate。 3、將 20 μl 的 Assay Buffer 加入空白和樣本的 Assay Plate 中。 4、將 20 μl 的 Matrix Solution 加入空白、標準液的 Assay Plate 中。 5、在標準液、樣本的 Assay Plate 中分別加入 20 μl 的標準液和樣本血清。 6、將 20 μl 的 Detection Antibody 加入空白、標準液、樣本的 Assay Plate 中。 7、使用有黏著性的 Sealer 密封 Assay Plate，輕輕搖動並在室溫下放置 1 小時。 8、使用 300 μl 的 Wash Buffer 清洗 3 次。 9、將 100 μl 的 Enzyme Solution 加入空白、標準液、樣本 Assay Plate 中。 10、使用有黏著性的 Sealer 密封 Assay Plate，輕輕搖動並在室溫下放置 30 分鐘。 11、以 300 μl 的 Wash Buffer 清洗 5 次。 12、將 100 μl 的 Substrate 加入空白、標準液、樣本的 Assay Plate 中。 13、使用有黏著性的 Sealer 密封 Assay Plate，輕輕搖動並在室溫下放置 8-10 分鐘。 14、將 100 μl 的 Stop Solution 加入空白、標準液、樣本的 Assay Plate 中。 15、將 Assay Plate 均勻搖動，置入分光光譜儀。 16、使用波長 450nm 測定，以標準液數值計算回歸公式，推算胰島素指數。 54.

(63) 附錄五. 肌肉穿刺步驟. 1、在人體右側大腿找到股外側肌肉(vastus lateralis)，並做記號。 2、於記號處使用優碘與酒精各消毒三次。 3、鋪蓋已殺菌之洞巾。 4、注射 1-2 毫升局部麻醉藥 (2% Lignocaine)，內含血管收縮素防止出血。 5、使用 14 號肌肉穿刺針取得股外側肌肉樣本，取樣過程非常迅速，用一次即丟棄。 6、取出穿刺針後，局部再用優碘消毒，並用紗布壓迫止血，受試者休息 30 分鐘防止出血。若還有疼痛，再加以冰敷。 7、為防感染，受試者 2 天內禁止傷口碰水，並且每天更換紗布。 8、為防傷口再出血，三天內禁止運動，一星期內禁止激烈運動。. 55.

(64) 附錄六. 肌肉肝醣分析步驟. 1、活體手術分離肌肉放於液態氮內(絕對需防止回溫，避免肝醣裂解)，進行肌肉秤重並紀錄。 2、在冰上，加入 500μl 1N KOH，再加入秤過的肌肉樣本於試管內，將試管用膜封裝。 3、將試管置入水浴槽內 30 分鐘，溫度控制於 70-80℃，持續 vortex，直到樣本完全溶解。 4、取試管內肌肉溶液 100μl 置於 label 好的 1.5ml 小管中。 5、室溫下加入 250μl 的 0.3M sodium acetate buffer，pH＝4.8，vortex 均勻。 6、立即調配冰醋酸水溶液 (glacial acetic acid : ddH2O = 1 : 1) 置於小管中，小管需用錫箔紙包起避光；加入 10μl 冰醋酸水溶液於肌肉樣本溶液中，vortex。 7、加入 250μl Amyloglucosidase (Amyloglucosidase in 0.3M sodium acetate buffer, 10mg/ml, pH＝4.8)，vortex。 8、室溫下靜置至少 12 小時。此時可先 label 好隔天要用的小管 (2 ml)。 9、隔天，加入 25μl 的 1N NaOH，vortex。 10、配置校正液 (Blank)：150μl ddH2O 序列稀釋標準液 (standard)，分裝 2 小管(作 2 重複) 將 10μl, 50mg/dl 葡萄糖溶液，加入 140μl ddH2O 中；將 10μl, 100mg/dl 葡萄糖溶液，加入 140μl ddH2O 中；將 10μl, 200mg/dl 葡萄糖溶液，加入 140μl ddH2O 中；將 10μl, 400mg/dl 葡萄糖溶液，加入 140μl ddH2O 中。 (配完 standard 後，可先看吸光值，數值應從 400mg/dl 那管逐一減半) 56.

(65) 11、肌肉樣本溶液取 150μl 各裝成 2 小管。 12、加入 1.5ml 呈色劑 (glucose color reagent，Trinder)，注意時間間隔，約每 30 秒加一管，才可控制每管的反應時間相同，vortex 均勻。 13、室溫下靜置 21 分鐘，第 21 分鐘使用分光光度計 Beckman DU 650 UV-Spectrophotometer (Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA) 檢測，波長定為 505nm。 14、輸出資料，進行資料分析。. 57.

(66)