[PDF] Top 20 克雷白氏肺炎桿菌中纖毛表現之分析

... 的活性在添加葡萄糖或甘油的培養環境下皆有顯著上升的情形。相對地，在高滲 透壓力、過氧化物的存在，或偏鹼環境的刺激下，都造成活性的降低。 另一方面，我們在 kpd 基因組上游找到一個未知功能的基因，經由胺基酸 序列比對（BLAST），我們認為其轉譯蛋白可能以雙分子訊息傳遞系統中調控子 ... See full document

... 以SDS-PAGE 分析可以偵測到 kpb 和 kpc纖毛的表現，目前在準備製造 KpbA和KpcA抗體，未來將以免疫螢光顯微鏡觀察來確認二者的表現；另 外，我們還把八套纖毛的黏附蛋白基因選殖置換第三型纖毛表現載體上的 ... See full document

... 找尋新的藥物標的，並希望此研究能對當前治療對策有所幫助。藉由日本 KEGG 資料庫 （http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway/）雙分子系統的分類，我們分析華盛頓大學基因體中 心（Genome Sequencing Center, St. Louis, Missouri, ... See full document

... 基因型。而藉穿透式電子顯微鏡來觀察這些重組大腸桿 菌表現的纖毛，我們發現mrkD基因型的變異會影響第三型纖毛的長度和型態。 同時，測試這些重組細菌黏附第四型和第五型膠原蛋白的能力、生物膜的形成與 ... See full document

... 在研究所的兩年當中，讓我覺得成長許多且收獲豐富的兩方面，做事的態度 以及實驗的技巧。這有太多太多都必須感謝彭老師了，在討論的時候很尊重我們 的想法，卻又不辭辛苦的仔細教導，非常仔細的修改我的論文，然而最讓我佩服 和感謝的是老師那認真的教學態度，更是我常常努力想要達到的目標，我覺得這 是老師給我最珍貴的寶藏。非常感謝口試委員林志生老師和鄧文玲老師撥空參 加，並且花了許多的時間巨細靡遺的修改了我的論文以及提供許多寶貴的建議， ... See full document

... 3. 為了瞭解克雷白氏肺炎桿菌調控如何這九種纖毛的表現，我們已分別將這 九套纖毛基因子的起使子轉殖到LacZ通報系統，以及製備了九種Balb/c小 鼠抗體，可分別偵測九種纖毛的主要結構蛋白質。 4. (1) ... See full document

... 計畫成果自評: 本計畫在六各月的執行過程中，順利的完成各項的基因構築的工作，其中 fur 的互補株的構 築完成也能進一步確認 fur 突變後對於 Kp 顯型方面的專一性影響，而在探討 Fur 對於 cps 基因啟動子調控上的影響，我們也順利跟 Dr. Hantke 拿到 H1717 來偵測大腸桿菌中 Fur 對 於所構築出來的啟動子序列的結合能力，因此我們分別將 K1 和 K2 ... See full document

... 20 四、討論 鐵離子是生物體內重要的一個金屬離子，對而言，鐵離子也扮演許多酵素或 蛋白質的重要輔助因子，多以二價鐵離子來控制許多重要生理反應。環境中鐵離 子多以三價型態存在，細菌以運鐵系統將三價鐵離子運進細胞內再以氧化還原方 應轉成二價鐵離子，同時釋放氧化自由基。所以，在細胞內堆積過多的鐵離子反 而造成氧化壓力，細菌以 Fur 轉錄因子來壓制運鐵系統而達到調節細胞內鐵離子 ... See full document

... 呈現和母株 LacZ16 相同的生長速率及菌體黏度。將含有 kvhA 的質體轉型入 kvhA - kvhR - 雙基因突變株，我們發現 kvhA - kvhR - 突變株會由第二群轉成第一群； 且同時含有 kvhA 及 kvhR 基因突變時，細菌對人類血清的抵抗能力下降。這些結 果顯示 KvhA 和 KvhR ... See full document

... 最後，我們利用細胞吞噬試驗來探討這些基因是否能幫助細菌增加在感 染寄主時的存活率；由於在細胞內含有一些陽離子性縮氨酸能幫助增加免疫 反應，這些陽離子性縮氨酸的抑菌機制大致和多黏菌素相似(35)，我們使用 的巨噬細胞株為免疫反應上的第一道防線，主要負責將侵入物吞噬後進行溶 解並呈現抗原及分泌一些刺激因子促進後續的免疫反應，因此細菌在受到巨 ... See full document

... 於克雷 白氏肺炎桿菌裡並非直接和抗酸的作用有關，推測其真正行使抗酸功能還是 得經由 Asr。此外，在大腸桿菌的研究中，他們發現 asr 缺損株在 pH ...LPM 中的生長情況和野生株相比有明顯的差異，而在酸逆境中，asr 缺損株 ... See full document

... Functional analysis of the two-component systems KvgAS, KvhR and KvhAS in Klebsiella pneumoniae CG43. 研究生: 林靖婷 Student: Ching-Ting Lin[r] ... See full document

... 影響：利用抗MrkA的血清進行西方墨點法分析和酵母菌凝集試驗顯示：位於此二纖 毛基因組間的pecS或pecM基因缺損會提升第三型纖毛的表現；而可以轉譯成EAL功 能蛋白的mrkJ（KP4551）和PilZ功能蛋白的mrkH（KP4554）基因缺損對MrkA蛋白 ... See full document

... 活性也相對減少；而在截短 yfiD 啟動子上的一個 RpoS 結合序列後， 受 RpoS 基因缺損影響的現象即消失。我也利用膠體遲滯電泳分析， 證實 KvhA 直接黏附 yfiD 啟動子而達到正向轉錄調控的作用。進一 步，我還選殖了 yfiD 基因並將 yfiD 殖入大腸桿菌表現系統來大量表 ... See full document

... kpg 纖毛。先前實驗室建立第三型纖毛表現系統，並以此系 統表現 MrkD 以外的黏附蛋白，藉以探討這些未知黏附蛋白的活性。本 論文除了以免疫螢光標定証實此重組纖毛結構蛋白的表現外，還以血球 凝集試驗確認 KpfD 凝集天竺鼠紅血球的能力，及可被 ... See full document

... 啟動子 中 pecO-like 序列結合，因此推測第三型纖毛可能直接受到 PecS 之負向調控。但 本次研究結果發現若將 pecS 剔除後，無論是在第三型纖毛之蛋白質表現層次或 其啟動子之活性皆無明顯上升，甚至可能有些微下降，推測可能 PecM 抑制第三 ... See full document

... pD27-3，pD27-4，pD27-5 分別轉殖到大腸桿菌 JM109。接著，以西 方墨點法分別以 MrkA 和 DEN2EDIII 多株抗體偵測的結果顯示：雖 有不同程度的表現差異，這些重組質體皆可表現帶有 DEN2EDIII 抗 原的重組線毛單體，而此重組的單體蛋白也可組裝成多體的線毛結 ... See full document

... 感染過程中，如何抵抗過氧化的逆境壓力，是決定細菌毒性的重要因子。 我們曾報導克雷白氏肺炎桿菌 CG43 在老鼠活體表現的 YjcC 蛋白可被 10 μM 巴拉刮所誘導，同時，基因結構分析顯示過氧化逆境的兩個主要調控基因 soxS 和 soxR 座落於 yjcC ... See full document

... 性關聯性的菌株，可找出細菌毒性或易形成抗藥性的決定因子。利用多位點核酸序列分型技術建立一 菌株資料庫，未來可作為研究高毒性菌株或多重抗藥性的基礎。另外利用次世代基因體定序已篩選出 可能的碳青黴烯抗藥基因，已經或正在將這些基因進行 cloning 或基因剔除，將進一步進行分析確定 其與碳青黴烯抗藥性的關聯性。目前我們已完成分屬兩個 clones 的 5 ... See full document

... CG43 中扮演的角色，我們建構了 fur 基因缺損株，此基因 缺損明顯影響細菌生長。有趣的是， fur 突變株菌落相較於野生株顯得比較黏稠， 透過莢膜多醣定量顯示 fur 突變株莢膜明顯增量；進一步分析啟動子活性，我們 發現莢膜多醣合成基因組 orf3-15 表現量因 fur 基因缺損而增加；而 fur ... See full document