苦瓜萎凋病生物防治試驗

1.苦瓜萎凋病病原分離與病原性測試

自本場苦瓜試驗田採回黃化萎凋植株，切取褐化維管束置於 Nash-PCN 培養 基，待長出分生胞子後，以單胞移殖於 PDA 斜面培養基上純化保存，菌株代碼 為 F033。試驗時將 PDA 斜面培養基培養七天之病原菌洗下，製成病原菌胞子懸

浮液，將苦瓜(月珍)催芽後接種，另以無接種病原菌者為對照處理，測定其病原 性。

2.拮抗微生物的篩選與有益微生物量產試驗

以對峙培養的方法初篩拮抗微生物，於 28℃恆溫培養箱中對峙培養五天後，

量取抑制圈(inhibition zone) 大小及病原菌生長直徑，觀察萎凋菌絲生長受抑制之 情形。篩選出之拮抗菌以 20ml PDB 純化培養 5 株拮抗微生物(A-01、B-02、C-03、

D-04、E-05)菌液，培養 7 日後，定量為總菌量為 10⁸ cfu/ml。

3. 16S rRNA 與 gyrB 區間核酸增量回收解序與比對

利用電泳分析增殖後之 DNA 產物後，以核酸自動定序儀進行核苷酸定序。

以 NCBI 之 BLAST 之程式進行線上基因庫（GenBank）之查詢與比對。

4.溫室防治試驗

先澆灌再接種萎凋病，自苦瓜月珍幼苗出土後第 2 天起以 5 株拮抗微生物菌 液(10⁸cfu/ml)澆灌，每週 1 次，每株澆灌 5ml，每 1 菌株處理 10 株，以不澆灌為 對照。3-4 週大植株，以剪根接種法，接種苦瓜萎凋病 F033。接種後持續每週澆 灌一次拮抗微生物菌液。每週紀錄植株發病情形。

四、結果與討論 4.1 設施蜂箱降溫對蜂群活力及授粉之影響

1.露天無降溫處理對蜂箱內溫濕度及蜂群活力之影響：

置於露天之蜂箱內溫濕度變化、蜜蜂離返巢數量及蜂群活力之變化，與苦瓜 設施內呈現顯著之差異。從溫度之變化觀之，露天之蜂箱內從 04:00 之 25.2℃逐 漸上升，至 14:00 達到最高溫(36.7℃)；而設施內之蜂箱溫度則從 04:00 之 27℃逐 漸上升，至 12:00 達最高溫(37.7℃)，接著逐漸降溫(圖 1)，從濕度之變化觀之，

露天之蜂箱內從 4:00 之 83.5%逐漸下降，之後再逐漸上升至 19:00 的 79.4%；而 設施內之蜂箱濕度則從 04:00 之 85.5%逐漸下降，至 12:00 達最低濕(62.5%)，接 著逐漸上升(圖 2)，由此可知，露天與設施內蜂箱溫濕度變化趨勢近似，但下午 時露天蜂箱之溫度略高於設施內，推測露天下蜂箱內濕度散失快，也可能與苦瓜 生長需水量大，因此灌溉頻率高，設施內濕度較高有關。露天環境下，蜜蜂飛行 不受阻，且花粉或蜜源植物充足，蜜蜂離巢頻率高，一天當中，天亮後，蜂群大 量離巢採集，隨著時間漸增，離巢數量增加，並在 11:00 出現一個離巢高蜂(4,761 隻/小時)，之後在逐漸下降；而在設施內，則有兩次蜜蜂離巢高蜂，分別在 06:00(3,265 隻/小時)及 15:00(2,949 隻/小時)(圖 3)，上午高峰與蜜蜂離巢採集有關，

下午因苦瓜花朵已凋謝，故此時之離巢高峰推測與例行外出訪花或停棲於葉片陰 涼處有關。在試驗期間，露天環境下之蜂箱重量增加(由 1,920 公克至 2,060 公克)，

而設施內之蜂箱重量則下降(由 2,005 公克下降至 1,840 公克)(圖 4)，推估與蜂箱

內儲糧

3.蜂箱降溫