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市售五加皮藥材之鑑別

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Academic year: 2022

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(1)

柳皂苷K、H1、E(Glycoside K、H1、E)(7,9,11), 有袪風溼、壯筋骨、利小便等作用,主治風溼筋 骨疼痛、水腫尿少,有強心、抗炎等作用(9,11,13)地骨皮其基原為茄科(Solanaceae)植物L. chi-

nense

(1-6,8-11,13-18) 之乾燥根皮,在『神農本草經』中 列為常用中藥,別名杞根、枸杞根皮、地骨、苦 杞或甜菜芽(6,9-11,17),主要成分為亞麻酸(Linolenic acid)、甜菜鹹(Betaine)等(9-11,16-18),有涼血、

清肺熱等作用(5,6,9)。由此可知五加皮與其誤用品 之成分及作用差異頗大,不宜誤用。為建立五加 皮及其誤用品之鑑別法,本研究收集五加皮類對 照藥材,利用生藥組織學法、薄層層析法與基因 定序法進行比較鑑別,建立此類藥材之鑑別方法 外,同時進行市售品之基原鑑定,以了解台灣此 類藥材使用之情形。

材料與方法

一、材料

前 言

五加皮為較常用中藥之一,又名豺漆、五花 或追風使等(1),『神農本草經』列為上品藥,其 基原為五加科植物細柱五加(1~14)之乾燥根皮。然 因各地採用多種五加科五加屬或其他科屬之植物 作為五加皮,以致市售五加皮基原混雜,除正品 細柱五加之外,依據文獻記載 (5-12),尚有紅毛五 加、香加皮、地骨皮等誤用品。五加皮及其誤用 藥材成分差異頗大,五加皮主要成分為紫式丁香 苷(Syringin)、刺五加苷B1(Eleutheroside B1)

(7,9-13)等,有袪風除濕、強筋壯骨等功效,主治風

濕關節痛、腰腿酸痛、半身不遂、跌打損傷、水 腫等症,有抗炎、抗疲勞等作用(5-7,9-14)。其常見誤 用藥材為香加皮及地骨皮,香加皮基原為蘿藦科

(Asclepiadaceae)植物P. sepium(2,3,7-9,11,13) 之乾燥 根皮,在『神農本草經』中列為少常用中藥,又 稱北五加皮、杠柳皮、羊桃或羊奶藤,主要成分 為強心杠柳毒苷(Periplocin即Glycoside G)和杠

市售五加皮藥材之鑑別

徐雅慧 溫彩玉 劉芳淑 羅吉方 林哲輝

第三組

摘 要

五加皮(Acanthopanacis Cortex)為常用中藥之一,『神農本草經』列為上品,其基原 為五加科(Araliaceae)植物細柱五加Acanthopanax gracilistylus W. W. Smith的乾燥根皮。

雖藥典以細柱五加為正品入藥,但根據典藉記載,歷代以來使用混亂,各地採用基原不 一,尚有紅毛五加Acanthopanax giraldii Harms、香加皮Periplec sepium Bge.、地骨皮Lycium

chinense Mill.等當五加皮使用。然五加皮與誤用品之成分功效不同,而其中誤用品香加皮

還具毒性成分杠柳毒苷(Periplocin)。有鑑於此,本研究為了解市售五加皮藥材之使用情 形,搜集五加皮類對照藥材,由生藥組織學即性狀特徵、組織鏡檢與薄層層析法,配合本 局開發之Nested PCR與DNA定序方法予以探討,以建立鑑別方法,並進行市售43件檢體之 基原鑑定。結果顯示,43件檢體中,9件(20.9%)為五加皮,32件(74.4%)為香加皮,2 件(4.7%)為紅毛五加,市售五加皮誤用情形嚴重,宜應導正。

關鍵詞:五加皮、紅毛五加、香加皮、地骨皮、鑑別

(2)

㈠儀器與器具

1. 顯微鏡(Olympus;BX51)附影像處理 裝置(Evolution /Qlmaging Digital Camera kit)

2. 旋轉式切片機(AO820 Rotary microtome)

3. 減壓真空烘箱(Forma Scientific;6512 Vaccum Oven)

4. 真空馬達(Buchi Labortoriums-Technik AG CH-9230 FLAWIL/SCHWEIZ)

5. 加熱板(CAMAG Temp 20℃∼220℃、

Corning Hot Plate, U.S.A.)

6. 烘箱、固定瓶、軟木塞、超音波振盪器、

展開槽

7. 薄層層析板(E. Merck;Silica gel 60 F254, 20 x 20 cm)

8. TLC照像裝置(Gel Catcher)附數位照相 機(Canon G1)

㈡試藥

1. 一般化學藥品:氫氧化鉀(Merck)、異 丁醇(Kanto)、二甲苯(Lab-Scan)、

絕對酒精(Riedel deHaen)、Safranin

(Fluka)、Fast green(Wako)、Canada Balsam(E. Merck)、醋酸(Alps)、過氧 化氫(Santoku)、香莢蘭醛(Merck)、

硫酸(和光)均為試藥級。甲醇(Lab- Scan)、正丁醇(Lab-Scan)為HPLC級。

2. FAA溶液:取Formalin 5 mL與醋酸5 mL加 之70% 乙醇溶液90 mL,混合後即得。

3. 對照標準品eleutheroside B1(Chroma- Dex)。

㈢檢體

1. 蒐集五加皮、紅毛五加、香加皮及地骨皮 等對照藥材,並經鑑定確認其基原,作為 本實驗比對鑑別之用。

2. 本計畫分別自中藥廠價購五加皮檢體16 件,北區中藥房價購24件,大陸地區價購3 件,共計43件檢體。

3. 五加皮製劑2件,分別為五加皮單方製劑與 五皮飲濃縮製劑。

二、方法:

㈠外觀性狀檢查(3)

檢視檢體外觀形狀、大小、顏色、折斷面及 氣味。

㈡組織切片(19,20)

檢體先以5%氫氧化鉀溶液或FAA溶液軟化,

再依埋蠟製片法(Paraffin Method)依序經固 定、脫水、滲蠟、埋蠟、切片、張貼切片、

脫蠟後,再以safranin 和fast-green進行二重染 色,後以顯微鏡檢視。

㈢解離法(19,20)

將檢體置於裝有30%過氧化氫:水:冰醋酸

(1:4:5,v/v)混合液之固定瓶內蓋緊,

放置於約50℃烘箱內,解離至檢體為半透明 狀或略帶白色,以水沖洗三次,每次間隔約 兩小時,用探針挑出已解離之材料,置於載 玻片上,以顯微鏡檢視。

㈣薄層層析法:

1. 標準品溶液配製:

取eleutheroside B1 1mg/mL甲醇溶液作對照 標準品溶液。

2. 檢液配製:

⑴ 取五加皮、紅毛五加、香加皮及地骨皮 等生藥粉末各約5 g,加入甲醇20 mL,

以超音波震盪1小時,過濾,濃縮後定容 至2 mL,供作檢液。

⑵ 取製劑粉末各約5 g,加入甲醇20 mL,

以超音波震盪1小時,過濾,濃縮後定容 至2 mL,供作檢液。

3. 層析:

將檢液及標準品液點注於層析板,以正丁 醇:水:醋酸(7:2:1,v/v)混合液展 開,展開後風乾,再噴Vanillin/H2SO4 spray reagent,105℃加熱2分鐘後,於U.V. 366 nm及可見光下檢視。

結果與討論

五加皮、紅毛五加、香加皮及地骨皮等對照 藥材,利用性狀特徵、組織鏡檢、粉末鑑別與

(3)

TLC方法建立其鑑別要點,再依據建立之鑑別要 點進行市售品之基原鑑定。本計畫除利用傳統 生藥學方法外,另配合基因定序之方法(21)進行確 認。茲將各方法之結果描述如下:

一、外觀性狀

㈠五加皮:(圖1.1)

本品呈不規則捲筒狀,厚約0.2 cm。外表灰 褐色,有稍扭曲的縱皺紋及橫長皮孔;內表 面淡黃色或灰黃色,有細縱紋。體輕,質 脆,易折斷,斷面不整齊,灰白色。氣微 香,味微辣而苦。

㈡紅毛五加:(圖1.2)

本品呈細長筒狀,長短不一。外表面深棕

A B

C

1.1 五加皮

A:外觀 B:內表面 C:橫切面

A B

C

1.2 紅毛五加

A:外觀 B:內表面 C:橫切面

(4)

色,密被褐色或淡黃棕色毛刺,長2~5 mm;

內表面深褐色,光滑。質脆,易折斷。

㈢香加皮:(圖1.3)

本品呈捲筒狀、槽狀,或不規則的塊片狀。

表面灰棕色或黃棕色,栓皮鬆軟常呈鱗片 狀,易剝落;內表面淡黃色或淡棕褐色,較 平滑,有細縱紋。體輕,質脆,易折斷,斷

面不整齊,黃白色。具有特異濃郁香氣,味 苦。

㈣地骨皮:(圖1.4)

本品呈管狀或槽狀,有時呈雙管狀或不規則 的卷片。表面灰棕色至黃棕色,粗糙,栓皮 疏鬆,易成片狀剝落,有不規則的縱裂紋;

內表面黃白色或灰黃色,較平坦,有時可見

A B

C

1.3 香加皮

A:外觀 B:內表面 C:橫切面

A B

C

1.4 地骨皮

A:外觀 B:內表面 C:橫切面

(5)

棕色斑點。體輕,質脆,易折斷,斷面平 坦或呈顆粒狀。外層栓皮黃棕色,內層類白 色。氣微香,味微甜而後稍苦。

二、組織鏡檢

㈠五加皮之根皮橫切面:(圖2.1~2.3) 1. 木栓層為數層木栓細胞組成。

2. 皮層窄,栓內層具分泌道散生。

3. 韌皮部射線寬1~8列細胞。

4. 分泌道周圍分泌細胞4~11個。

5. 薄壁細胞含多數草酸鈣簇晶及細小澱粉

粒。

㈡紅毛五加之莖皮橫切面:(圖2.4~2.5) 1. 表皮細胞1層,類方形,外被角質層。

2. 皮刺由纖維及厚壁細胞組成。

3. 下皮細胞多層,大小相差懸殊,具斜向紋 kl

ca

sc mph

圖2.1 五加皮橫切面組織圖

sc

2.2 五加皮分泌道

ca

圖2.3 五加皮簇晶(偏光)

epl

kl co p

ca

2.5 紅毛五加簇晶(偏光) 2.4 紅毛五加橫切面組織圖

(6)

孔。

4. 厚角細胞多切向增厚。

5. 木栓層3~4層,細胞類長方形。

6. 薄壁細胞偶見草酸鈣簇晶。

㈢香加皮之根皮橫切面:(圖2.6~2.8)

1. 木栓細胞棕黃色,3~30層細胞,多角形。

2. 栓內層寬厚,細胞多切向延長,薄壁細胞 中含草酸鈣方晶,有石細胞及乳汁管。

3. 射線寬1~5列細胞,韌皮部乳汁管較多。

4. 薄壁細胞中含草酸鈣方晶及細小澱粉粒。

㈣地骨皮之根皮橫切面:(圖2.9~2.10) 1. 外側有2~3條木栓組織帶。

2. 韌皮部佔根皮的主要部分,由類圓形的薄 壁細胞、篩管、韌皮纖維和石細胞組成。

3. 石細胞散佈於韌皮部外側,多單個存在,

呈類圓形,壁木化或微木化。

4. 纖維單個或成束存在,壁木化或微木化。

5. 薄壁細胞類圓形,內含澱粉粒或草酸鈣砂 晶,澱粉粒多為單粒。

kl cr lt

mph

lt

cr 2.6 香加皮橫切面組織圖

2.7 香加皮樹脂道

2.8 香加皮方晶(偏光)

kl

obs

2.9 地骨皮橫切面組織圖

cd

2.10 地骨皮橫切面組織圖(偏光)

(7)

三、解離要素

㈠五加皮:粉末呈棕色。(圖3.1~3.4) 1. 具草酸鈣簇晶。

2. 木栓細胞長方形或多角形。

3. 分泌道碎片有時含無色或淡黃色分泌物。

4. 澱粉粒甚多,單粒多角形或類球形,複粒 由2~10個分粒組成。

㈡紅毛五加:粉末呈紅褐色。(圖3.5~3.10) 1. 皮刺纖維類長條形,具斜向紋孔。

2. 下皮細胞大小不規則,壁微木化,具斜向 紋孔。

3. 木栓細胞類長方形,排列整齊。

4. 纖維細長形,壁厚,孔紋及孔溝不明顯。

5. 偶見草酸鈣簇晶。

㈢香加皮:粉末呈灰褐色。(圖3.11~3.12) 1. 具草酸鈣棱晶或方晶。

2. 石細胞長方形或類多角形。

3. 乳汁管含油滴狀顆粒。

4. 木栓細胞棕黃色,多角形,可見纖維束。

5. 澱粉粒甚多,單粒類圓形或長圓形,複粒 由2~6分粒組成。

㈣地骨皮:粉末呈褐色。(圖3.13~3.16) 1. 具草酸鈣砂晶。

2. 石細胞稀少,呈類圓形,壁木化或微木

3.1 五加皮之木栓細胞 3.2 五加皮之網紋導管

3.3 五加皮之簇晶 3.4 五加皮之薄壁細胞

(8)

3.5 紅毛五加之皮刺纖維 3.6 紅毛五加之纖維

圖3.7 紅毛五加之木栓細胞 圖3.8 紅毛五加之厚壁細胞

3.9 紅毛五加之下皮細胞 3.10 紅毛五加之薄壁細胞

(9)

3.11 香加皮之方晶 3.12 香加皮薄壁細胞

圖3.13 地骨皮之石細胞 圖3.14 地骨皮之砂晶

3.15 地骨皮之薄壁細胞 3.16 地骨皮之纖維

(10)

化。

3. 纖維長梭形或紡錘型,末端圓鈍,壁木化 或微木化,可見稀疏斜孔紋。

4. 木栓細胞棕色,多角形。

5. 澱粉粒甚多,單粒類圓形或長圓形,可見 點狀臍點,複粒由2~8分粒組成。

四、薄層層析法

五加皮、紅毛五加、香加皮與地骨皮之檢 液及eleutheroside B1標準品液點注於層析板上,

以正丁醇:水:醋酸(7:2:1,v/v)混合液 展開,展開後風乾,再噴Vanillin/H2SO4 spray reagent,105℃加熱2分鐘後,以U.V. 366 nm觀 察。正品五加皮在Rf 值0.49處與eleutheroside B1 有相對應紅色斑點,紅毛五加、香加皮與地骨皮 因不含此成分故無對應斑點;紅毛五加在Rf 值 0.14處有藍色斑點,香加皮在Rf 值0.27及Rf 值0.46 處,分別有咖啡色及棕黃色斑點,地骨皮在Rf 值 0.21、Rf 值0.27及Rf 值0.38處,均有藍色斑點。

以可見光觀察,正品五加皮在Rf 值0.49處與eleu- theroside B1 有相對應藍紫色斑點,紅毛五加、

香加皮與地骨皮則無此藍紫色斑點;另香加皮在 Rf 值0.27及Rf 值0.46處,分別有棕色及黑棕色斑 點,紅毛五加與地骨皮則無任何斑點。結果顯 示,此TLC 條件可用來區分此四種藥材。另取得 2件已於95年利用PCR-DNA定序方法鑑定其基原 之市售含五加皮濃縮製劑2件,以相同條件展開,

發現不含eleutheroside B1,且與香加皮對照藥材 有相對應之斑點,故判定此2件濃縮製劑中含有香 加皮而非正品五加皮,此結果與 PCR-DNA定序 方法之鑑定結果相符,可見此TLC方法不僅適用 於藥材,也可應用於製劑之鑑別(圖4.1~4.2)。

綜合上述結果,正品五加皮之表皮具有橫長 皮孔,且表皮不易脫落,橫切面之組織可見分泌 道及眾多簇晶;紅毛五加表皮密被黃棕色毛刺,

橫切面之組織可見簇晶;香加皮表皮易脫落且具 特異香氣,橫切面之組織可見乳汁管及眾多方 晶;地骨皮表皮易脫落,橫切面之組織無分泌 道或乳汁管,但可見眾多砂晶。而TLC鑑別方法 中,可利用 eleutheroside B1之有無來判定是否為 正品五加皮。茲將上述五加皮、紅毛五加、香加 皮及地骨皮之性狀、組織、粉末特徵及性狀檢索 表,歸納如表一、二、三、四供為鑑別之用。

利用上述鑑別要點進行市售五加皮藥材之鑑 別,結果發現16件中藥廠檢體,7件(43.7%)為

1 2 3 4 5 6 7 圖4.1 薄層層析圖譜

1.五加皮正品 2. eleutheroside B1 3.紅毛五加 4.香加皮 5.地 骨皮 6.五加皮製劑 7.五皮飲

1 2 3 4 5 6 7 圖4.2 薄層層析圖譜

1.五加皮正品 2. eleutheroside B1 3.紅毛五加 4.香加皮 5.地 骨皮 6.五加皮製劑 7.五皮飲

(11)

表一、五加皮與其誤用品之性狀比較表 藥材

性狀

五加皮 紅毛五加 香加皮 地骨皮

表皮 不易脫落 不易脫落 易呈鱗狀剝落 易呈片塊狀剝落

表面 具縱皺紋及橫長皮孔 密被黃棕色毛刺 鬆軟呈鱗片狀 具不規則裂紋

斷面 斷面粗糙,具紅棕色小點 斷面粗糙,外層棕色,

內層淺褐色

斷面光滑,外層棕色,

內層淺褐色 外層成層疊狀

表二、五加皮與其誤用品之組織特徵比較表 藥材

項目

五加皮 紅毛五加 香加皮 地骨皮

木栓層 7~14列 3~4列 15~30列 與落皮層交錯堆疊

栓內層 具排列成環之分泌道 具排列成環之分泌道 具乳汁管 不具分泌道、乳汁管

結晶體 眾多簇晶 偶見簇晶 方晶 砂晶

射線 外側彎曲 較平直 外側平直 較平直

韌皮部 分泌道排列成環,無石細胞 分泌道排列成環,無石細胞 石細胞成群 石細胞單個

表三、五加皮與其誤用品之粉末特徵比較表 藥材

項目

五加皮 紅毛五加 香加皮 地骨皮

木栓細胞 類長方形,老根皮細胞壁增厚 類長方形 類方形 表面多角形、垂周壁平直

或微波狀

結晶體 草酸鈣簇晶 草酸鈣簇晶 方晶 砂晶

澱粉粒 單粒球形或橢圓形 單粒類圓形、複粒2~6分粒 眾多;單粒球形或橢圓形、

複粒3~8分粒

石細胞 偶見,類圓形或三角形 具孔紋及孔溝,壁不甚厚

附註:藥材組織圖略字表

略字 術語 中文名

ca Clustered crystal 簇晶 cd Crystal sand 砂晶 co Collenchyma 厚角組織

cr Crystal 結晶

epl Lower epidermis 下表皮 kl Cork layer 木栓層 lt Latex tube 乳汁管 mph Phloem medullary ray 韌皮射線

obs Obliterated sieve 頹廢篩部 p parenchyma 柔組織 sc Secretory canal 分泌道 五加皮,7件(43.7%)為香加皮,2件(12.6%)

為紅毛五加;24件中藥房檢體中,1件(4.2%)

為五加皮,23件(95.8%)為香加皮;3件大陸檢 體,1件(33.3%)為五加皮,2件(66.7%)為 香加皮。上述檢體均再以PCR-DNA定序方法(21) 表四、五加皮類藥材之檢索表

1.表皮易剝落

2.具草酸鈣方 晶香加皮Periplec sepium 2.具草酸鈣砂 晶地骨皮Lycium chinense 1.表皮不易剝落

2.具草酸鈣簇晶

3.具橫長皮孔 細柱五加Acanthopanax gracilistylus 3.具棕色毛刺 紅毛五加Acanthopanax giraldii

(12)

確認基原無誤,顯示本計畫所建立之五加皮與其 誤用品之性狀、組織與TLC鑑別法之準確度與可 信度。由結果得知,藥房誤用情形嚴重,中藥廠 誤用情形雖較前者低,但仍有56.3%誤用率。整 體而言,市售43件檢體中,9件(20.9%)為五加 皮,32件(74.4%)為香加皮,2件(4.7%)為紅 毛五加。

結 論

市售43件檢體中,9件(20.9%)為五加皮,

32件(74.4%)為香加皮,2件(4.7%)為紅毛五 加,誤用情形嚴重,且香加皮具有強心杠柳毒苷

(Periplocin即Glycoside G)之毒性成分,對用藥 安全影響甚鉅,應詳加鑑別,並予以導正。

本計畫所建立五加皮藥材之生藥學與薄層層 析法之鑑別方法,可供行政機關之業務執行及藥 廠品管或中藥材業者藥材鑑別之參考,以確保使 用中藥材之正確性及安全性。

參考文獻

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Studies on Adulteration and Misusage of Acanthopanacis Cortex in Market

YA-HUI HSU, TSAI-YU WEN, FANG-SU LIU, CHI-FANG LO AND JER-HUEI LIN

PHARMACOGNOSY DIVISION

ABSTRACT

Alternatives and adulterants of raw materials may affect the therapeutic efficacy of Chinese medicinal preparations, and pose harm to health. Therefore, authentic raw materials are the priority issue for the safety and quality of traditional Chinese medicines.

The botanical origin of Acanthopanacis Cortex is dried root bark of Acanthopanax gracilistylus. According to literatures, there are a number of alternatives and adulterants, such as Periploca sepium Beg., Acanthopanax

giraldii Harms., and Lycium chinense Mill, etc. In order to identify the botanical origins of commercial

Acanthopanacis Cortex in Taiwan, forty-three samples were purchased from market and were distinguished from authentic materials by morphology, microscopy, thin layer chromatographic analysis and DNA sequencing.

The results showed that 9 out of 43 samples (20.9%) were A. gracilistylus, 32 samples (74.4%) were P.

sepium and 2 samples (4.7%) were A. giraldii. According to the results, the adulteration of Acanthopanacis

Cortex in market is very serious.

key words: Acanthopanax gracilistylus, Periploca sepium, Acanthopanax giraldii, identified

數據

圖 3.9 紅毛五加之下皮細胞 圖 3.10 紅毛五加之薄壁細胞
圖 3.15 地骨皮之薄壁細胞 圖 3.16 地骨皮之纖維

參考文獻

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