標準總號4090類號N6097食品中黃麴毒素檢驗 法，具有檢驗過程快速、操作方便、容易、
安全、靈敏度高等特性(1~4)。由於上述方法原 應用於花生、玉米等食品，應用於中藥材因 藥材種類不同，其基質可能會影響親和性管 柱萃取效果及干擾HPLC分析結果，本試驗除 探討應用該法於各種藥材之可行性外並調查 AF於中藥材中污染情形，本調查選擇含豐富 澱粉及醣類成分之黃耆、薏苡芢、延胡索、
蓮子、山藥等五種藥材作為標的物，所得結 果冀供未來研訂相關中藥AF之限量等參考。
材料與方法
一、材料：
ᨧ 檢體來源：自臺灣地區北、中、南各地 中藥行或商店購買黃耆(Astragli Radix)、
前 言
臺 灣 為 高 溫 與 潮 濕 之 氣 候 ， 市 售 中 藥 材販售前均經過長時間之儲存，植物性中藥 材常含多量之碳水化物與營養成分，可作為 微生物生長與產毒之受質，因此若藥材儲存 不 當 ， 極 易 造 成 真 菌 滋 長 而 產 生 毒 素 。 真 菌毒素中毒性最強且有致癌性者為黃麴毒素 (aflatoxin，以下簡稱AF)，主要由麴菌屬中之 Aspergillus flavus、Aspergillus parasiticus等所 產生，此毒素之衍生物約20餘種，其中以AF B1、B2、G1、G2最常檢出，而上述四種AF中 又以AF B1毒性最強。
至今發展出之AF檢驗法有薄層層析法 (TLC)、高效能液相層析法(HPLC)、質譜儀 氣相層析法(GC/MS)、免疫親合性管柱法及 酵素結合法(ELISA)等。本試驗採用中國國家
中藥材中黃麴毒素污染之調查
秦 玲 張簡懿芬 陳榮斌 黃成禹 林哲輝
第三組摘 要
為了解黃麴毒素於中藥材中污染情形，本調查自九十一年至九十三年間在臺灣各 地區中藥店，隨機價購黃耆(Astragli Radix)及薏苡仁(Coicis Semen)各100件，延胡索 (Corydalidis Rhizoma)、蓮子（Nelumbinis Semen）及山藥(Batatatis Rhizoma)各50件，
應用食品中黃麴毒素檢驗法檢測黃麴毒素，結果於9件(9%)黃耆中檢出，污染範圍為 4.5~74.5 ppb；於11件(11%)薏苡仁中檢出，污染範圍為1.3~13.0 ppb；於3件(6%)延胡索 中檢出，污染範圍為3.0~18.1 ppb；於1件(2%)蓮子中檢出，該件污染量為62.3ppb；而 山藥則均未檢出。
關鍵字：黃麴毒素、高效液相層析法、黃耆、薏苡芢、延胡索、蓮子、山藥
薏苡仁(Coicis Semen)各100件，延胡索 (Corydalidis Rhizoma)、蓮子(Nelumbinis Semen)、山藥(Batatatis Rhizoma)各50 件。
ᨨ 藥品與試藥：
1.標準品：Aflatoxin B1、B2、G1、G2
Mix Kit (購自SUPELCO公司，美國) 2.溶劑：甲醇(HPLC級；購自Sigma-
Aldrich公司，德國)
3.藥品：次氯酸納(試藥級；購自Sigma- Aldrich 公司，德國)，氯化鈉(試藥 級；購自FSA公司，英國)，Iodine顯 色劑(試藥級；購自VICAM公司，美 國)
ᨩ 器材及器具：
1.親合性管柱：採用美國VICAM公司之 AflaTest®P
2.震 盪 機 ： 採 用 日 本 I WA K I 公 司 之 IWAKI KM SHAKER
3.粉碎機
二、儀器裝置：.高效液相層析儀
ᨧ 溶 媒 輸 送 系 統 ： S h i m a d z u L C - 6 A D Liquid Chromatography
ᨨ 後置反應溶媒輸送系統：Waters Reagent Pump
ᨩ 檢測器：Jasco FP-920 Fluorescence Detector
ᨪ 自動注射裝置：Waters 717 Plus Auto Sampler
三、實驗方法：
ᨧ 檢體前處理方法(5,6)：
25 g已磨碎之檢體+ 100 mL 80% MeOH + 5 g NaCl
↓ 震盪15分鐘
↓ 用Advantec 2號濾紙做初過濾
↓ 取過濾液10 mL
↓ 加蒸餾水定容至50 mL
↓ 用Advantec玻璃纖維濾紙細過濾
↓ 取 濾 液 1 0 m L 以 1 滴 / 秒 之 流 速 通 過 Afla-Test affinity column
↓ 取 1 0 m L 純 水 以 2 滴 / 秒 之 流 速 通 過 column(重複二次)
↓ 以1 mL HPLC 級 MeOH洗出黃麴毒素
↓ 收集洗出液加1 mL純水 HPLC進行定量 ᨨ 高效液相層析法條件：
(1)層析管：Cosmosil 5C AR-II(4.6×250 mm)
(2)移動相溶液：甲醇：水(45:55)
(3)螢 光 偵 測 波 長 ： 激 發 光 源 波 長 3 6 0 nm，發射光源波長440 nm
(4)流速：1.0 mL/min ᨩ 層析後碘反應：
(1)碘溶液配製：取碘0.2 g先溶於40 mL 甲醇中後，再加水至360 mL，用0.45 Mm濾膜過濾二次，於超音波震盪至 無氣泡為止。
(2)溫度控制：70 ˚C (3)流速：0.3 mL/min
ᨪ 黃麴毒素於液相層析儀之儀器最低檢測 濃度：
將AF B1、B2、G1、G2標準品，作10倍濃 度梯度稀釋後分別注入HPLC，選擇以訊 號雜訊比不小於3時之最低濃度，作為最 低檢測濃度。
ᨫ 標準曲線之製作：
取AF原液0.4 mL(B1：400 ng、B2：120 ng、G1：400 ng、G2：120 ng)溶於50%甲 醇10 mL後，用50%甲醇稀釋調配成一系 列濃度為: B1及G1(40、20、10、5.0、1.0 ng/mL)，B2及G2(12、6、3、1.5 ng/mL) 分別注入於高效液相層析儀分析，以各
標準品濃度為X軸，以各標準品波峰面 積為Y軸作圖並求出標準曲線之迴歸方 程式(y=mx+b)及相關係數(r)。
ᨬ 添加回收率試驗：
準備不含AF之黃耆、薏苡芢、延胡索、
蓮子、山藥藥材粉末各四份，
每份25 g，其中一份供作空白對照組，
其餘3份分別加入不同濃度之對照標準品 溶液後，使其濃度分別為B1、B2、G1、 G2(20、6、20、6 ppb)，(10、3、10、3 ppb)及(5、1.5、5、1.5 ppb) 依三.之(一) 檢體前處理方法步驟萃取，再以HPLC分 析，將所得之AF量除以添加量即為添加 回收率。
結 果
一、檢體萃取方法：
五種藥材經過親和性管柱萃取處理後，
均可把大部份雜質成份去除，不會影響AF在 HPLC的分析。如圖一及圖二所示：
二、黃麴毒素之最低檢測濃渡：
以混合之AF B1、B2、G1、G2標準品，作 10倍濃度梯度稀釋，分別注入高效液相層析 儀，然後觀察訊號雜訊比，結果AF B1、B2、 G1、G2其最低檢測濃度分別為0.1ng/ml、0.1 ng/mL、0.75 ng/mL、1.0 ng/mL。
三、黃麴毒素之標準曲線：
本實驗配製5種濃度之AF B1、B2、G1、 G2標準溶液，依實驗方法(二)、(三)之層析條 件分析，並求得標準曲線之迴歸方程式及相 關係數(r)如下，結果顯示在本試驗之濃度範 圍線性關係良好。
AF B1：Y=39.597X-10.435
r =0.9984 X= 40 ~ 1.0 ng/mL AF B2：Y=68.359X-0.5217
r =0.9956 X= 12 ~ 1.5 ng/mL AF G1：Y=17.122X-3.7826
r =0.9920 X= 40 ~ 1.0 ng/mL AF G2：Y=27.496X+10.087
r =0.9873 X= 12 ~ 1.5 ng/mL 四、黃麴毒素B1、B2、G1、G2之添加回收率：
各藥材磨粉添加已知濃度之AF標準品
圖一、黃麴毒素標準品G2G1B2B1 圖二、藥材檢體經過管柱處理
後，依實驗方法三.之(一)步驟操作並求得回 收率，結果詳如表一。黃耆藥材中AF B1、 B2、G1、G2之回收率(%)分別為69.4、73.9、
84.9及66.5，薏苡仁藥材中AF B1、B2、G1、 G2 之回收率(%)分別為79.5、93.0、82.5及 75.2，延胡索藥材中AF B1、B2、G1之回收率 (%)分別為86.2、78.8及79.7，蓮子藥材中AF B1、B2、G1、G2 之回收率(%)分別為84.3、
73.3、80.2及62.7，山藥藥材中AF B1、B2、 G1、G2之回收率(%)分別為83.8、75.6、54.0 及65.1。
五、藥材中之黃麴毒素含量：
黃耆及薏苡仁藥材各100件，延胡索、蓮 子及山藥藥材各50件磨粉後取一部份測其水 分，另一部份以親和性管柱AflaTest® P萃取 後，再以HPLC定量並以回收率校正後所得，
結果如表二∼五所示。
1.黃 耆 1 0 0 件 檢 品 中 ， 檢 出 A F 者 計 9 件 ( 9 % ) ， 其 含 水 量 測 定 結 果 分 佈 於 13.4~21.0%，9件均有檢出B1，檢測值為 4.5~64.3 ppb；檢出B2者2件，檢測值為 4.3及9.7ppb；檢出G1者3件，檢測值為 3.8~7.5 ppb；檢出G2者1件，檢測值為2.1 ppb；總AF 則分佈於4.5~74.5 ppb。
2.薏 苡 仁 1 0 0 件 檢 品 中 ， 檢 出 A F 者 計 1 1 件 ( 1 1 % ) ， 其 含 水 量 測 定 結 果 分 佈 於 10.4~12.6%，檢出B1者計10件，檢測值 為1.3~11.8 ppb；檢出B2者1件，檢測值 為1.2 ppb；檢出G1者1件，檢測值為1.3 ppb；總AF則分佈於1.3~13.0 ppb。
3.延 胡 索 5 0 件 檢 品 中 ， 檢 出 A F 者 3 件 ( 6 % )， 其 含 水 量 測 定 結 果 分 佈 於 10.4~12.0%，檢出B1者計3件，檢出值為 3.0~13.3 ppb，檢出B2者2件，檢出值為 3.4及10.0 ppb，總AF則分佈於3.0~18.1
ppb。
4.蓮子50件檢品中，檢出AF者1件(2%)，
其含水量測定結果為10.7%，B1及B2檢出 值分別為51.1 ppb及11.2 ppb，總AF則為 62.3 ppb。
5.山藥50件檢品則均未檢出AF。
討 論
當穀物水分含量超過13~14%，相對溼度
（RH）80~85%時極適於黴菌之增殖，由於 AF具有極高的熱安定性，不易被一般加工方 法所破壞或去除，且其毒性經動物試驗結果 顯示在極低的劑量下，即足以導致癌症的產 生，故防治此類真菌對於中藥材的汙染，已 成為目前藥材品質管制之重要課題。若根據 我國花生、玉米之總AF限量標準以15ppb為限 量時，350件中有5件超過容許之限量，而以 其他食品之總AF限量標準10ppb為限量時，
350件中則有7件超過容許之限量。分析此次 檢驗結果，350件藥材其含水量介於9~22%之 間，而檢出黃麴毒素24件藥材其含水量則介 於10.4~21.0%之間，含水量似乎與藥材受到 AF污染無直接關係。但因有些藥材可能在採 收時即已污染麴菌，乾燥過程如不夠迅速、
確實，藥材即可能發黴並含AF。此外也與藥 材在運送過程的防護措施與儲存環境的好壞 有間接關係，因此中藥材應儘可能貯存在低 溫、乾燥處，適當的貯存、運輸，受菌感染 的機率降低，便能避免危害人類、動物的健 康。
H P L C分 析 A F 由 於 須 進 行 碘 衍 生 化 反 應，反應液配製及儀器平衡較費時，且反應 液如清洗不完全，管路容易阻塞，造成實驗 之不便。又因中藥材成份複雜，會因藥材之 種 類 不 同 而 造 成 回 收 率 及 再 現 性 不 佳 之 情 形 ， 這 些 均 待 進 一 步 探 討 。 根 據 文 獻 記 載
(7-8)
，HPLC之碘反應尚可改以Photochemical
表一、各藥材中黃麴毒素之添加回收率：
Alfatoxin Spike Conc.
(ppb)
Recovery (%)
黃耆 薏苡仁 延胡索 蓮子 山藥
B1 20 52.3 75.2 81.6 93.0 82.5
10 61.5 76.2 95.6 90.4 79.5
5 94.5 87.1 81.3 69.5 89.4
Avg. 69.4 79.5 86.2 84.3 83.8
B2 6 54.2 87.3 86.4 74.4 70.9
3 71.6 98.4 76.9 88.0 72.5
1.5 95.8 93.2 73.2 57.4 83.3
Avg. 73.9 93.0 78.8 73.3 75.6
G1 20 61.3 73.7 80.1 88.1 40.4
10 84.6 80.9 81.7 80.6 67.5
5 108.8 92.9 77.4 72.0 -
Avg. 84.9 82.5 79.7 80.2 54.0
G2 6 43.3 73.2 - 62.0 58.2
3 68.7 81.2 - 68.5 48.3
1.5 87.5 71.3 - 57.5 88.7
Avg. 66.5 75.2 - 62.7 65.1
表二、檢出黃麴毒素黃耆之含水量及黃麴毒素污染量(ppb)
檢品 含水量(%) 黃麴毒素含量(ppb)
B1 B2 G1 G2 B1+ B2+ G1+ G2
1 14.2 7.2 - - - 7.2
2 14.5 6.8 - 4.2 - 11.0
3 13.5 9.7 - - - 9.7
4 14.2 64.3 4.3 3.8 2.1 74.5
5 21.0 37.9 9.7 7.5 - 55.1
6 14.5 4.5 - - - 4.5
7 14.2 5.3 - - - 5.3
8 13.4 4.6 - - - 4.6
9 14.5 9.7 - - 9.7
表三、檢出黃麴毒素薏芢仁之含水量及黃麴毒素污染量(ppb)
檢品 含水量(%) 黃麴毒素含量(ppb)
B1 B2 G1 G2 B1+ B2+ G1+ G2
1 10.5 1.4 - - - 1.4
2 10.6 2.0 - - - 2.0
3 12.0 11.8 1.2 - - 13.0
4 12.0 3.3 - - - 3.3
5 12.6 3.5 - - - 3.5
6 11.6 2.1 - - - 2.1
7 11.8 3.1 - - - 3.1
8 11.3 5.3 - - - 5.3
9 11.2 4.2 - - - 4.2
10 11.0 1.3 - - - 1.3
11 10.4 - - 1.3 - 1.3
表四、檢出黃麴毒素延胡索及蓮子之含水量及黃麴毒素污染量(ppb)
檢品 含水量(%) 黃麴毒素含量(ppb)
延胡索 B1 B2 G1 G2 B1+ B2+ G1+ G2
1 10.4 3.0 - - - 3.0
2 12.0 13.3 3.4 - - 16.7
3 11.8 8.1 10.0 - - 18.1
蓮子 10.7 51.1 11.2 - - 62.3
表五、檢驗中藥材黃麴毒素統計
年度 藥材名稱 檢出黃麴毒素件數/總件數(%) 超出10ppb限量件數/總件數(%)
91 黃耆 9/100 ( 9 ) 3/100 ( 3 )
92 薏苡仁 11/100 ( 11 ) 1/100 ( 1 )
93 延胡索 3/50 ( 6 ) 2/50 ( 4 )
蓮子 1/50 ( 2 ) 1/50 ( 2 )
山藥 0/50 ( 0 ) 0/50 ( 0 )
Reactor偵測或以LC/MS代替HPLC，均是未來 檢測中藥材中AF可嘗試之方向。
參考文獻
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7.
8.
$Q,QYHVWLJDWLRQRQ$ÀDWR[LQ&RQWDPLQDWLRQ in Chinese Herb
LING CHIN, I-FEN CHANG-CHIEN, RONG- BEEN CHENG, CHENG-YU HUANG AND JER-HUEI LIN
Pharmacognosy Division
Abstract
In this survey, 350 samples (100 samples of Astragli Radix and Coicis Semen each, and 50 samples of Corydalidis Rhizoma, Nelumbinis Semen and Batatatis Rhizoma each ) were purchased from 2002 to 2004, in order to investigate the aflatoxin (AF) contamination in Chinese herb. The samples were tested by the Chinese National Standard Method of testing aflatoxin in food.
Aflatoxin was detected in 9 samples (9%) of Astragli Radix, content within 4.5-74.5 ppb; 11 samples (11%) of Coicis Semen, content within 1.3-13.0 ppb; 3 samples (6%) of Corydalidis Rhizoma, content within 3.0-18.1 ppb; and 1 samples (2%) of Nelumbinis Semen,the content of 62.3 ppb. No Batatatis Rhizoma samples was detected to contain aflatoxin.
Key words: Aflatoxin, HPLC, Coicis Semen, Astragli Radix, Corydalidis Rhizoma, Nelumbinis Semen, Batatatis Rhizoma
